禽传染性支气管炎弱毒疫苗株、疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术公开了禽传染性支气管炎弱毒疫苗株、疫苗及其应用，具体公开了S株和SU株，以及这两株弱毒疫苗株在制备禽传染性支气管炎疫苗中、作为免疫原使用的蛋白质或多肽中、作为用于检测血清中特异性抗体的蛋白质抗原中的应用。S株可作为弱毒疫苗直接应用于预防家禽免于禽传染性支气管炎的感染及传播。S株对SPF鸡毒力较弱，感染鸡不出现发病及死亡症状，不易传播且排毒率低，安全性高，可针对国内优势IBV种群进行免疫保护，有效性良好。SU株对SPF鸡安全，免疫保护效果与市售LDT3、H120效果相近，具有作为安全疫苗候选株的可能。

【技术实现步骤摘要】
禽传染性支气管炎弱毒疫苗株、疫苗及其应用
本专利技术涉及疫苗领域，尤其涉及禽传染性支气管炎疫苗株、疫苗及其应用。
技术介绍
禽传染性支气管炎(InfectiousBronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus,IBV)引起的高传染性病毒性疾病。其高致病性、接触性传染和全球广泛分布的特征使其成为除新城疫和高致病性禽流感外被广泛研究的病毒学呼吸道疾病。禽传染性支气管炎病毒对于不同日龄的鸡只都有感染性，其对于不同组织的嗜性使得感染部位不局限于呼吸道，胃、肠道、肾脏和输卵管等部位都会发生病变(Cavanagh2007)。禽传染性支气管炎病毒(IBV)致病率高达100％，感染雏鸡的死亡率为25％-30％(Bande,2015)。感染雏鸡若与其他细菌性或病毒性病原一起发生混合或继发感染，会增加鸡只死亡率(Matthijs,2003)。从1931年首次发现至今(Schalk,1931)，禽传染性支气管炎的爆发在世界各国多有报道。20世纪90年代后至今，该病在国内频繁爆发，使得感染鸡群肉鸡质量下降，蛋鸡产蛋量下降，给我国养禽业带来极大的经济损失。禽传染性支气管炎病毒属于尼多病毒目(Nidovirales)，冠状病毒科(Coronaviridae)，冠状病毒属(Coronavirus)。该病毒为带囊膜，不分节段的单股正链RNA病毒。病毒粒子直径为80-120nm，囊膜表面均布着约20nm长的纤突。病毒基因组编码的主要结构蛋白为纤突蛋白(S,spike)、基质蛋白(M,matrix)、核衣壳蛋白(N,nucleocapsid)和囊膜蛋白(E,envelope)(Bande,2015)。S蛋白是高度糖基化跨膜蛋白，大小为150-200kDa。该蛋白在宿主细胞受体识别、抗体诱导、致病性和基因分型等方面起着关键作用(Bande,2015)。S蛋白基因转译后被裂解为S1(520aa)和S2(625aa)两个亚基。其中，S1蛋白识别并结合宿主细胞受体，S2蛋白通过构象变化，使病毒囊膜和宿主细胞膜融合，让病毒基因组进入宿主细胞中(Belouzard,2012)。S蛋白可以诱导机体产生相应抗体以及免疫反应，而在S1、S2两个糖蛋白亚基中，S1是主要免疫原性蛋白，具有多个抗原表位(Ignjatovic,1991；Ignjatovic,2005)。S1蛋白同样对受体结合以及细胞膜融合起着决定性作用(Belouzard,2012)。传统血清学实验例如病毒中和实验(VN)发现禽传染性支气管炎病毒存在多种血清分型(OIE,2008)，其抗原多样性使得不同禽传染性支气管炎病毒毒株间不能产生有效的交叉保护(Farsang,2002；Ladman,2006)。因此，针对禽传染性支气管炎病毒不同的血清型，市场上存在各种不同的减毒活疫苗和灭活疫苗(Bijlenga,2004)。目前，减毒活疫苗是广泛用于禽传染性支气管炎防控的手段。减毒活疫苗一般选取抗原性良好的禽传染性支气管炎病毒毒株，比如MASS型M41或H52、H120等，是第一代应用在禽传染性支气管炎疫情防控的产品(Lee,2010)。灭活疫苗一般与减毒活疫苗组合使用，也可以单独使用。然而，研究发现，与减毒活疫苗相比，灭活疫苗单独使用时免疫时效较短(Ladman,2002)。此外，一些新型疫苗也用于禽传染支气管炎的防治，包括病毒载体疫苗，亚基和多肽疫苗以及质粒DNA疫苗，这些新型疫苗可以产生明显的体液以及细胞介导的免疫反应，以达到免疫保护效果(Bande,2015)。研究发现，个体间遗传差异会影响免疫应答效力(Cavanagh,2007)。并且，禽传染性支气管炎病毒的S1蛋白氨基酸序列上2-3％的改变(10-15aa)就会导致血清型的改变，因而产生变异株并可能影响相近血清型间的交叉免疫保护(Cavanagh,1997)。因此，禽传染性支气管炎病毒的S1蛋白序列成为禽传染性支气管炎防控的研究热点。基于S1基因的序列分析，主要分布于世界各地的禽传染性支气管炎病毒也被分为经典株和变异株(Chang-WonLee,2003)。其中，经典株M41和H120被广泛用作疫苗株(SjaakdeWit,2011)。然而，世界动物卫生组织(OIE)提出，禽传染性支气管炎病毒血清型分布在疫苗的使用上存在地缘性影响。禽传染性支气管炎病毒其他变异株的分布一般限于特定区域，比如，病毒株M41、Arkansas和Connecticut在美国广泛分布，而病毒株4/91(793/B,CR88)和D274则主要存在于欧洲(SjaakdeWit,2011；Bande,2015)。最近中国QX变异株在欧洲、亚洲、中东和非洲爆发的事实则说明了IBV在地理分布上的迁移和该QX基因型病毒的重要性，其分布的广泛性对禽传染性支气管炎的防控带来了极大的挑战(Jia,1995；Moreno,2016；Zhao,2016)。然而，禽传染性支气管炎病毒跨地域传播的可能性有待进一步确认(Ducatez,2009)。对国内禽传染性支气管炎病毒的流行病学调查研究数据，发现我国在禽传染性支气管炎的防控有以下特点：1.在国内目前广泛流行的禽传染性支气管炎病毒毒株主要为QX基因型；2.目前国内对禽传染性支气管炎的防控一般使用Mass型疫苗株，如H120、H52、Ma5、M41。但是Mass型与国内流行的基因型进化关系较远，因此交叉保护较差；3.防控QX型禽传染性支气管炎病毒的商品化疫苗相对较少。
技术实现思路
有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种禽传染性支气管炎弱毒疫苗株、疫苗及其应用。一种禽传染性支气管炎弱毒疫苗株S，保藏编号为CCTCCNO：V201647。该弱毒疫苗株S属于禽传染性支气管炎病毒IBV-S，拉丁文学名：InfectiousBronchitisVirus。弱毒疫苗株S的保藏日为2016年9月16日，保藏单位全称为中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏地址为中国武汉武汉大学。一种禽传染性支气管炎疫苗组合物，包含弱毒疫苗株S和药学上可接受的佐剂或载体。所述弱毒疫苗株S在制备禽传染性支气管炎疫苗中的应用。所述弱毒疫苗株S在制备作为免疫原使用的蛋白质或多肽中的应用。所述弱毒疫苗株S在制备作为用于检测血清中特异性抗体的蛋白质抗原中的应用。一种禽传染性支气管炎弱毒疫苗株SU，保藏编号为CCTCCNO：V201648。该弱毒疫苗株SU属于禽传染性支气管炎病毒IBV-SU，拉丁文学名：InfectiousBronchitisVirus。弱毒疫苗株SU的保藏日为2016年9月16日，保藏单位全称为中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称为CCTCC，保藏地址为中国武汉武汉大学。一种禽传染性支气管炎疫苗组合物，包含弱毒疫苗株SU和药学上可接受的佐剂或载体。所述弱毒疫苗株SU在制备禽传染性支气管炎疫苗中的应用。所述弱毒疫苗株SU在制备作为免疫原使用的蛋白质或多肽中的应用。所述弱毒疫苗株SU在制备作为用于检测血清中特异性抗体的蛋白质抗原中的应用。专利技术人根据病料来源地、来源年份远近，选择可能出现弱毒株的部分病料重新进行病毒分离、动物回归实验及S1基因序列比对，得到一株QX基因型禽传染性支气管炎病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽传染性支气管炎弱毒疫苗株S，保藏编号为CCTCC NO：V201647。

【技术特征摘要】
1.一种禽传染性支气管炎弱毒疫苗株S，保藏编号为CCTCCNO：V201647。2.一种禽传染性支气管炎疫苗组合物，其特征在于，包含弱毒疫苗株S和药学上可接受的佐剂或载体。3.弱毒疫苗株S在制备禽传染性支气管炎疫苗中的应用。4.弱毒疫苗株S在制备作为免疫原使用的蛋白质或多肽中的应用。5.弱毒疫苗株S在制备作为用于检测血清中特异性抗体的蛋白质抗原中的应用。6.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹永长，张芸，曾钰尧，尹丽娟，薛春宜，先国兰，郭超，罗鸿斌，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44