一种I‑IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种I‑IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法，将登革病毒标准株进行RT‑PCR扩增，分别得到I‑IV型登革病毒的NS1全基因，再与pMD19T载体连接，然后进一步得到pET30a‑NS1质粒，将所得pET30a‑NS1质粒转化到大肠杆菌BL‑21中，然后通过表达纯化，分别得到I‑IV型登革病毒的NS1重组蛋白。所得I‑IV型登革病毒的NS1重组蛋白应用于I‑IV型登革热的四联疫苗。使用四种不同型的NS1蛋白抗原，能同时预防四个型别的登革病毒。并预先使用了对人体安全性较好、免疫促进作用较强的氢氧化铝佐剂作为疫苗佐剂，其效果和安全性有一定的保障。

【技术实现步骤摘要】
一种I-IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法及其应用
本专利技术属于预防生物制品学领域，具体涉及一种I-IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法及其应用。
技术介绍
登革病毒(Dengusvirus，DENV)属于黄病毒科黄病毒属，包括4个血清型，即登革Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型病毒。登革病毒主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播。感染患者表现出持续2-7天的高热，并伴有头痛，全身乏力，恶心，呕吐，肌肉痛和腹痛。世界卫生组织将感染了登革病毒患者的临床症状分类为登革热(DF)、登革出血热(DH)和登革休克综合征(DSS)，其中登革出血热和登革休克综合征能引起高的死亡率。近年来，由于全球气候变暖、人口流动频繁等因素，作为病毒传播媒介的伊蚊扩散到世界各地，登革热在传统发病区域有持续增强趋势，并有扩大传播的趋势。其中，在地处热带和亚热带地区的东南亚、西太平洋以及南美洲地区，超过100个国家的25亿人受到登革病毒的威胁，在2009-2013年间每年全球登革热、登革出血热的发病数均达3.9亿。登革热是过去50年间世界上最为严重的传染病之一，已成为严重的全球性公共卫生问题，不仅严重危害人类的健康，还为国家本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种I‑IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）将I‑IV型登革病毒标准株分别进行RT‑PCR扩增，分别得到I‑IV型登革病毒的NS1全基因：所述I‑IV型登革病毒标准株为I型登革病毒标准株DENV1 Hawaii、Ⅱ型登革病毒标准株DENV2 16681、Ⅲ型登革病毒标准株DENV3 H87和IV型登革病毒标准株DENV4 H241；所述RT‑PCR扩增时设计下列I‑IV型登革病毒标准株的特异扩增引物：I型登革病毒标准株DENV1 Hawaii的扩增引物为：F：5'‑GGATCCGACTCGGGATGTGTAATCAACT‑3'R：5'‑GCGGCCGCTGC...

【技术特征摘要】
1.一种I-IV型登革病毒的NS1重组蛋白构建方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）将I-IV型登革病毒标准株分别进行RT-PCR扩增，分别得到I-IV型登革病毒的NS1全基因：所述I-IV型登革病毒标准株为I型登革病毒标准株DENV1Hawaii、Ⅱ型登革病毒标准株DENV216681、Ⅲ型登革病毒标准株DENV3H87和IV型登革病毒标准株DENV4H241；所述RT-PCR扩增时设计下列I-IV型登革病毒标准株的特异扩增引物：I型登革病毒标准株DENV1Hawaii的扩增引物为：F：5'-GGATCCGACTCGGGATGTGTAATCAACT-3'R：5'-GCGGCCGCTGCAGAGACCATTGACTTAACTAGG-3'；Ⅱ型登革病毒标准株DENV216681的扩增引物为：F：5'-GGATCCGATAGTGGTTGCGTTGTGAGCTGG-3'R：5'-GCGGCCGCAGCTGTGACCAAGGAGTTGACC-3'；Ⅲ型登革病毒标准株DENV3H87的扩增引物为：F：5'-GGATCCGACATGGGGTGTGTCATAAACT-3'R：5'-GCGGCCGCCGCTGAGACTAAAGACTTTACCATG-3'；IV型登革病毒标准株DENV4H241的扩增引物为：F：5'-GGATC...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙强明，王晓丹，席珏敏，陈俊英，潘玥，姜黎明，罗佳，杨佳佳，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53