本发明专利技术涉及融合蛋白，其包含对于癌胚纤连蛋白（ＥＤ－Ｂ）的胞外域或癌胚生腱蛋白的至少一种胞外域具有特异性结合亲和性的抗体、其功能性片段或功能性衍生物，所述的抗体、其功能性片段或功能性衍生物融合于选自（ａ）ＩＬ－１０，（ｂ）ＩＬ１５，（ｃ）ＩＬ－２４和（ｄ）ＧＭ－ＣＳＦ、其功能性片段和功能性衍生物的细胞因子。本发明专利技术还涉及至少一种所述融合蛋白在制备药剂中的用途。更具体地，本发明专利技术涉及所述药剂用于治疗肿瘤或慢性炎性疾病的用途，例如动脉粥样硬化，关节炎和银屑病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及融合蛋白，所述融合蛋白包含与下述细胞因子相融合 的抗体、其功能性片段和其功能性衍生物，所述的抗体及其功能性片段或其功能性衍生物对癌胚纤连蛋白(oncofetal fibronectin; ED-B) 的胞外域或癌胚生腱蛋白(oncofetal tenascin )的至少一种胞外域具有 特异性结合亲和性，所述细胞因子选自IL-10, IL15、IL-24和GM-CSF。 本专利技术还涉及至少一种所述融合蛋白在制备药剂中的用途。特别是， 本专利技术涉及所述药剂用于治疗肿瘤或慢性炎性疾病，例如动脉粥样硬 化，关节炎和银屑病的用途。专利技术相关领域细胞因子是免疫调节蛋白，其中的一些已经在预临床和临床应用 于对抗癌症，以及干扰t曼性炎性病症和感染性疾病。重组细胞因子的治疗潜力经常因其严重的副作用受到限制，甚至 在低浓度下也是如此，所以阻碍了在目标组织施以足够的细胞因子浓 度。最近，单克隆抗体被应用于靶向和递送细胞因子到疾病位点以提 高它们的效价，使正常组织免受毒性影响。事实上，人们已对大量的 抗体-细胞因子融合蛋白进行研究，以将其应用于癌症治疗，通常具 有良好的结果。例如，应用特异于纤连蛋白(血管发生标记物)的ED-B 域的人抗体L19递送促炎细胞因子(例如，IL-2, IL-12或TNF)到实 体瘤，有时具有显著的治疗效果。然而，当用作单独试 剂或作为与单克隆抗体的融合配体时，许多细胞因子具有临床失败的 历史。例如，重组IL-2 ( "Proleukin" ， Chiron)已被批准用于治疗具有 肾细胞癌的病人，但是对于这种适应症的应答率，典型地较低的(通 常低于20% ),并且对于其他类型的癌症甚至更低。其他细胞因子(例 如白介素-12或白介素-10,见下述)在一系列研究中没有显示出实 质的效率，其减緩了临床研究计划。这些细胞因子仍然没有批准为生(治疗慢性肉芽肿病，Genentech),其没有显示出对于其他适应症的 实质的治疗效果。当与抗体相融合时，更是无法预知是否在治疗指数上显示显著效果。例如，在大量的临床测试中，抗-GD2抗体-IL2融合EMD273063 并没有显示明显的治疗效果，最近的但并非最不重要的一次是针对具 有成神经细胞瘤进行的(Osenga等，Clin. Cancer Res. Mar 15; 12(6): 1750-9 (2006))。白介素-10( IL-10)是一种由活化的单核细胞和T细胞产生的同 源二聚体细胞因子，其与炎性反应和免疫反应的调节密切相关。已详尽描述了它作为免疫反应的阻尼器(dampener)的主要总体功能，但 是IL-10还具有刺激活性。IL-10最初被描述为细胞因子合成抑制因子 (CSIF),是小鼠Th2细胞产生的活性物质，其抑制Thl细胞的活化 和Thl细胞产生细胞因子。编码人IL-10的基因位于染色体1上并且翻译出包含160个氨基酸、分子量为18.5 kDa的蛋白。人IL-10作为37kDa的非-二硫键连接同源二聚体发挥 活性。基于其有效的体外免疫调节活性，以及已证明的在急性和慢性炎症、自身免疫、癌症和感染性疾病的动物;漠型中的效果，IL-10已#皮 认为是大有希望用于治疗用途的候选物。Schering-Plough研发了用于 临床试验的重组人IL-lO(ilodecakin, Tenovil )。该蛋白在大肠杆菌中 生产、由161个氨基酸组成，除了氨基末端的甲硫氨酸残基之外，其 与内源性人蛋白相同。研究通过静脉内或皮下途径给予的单个或多个 剂量的IL-10的安全性，耐受性，药物代谢动力学，药效学，免疫学 和血液学效果的1期和2期临床试验已经在多种设置下，对健康自愿 者和特定的患者群体中进行。然而由于所述化合物缺乏功效，临床研发已经停止。 最近，已公布的数据可至少部分地解释IL-10治疗的困境。Tilg等发 现高剂量的IL-10上调了 IFN-y和新蝶呤的生产，因此平衡了其免疫 抑制性质。该作者认为全身给药huIL-10的治疗作用受到细胞因子促 炎效应的限制，并且建议可通过不引起全身IL-10浓度的、提高的、 有效的粘膜递送方法避开这一问题。白介素-15 (IL-15 )是包含114个氨基酸的一种4a-螺旋束家族 细胞因子的、14到15 kDa的成员。特别的，IL-15蛋白被抑制翻译 的多种控制元件转录后调节，包括5，非翻译区域(UTR)的12种上 游AUGs， 2种不常见的信号肽(具有21个氨基酸的短肽停留在细胞 内，具有48个氨基酸的长肽用于分泌)和成熟蛋白的C-末端。在人和猿的IL-15之间具有 97%的序列同一性，在人和小鼠之间具有73%的序列同一性。由此， 足以保证huIL-15对猿和鼠细胞具备生物学活性。IL-15利用了两种不 同的受体和信号途径。由IL-2/15J3, Yc和IL-15Ra亚基组成的高亲和 性IL-15R系统在T和NK细胞上表达。IL-2/15R p和yc亚基共享IL-2 受体。肥大细胞对IL-15产 生应答是通过新的60到65 kDa IL-15RX亚基的受体系统，该受体系 统与IL-2受体没有共享的部分。多种组织例如胎盘、骨骼肌、肾、成 纤维细胞、上皮细胞、树突状细胞和单核细力包表达IL-15。IL-15刺激促炎细胞因子(例如，TNFa, IL-1，IFN力的生产，活化 B细胞的增殖和Ig合成，TH1、单核细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞 的活化，肥大细胞和T细胞的增殖，并且抑制T和B细胞的细胞凋亡。 除了提到的功能活性之外，IL-15在NK细胞的发育，存活和功能中 起关键作用。体内研究显示外源IL-15增强了肿瘤反应性CD8+ T细胞的抗 肿瘤活性。已经寺艮道了在炎性、肺瘤性疾病和自身免疫疾病，例如类风湿性 关节炎，溃疡性结肠炎，Crohn's疾病和多发性>哽化症中有异常的高 水平IL-15表达。由于IL-2和IL-15利用相同的受体,因此具有共同的特征。主要 的区别在于它们合成和分泌的位点。IL-2是由活化的T细胞产生，而 IL-15在上述多种组织中表达。IL-2可促进细胞凋亡和限制CD8+记忆 T-细胞存活和增殖，而IL-15帮助维持记忆CD8+群并且可抑制细胞凋 亡。起初人们认为IL-15介导与IL-2类似的生物学效应，但在基础和 临床前研究中已表明IL-15具有独特的性质，可能在癌症的免疫治疗6中是有益的。而且，IL-15的毒性情况(profile)与IL-2非常相似，因此暗示了，就治疗指数而言， IL-15的耙向递送优于全身递送。鉴定负责与IL-15受体结合的IL-15表位的研究揭示出显示激动 剂或拮抗剂性质的IL-15突变体，其可能用作治疗试剂。 IL-15突变体IL画15D8S和 IL-15Q108S在CTLL-2生物测试中是无活性的，但是能够竟争性抑制 未经修饰的IL-15的生物学活性。黑素瘤分化相关基因-7 ( mda-7 = IL-24 )在1990，s因其在黑素 瘤分化过程中被诱导的性质首次被鉴定出来。它是IL-10家族细胞因 子的成员。IL-24基因cDNA编码206个氨基酸23.8 kDa的蛋白。在 人细胞中，由于严重的N-糖基化，分泌的蛋白具有比细胞内蛋白(30/23 kDa)本文档来自技高网...
【技术保护点】
融合蛋白，其包含： （ｉ）对癌胚纤连蛋白（ＥＤ－Ｂ）的胞外域或癌胚生腱蛋白的至少一种胞外域具有特异性结合亲和性的抗体、其功能性片段或其功能性衍生物，所述的抗体、其功能性片段或其功能性衍生物融合于 （ｉｉ）选自（ａ）ＩＬ－１０，（ ｂ）ＩＬ１５，（ｃ）ＩＬ－２４和（ｄ）ＧＭ－ＣＳＦ、其功能性片段和其功能性衍生物的细胞因子。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：D内里，M卡斯帕，E特拉克塞尔，
申请(专利权)人：菲洛根有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]
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