蛋白质制剂制造技术

本发明专利技术提供包含通过降低分子快速聚集的倾向而部分提高其稳定性的变异Ｆｃ区的蛋白质的制剂。本发明专利技术提供液态和冻干制剂以用来产生适合给予对象的高蛋白质浓度液体。本发明专利技术还提供利用本发明专利技术制剂治疗性或预防性治疗疾病和失调或将其用于诊断目的的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明蛋白质制剂 1.专利
本专利技术提供提高蛋白质，具体是含有变异Fc区的蛋白质(如抗体或Fc融合蛋白)的制剂。具体说，本专利技术提供pH为5.5-8、含有1-50mM缓冲剂和至少一种或多种下述物质的的Fc变体制剂约1-15％重量/体积的糖赋形剂、约1-400mM的阳离子氨基酸和约1-200mM的阴离子。本专利技术也提供pH约为5.5-8、含有约100mM-300mM的阴离子缓冲剂和约5-20％重量/体积的糖赋形剂的Fc变体制剂。本专利技术制剂包含无菌液态制剂和预冻干散装制剂。 2.
技术介绍
抗体是结合特定抗原的免疫蛋白。在大多数哺乳动物，包括人和小鼠中，抗体由成对的重链和轻链多肽构成。各链由两个不同区域组成，称为可变区(Fv)和恒定区(Fc)。轻链和重链Fv区含有该分子的抗原结合决定簇，负责结合靶抗原。Fc区确定了抗体类型(或同种型)(如IgG)，并负责结合许多Fc受体和其它Fc配体，赋予一系列重要功能，称为效应物功能。 IgG类型Fc受体的一个重要家族是Fcγ受体。这些受体介导免疫系统的抗体和细胞臂之间的通信(Raghavan等，1996，Annu Rev Cell Dev Biol12181-220；Ravetch等，2001，Annu Rev Immunol 19275-290)。在人中，这一蛋白质家族包括FcγRI(CID64)；FcγRII(CD32)和FcγRIII(CID16)(Jefferis等，2002，Immunol Lett 8257-65)。这些受体一般含有介导与Fc结合的胞外区、跨膜区和可介导一些细胞内信号转导事件的胞内区。Fc/FcγR复合物的形成将效应物细胞征集到结合抗原的位点上，一般导致细胞内信号转导事件和重要的后续免疫应答，如释放炎症介导物、B细胞激活、胞吞作用、吞噬作用和细胞毒性攻击。表达FcγR的非特异性细胞毒细胞识别靶细胞上结合的抗体、随后引起靶细胞裂解的这一细胞介导的反应被称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)(Raghavan等，1996，Annu Rev CellDev Biol 12181-220；Ghetie等，2000，Annu Rev Immunol 18739-766；Ravetch等，2001，Annu Rev Immunol19275-290)。Fc区也与新生Fc受体(FcRn)相互作用。此种受体用作抗体回收的补救受体(Ghetie等，1997，Immunol.Today，18592-598)并能调节血清半衰期。 另一种重要的Fc配体是补体蛋白C1q。结合于C1q的Fc能介导称为补体依赖性细胞毒作用(CDC)(综述见Ward等，1995，Ther Immunol 277-94)的过程。C1q能够结合六种抗体，但结合于两种IgG足以激活补体级联反应。C1q与Clr和C1s丝氨酸蛋白酶形成复合物，以形成补体途径的C1复合物。 抗体的几种关键特征包括但不限于靶点特异性、介导免疫效应物机制的能力和长血清半衰期，使抗体具有更好的疗效。目前正在开发许多单克隆抗体，用于治疗各种疾病，包括癌症。例如伊塔木单抗(etaracizumab)(维他辛(Vitaxin) 、米迪缪尼公司(MedImmune))、人源化整联蛋白αvβ3抗体(如PCT公开WO2003/075957)、贺赛汀 (基因泰克公司(Genentech))、批准用于治疗乳腺癌的人源化抗-Her2/neu抗体((如美国专利5,677,171)、CNTO95(森拓科公司(Centocor))、人整联蛋白αv抗体(PCT公开WO02/12501)、利妥昔 (IDEC/基因泰克/罗氏公司(Roche))、批准用于治疗非霍奇金淋巴瘤的嵌合抗-CD20抗体((如美国专利5,736,137)和艾比特斯 (免疫克隆公司(ImClone))、嵌合抗-EGFR抗体((如美国专利4,943,533)。此外，Fc区介导免疫效应物功能和稳定血清半衰期的作用使其成为用于产生抗体样Fc融合蛋白的区域(Chamow等，1996，Trends Biotechnol 1452-60和Ashkenazi等，1997，Curr Opin Immunol9195-200)。Fc区融合蛋白合并了抗体fc区和配体的靶标结合区、受体或介导靶标识别的一些其它蛋白质区域，因此它具有有利的效应物功能和药代动力学特性。Fc融合蛋白也用于治疗和/或正在开发用于治疗各种疾病，包括关节炎(例如依坦西普(Enbrel) ，TNFR-Fc融合蛋白)、多发性硬化(IFNβ1a-Fc融合蛋白)、贫血(EPO-Fc)和血友病(FVIII-Fc和FIX-Fc)。 已证明改变Fc区与其各种受体和配体的结合可调节Fc区的下游活性。例如，提高Fc区与FcRn的结合亲和力能提高该分子的血清半衰期(Kim等，Eur.J.Immunol.，242429-2434，1994；Popov等，Mol.Immunol.，33493-502，1996；Ghetie等，Eur.J.Immunol.，26690-696，1996；Junghans等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，935512-5516，1996；Israel等，Immunol.，89573-578，1996；和美国专利公开2003/0190311)。同样，提高Fc区与FcγRIIIA的结合亲和力能提高该分子的ADCC活性(Shields等，2001，J Biol Chem 2766591-6604和Presta等，2002，Biochem Soc Trans 30487-490)。包括氨基酸缺失、取代和加入在内的修饰以及Fc区的糖基化改变能够改变Fc区与其配体和/或受体的结合，导致效应物功能伴随着改变(参见例如Shields同上，Presta同上，和美国专利公开2004/0132101)。因此，可通过修饰Fc区改进含Fc分子的治疗有效性和/或药代动力学特性。然而，如下所述，修饰Fc区也可导致不良结果，如稳定性、溶解度或结构完整性降低。稳定性、溶解度或结构完整性降低代表了根据治疗性或预防性给药开发稳定的高浓度制剂的挑战。因此，需要适合胃肠道外给予对象的能稳定含有感兴趣修饰Fc区的蛋白质(如抗体或Fc融合蛋白)的制剂。 不应认为对本文所述参考文献的引用或讨论意味着承认这些参考文献是本专利技术的现有技术。 3.专利技术概述 本专利技术部分基于与含有天然产生的Fc区(也称为“野生型Fc区”)的相同蛋白质相比，含有非天然产生的Fc区的蛋白质(如抗体或Fc融合蛋白)更易于快速聚集的发现。通过(例如)大小排阻色谱(SEC)测得这种聚集。本专利技术也部分基于对含有非天然产生的Fc区的蛋白质制剂的鉴定，这种制剂提高了所述蛋白质的稳定性，并且适合胃肠道外给予对象。虽然本专利技术制剂尤其可用于稳定含有非天然产生的Fc区的蛋白质，但也考虑到将本专利技术制剂用于提高易于快速聚集的许多蛋白质的稳定性。这类制剂提供多项优点，包括在纯化/填充/精整过程中限制性温度要求降低、运输/储存条件的严谨性降低或更易于实现，以及在这类制剂的治疗、预防和诊断应用中所需的给药频率降低或剂量减少本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有Ｆｃ变异蛋白、浓度为１－１００ｍＭ的缓冲剂、还包含一种或多种组分的液态制剂，所述一种或多种组分选自：　（ａ）浓度为１－２０％重量／体积的糖赋形剂；　（ｂ）浓度为１－４００ｍＭ的阳离子氨基酸；　（ｃ）浓度为１－２００ ｍＭ的阴离子；和　（ｄ）浓度为０．００１－０．１％的聚山梨酯，　其中，所述制剂的ｐＨ约为５．５－８。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C阿伦，W里奇，S常，S毕晓普，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]