用于保护脂肪组织的组合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种离体脂肪保护剂，它由如下组分组成：生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素，前述各个组分配比依次为：500ml：500ml：(146.1mg～584.4mg)：125000U：125000U。本发明专利技术还公开了前述保护剂的制备方法和用途。本发明专利技术的保护剂可以有效降低脂肪组织培养干细胞的污染率，同时与不使用保护液相比，脂肪组织培养过程中，干细胞的生长速度更快，能够缩短原代细胞的培养时间，提高培养效率，节约成本。

【技术实现步骤摘要】
用于保护脂肪组织的组合物及其制备方法和用途
本专利技术涉及用于保护脂肪组织的组合物及其制备方法和用途。
技术介绍
人体脂肪组织中含有大量的脂肪干细胞(adiposetissue-derivedcells，ADSC)，它是一种间充质细胞，可以自我更新，自我复制，并具有多向分化潜能，在体内和体外不同诱导因素下能够分化为脂肪细胞、神经细胞、软骨细胞、胰岛细胞等多种组织的细胞，同时，ADSC可以分泌多种促血管生成因子和抗凋亡因子，具有巨大的应用潜力。2001年，Zuk等通过脂肪抽吸术，在吸出的人体脂肪组织中第一次分离得到了多向分化的干细胞，即脂肪干细胞。ADSC的优点在于：①分离方法简单，可操作性强；②ADSC在脂肪组织中含量高，获取率高达1％-2％，而骨髓干细胞仅有0.001％-0.002％，脂肪干细胞是骨髓干细胞的1000倍；③体外扩增能力强，易于传代培养；④具有跨胚层分化能力；⑤免疫排斥低；⑥ADSC的来源——脂肪组织分布广泛；⑦通过吸脂术可轻易获得脂肪，患者痛苦小，供区损伤低等。因此，近年来ADSC一直是干细胞研究的热点，应用范围也非常广泛，例如，ADSC可以用于皮肤创面愈合，软骨损伤修复，神经功能修复和皮肤美容整形等方面。ADSC来源于人体脂肪组织，通过吸脂术采集到的脂肪组织在体外经过培养并扩增获得满足临床实验应用的大量ADSC。传统方法是将采集到的脂肪组织直接放入无菌容器内，运送到实验室进行ADSC培养操作。但是吸脂术采集脂肪组织本身存在一定的细菌污染风险，有细菌污染就会导致ADSC培养失败，造成脂肪组织的浪费。实验的失败也造成实验试剂耗材的损失。而即使能够重新吸脂术采集脂肪也增加了患者的痛苦和身体的损伤，造成了时间和经济上的损失。另外，同样采用脂肪组织自然贴壁培养法培养ADSC，没有使用保护剂的脂肪组织培养的细胞形态好，活性强，增殖能力强，但耗时较长，培养基消耗较大，时间和经济成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种离体脂肪的保护剂及其制备方法和用途。本专利技术离体脂肪保护剂，它由如下组分组成：生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素，前述各个组分配比依次为：500ml：500ml：(146.1mg～584.4mg)：125000U：125000U。优选地，所述生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素的配比为：500ml：500ml：(365.25mg～584.4mg)：125000U：125000U。优选地，所述生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素的配比为：500ml：500ml：365.25mg：125000U：125000U。本专利技术制备前述的保护剂的方法，步骤如下：按照前述配比取各组分，混匀，即可。本专利技术还提供了前述的保护剂在离体脂肪组织的保护中的用途。其中，所述用途是保护剂用于抑菌的用途。其中，所述用途是保护剂用于促进细胞增殖的用途。本专利技术还提供了一种离体脂肪组织的保存方法，取离体脂肪组织，与前述的保护剂混合，保存即可。其中，所述保存是在4℃条件下保存。生理盐水：为医用0.9％氯化钠注射液。DMEM溶液：是美国HyClone公司生产商品化培养基，成分为：无水氯化钙116.6mg/L、L-亮氨酸59.05mg/L、亚油酸0.042mg/L、五水硫酸铜0.0013mg/L、L-赖氨酸盐酸盐91.25mg/L、硫辛酸0.105mg/L、九水硝酸铁0.05mg/L、L-蛋氨酸17.24mg/L、酚红8.1mg/L、七水硫酸亚铁0.417mg/L、L-苯丙氨酸35.48mg/L、1,4-丁二胺二盐酸盐0.081mg/L、氯化钾311.8mg/L、L-丝氨酸26.25mg/L、丙酮酸钠55mg/L、氯化镁28.64mg/L、L-苏氨酸53.45mg/L、维生素H0.0035mg/L、无水硫酸镁48.84mg/L、L-丙氨酸4.45mg/L、D-泛酸钙2.24mg/L、氯化钠6999.5mg/L、L-天门冬酰胺7.5mg/L、L-谷氨酰胺365mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、无水磷酸二氢钠54.35mg/L、L-天门冬氨酸6.65mg/L、叶酸2.65mg/L、磷酸氢二钠71.02mg/L、L-半胱氨酸盐酸盐17.56mg/L、i-肌醇12.6mg/L、七水硫酸锌0.432mg/L、L-谷氨酸7.35mg/L、烟酰胺2.02mg/L、L-精氨酸盐酸盐147.5mg/L、L-脯氨酸17.25mg/L、盐酸吡哆醛2mg/L、L-胱氨酸盐酸盐31.29mg/L、L-色氨酸9.02mg/L、盐酸吡哆醇0.031mg/L、L-酪氨酸38.4mg/L、核黄素0.219mg/L、甘氨酸18.75mg/L、L-缬氨酸52.85mg/L、盐酸硫胺2.17mg/L、L-组氨酸盐酸盐31.48mg/L、D-葡萄糖3151mg/L、胸苷0.365mg/L、L-异亮氨酸54.47mg/L、次黄嘌呤2mg/L、维生素B120.68mg/L。L－谷氨酰胺：左旋谷氨酰胺，化学名2-氨基-4-甲酰胺基丁酸。本专利技术的保护剂可以长时间保护离体的脂肪组织，不仅可以有效的降低脂肪组织在培养干细胞初期的细菌污染率，而且用保护液中的脂肪组织分离提取的脂肪干细胞具有良好的活性，较好地保持其性状和分化潜能，增殖能力强，脂肪组织培养初期细胞生长速度快，缩短了脂肪干细胞培养的时间，节约了成本，具有良好的市场应用价值。下面通过具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明，但是并不是对本专利技术的限制，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。附图说明图1本专利技术的保护剂配方组1培养中观察到的细胞生长形态图2本专利技术的保护剂配方组2培养中观察到的细胞生长形态图3本专利技术的保护剂配方组3培养中观察到的细胞生长形态图4对照组培养中观察到的细胞生长形态图5本专利技术的保护剂配方组1-组3以及对照组细胞生长曲线图图6本专利技术的保护剂和对照组储存4h脂肪组织培养的细胞生长曲线图图7本专利技术的保护剂和对照组储存8h脂肪组织培养的细胞生长曲线图图8本专利技术的保护剂和对照组储存12h脂肪组织培养的细胞生长曲线图图9本专利技术的保护剂和对照组储存24h脂肪组织培养的细胞生长曲线图图10本专利技术的保护剂储存的脂肪组织培养的细胞生长形态图11对照组的脂肪组织培养的细胞生长形态图12本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CD90检测结果图13本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CD105检测结果图14本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CDHLA-DR检测结果图15本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CD45检测结果图16本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CD14/34/79a检测结果图17本专利技术的保护剂储存的脂肪组织和对照组培养的细胞表面标志CD73检测结果图18本专利技术的保护剂储存的脂肪组织培养的细胞成脂分化能力图19本专利技术的保护剂储存的脂肪组织培养的细胞成脂分化能力图20本专利技术的保护剂储存的脂肪组织培养的细胞成骨分化能力图21本专利技术的保护剂储存的脂肪组织培养的细胞成骨分化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种离体脂肪保护剂，其特征在于：它由如下组分组成：生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素，前述各个组分配比依次为：500ml：500ml：(146.1mg～584.4mg)：125000U：125000U。

【技术特征摘要】
1.一种离体脂肪保护剂，其特征在于：它由如下组分组成：生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素，前述各个组分配比依次为：500ml：500ml：(146.1mg～584.4mg)：125000U：125000U。2.根据权利要求2所述的保护剂，其特征在于：所述生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素的配比为：500ml：500ml：(365.25mg～584.4mg)：125000U：125000U。3.根据权利要求2所述的保护剂，其特征在于：所述生理盐水、DMEM溶液、L－谷氨酰胺、青霉素和链霉素的配比为：500ml：500ml：365.25...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵明建，钟伟兴，
申请(专利权)人：广东康仹生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44