一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，包括步骤为：通过点膜喷金设备用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）标记的免疫金对玻璃纤维素膜喷金得到金垫，用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（包被抗体）检测线包被液和对照线包被液分别在粘有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；将样品垫、金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成检测试纸。通过上述方式，本发明专利技术得到的检测试纸基于免疫侧向流层析技术，能够通过手工操作、肉眼读取判断血液样本中是否含有乙肝表面抗原，诊断快速且结果准确，不会对受检者身体造成伤害。

Preparation method of hepatitis B virus surface antigen detection test paper

The invention discloses a preparation method of hepatitis B virus surface antigen detection test, comprising the following steps: the film spraying equipment for anti hepatitis B virus surface antigen monoclonal antibody (antibody) labeled immunogold on glass fibre membrane spray gold gold pad, with anti hepatitis B virus surface antigen monoclonal antibody (antibody) detection line coated liquid and control line coated PVC floor are liquid nitrocellulose membrane in sticky overlining PVC floor to get the point of the membrane; the sample pad, pad, gold film and PVC floor absorbent paper assembled together, cutting into a test paper. By the way, test the immune chromatography technology based on lateral flow, through manual operation, read to determine whether the blood samples of eyes containing hepatitis B surface antigen, rapid and accurate diagnosis, will not cause harm to the subjects of the body.

【技术实现步骤摘要】
一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法
本专利技术属于生物应用
，特别是涉及一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法。
技术介绍
乙型肝炎病毒简称乙肝病毒，是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科。根据目前所知，乙型肝炎病毒就只对人和猩猩有易感性，引发乙型病毒性肝炎疾病，其是传染性疾病，不是遗传病。据世界卫生组织统计资料显示，在全球范围内，大约有二十多亿的人为乙肝病毒携带者，约占全世界总人口的百分之三十左右，是全世界范围内感染人数最多的一种慢性传染性疾病。因其传染性疾病的性质，患病者在婚情、入学、就业、社交等多种与人交往的活动中受到不同程度的歧视，同时其对人类健康有非常大的影响，因此受到人们的重视。乙型病毒型肝炎的致病菌的重要血清学标志物为乙肝病毒表面抗原。乙肝表面抗原是健康查体必查项目。在临床检测中，乙肝病毒表面抗原测定是判断乙型病毒性肝炎病毒携带者或乙型病毒性肝炎患者的病情判断和临床状况分析的重要临床参考指标，乙型病毒性肝炎病毒的测定不仅对乙型肝炎的诊断和评价具有重要的临床意义，同时，为有效阻断乙型病毒性肝炎在人群间的广泛传播起到非常重要的作用。在临床检测过程中，目前用于检测乙型病毒性肝炎表面抗原的方法主要有酶联免疫吸附法（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）、胶体金免疫层析法（Colloidalgoldimmunochromatographicassay，GICA）、时间分辨荧光免疫法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay，TRFIA）以及微粒子酶免疫分析法（Microparticleenzymeimmunoassay，MEIA)和化学发光免疫分析法（Immunochemiluminometryassay，CLIA）等不同方式和不同作用原理的检测方式。现有的乙型病毒性肝炎表面抗原的检测方法存在一些缺点，有的检测方法得到结果的时间长，需要长时间等待，有的检测方法需要借助仪器，有的检测方法步骤繁琐，不能进行批量检测，这些检测方法不容易在基层门诊进行推广应用。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，该制备方法得到的检测试纸适用于急诊或者手术前急查HBV病毒的定性检查，诊断快速且结果准确，可单份或成批测定，不需任何仪器，是一种较好的快速初筛普查方法，适合于广大基层门诊推广。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，包括步骤为：（1）制备重悬液：所述重悬液中包括聚乙烯吡咯烷酮PVP、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷，将聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到重悬液；制备包被基液：所述包被基液中包括海藻糖，用海藻糖溶于0.01M，pH值为7-8的磷酸缓冲溶液PB，得到包被基液；（2）向胶体金中加入碳酸钾，调节pH，再依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）、牛血清白蛋白溶液混合，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）标记的免疫金；（3）用步骤（1）制备的包被基液、无水乙醇稀释抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（包被抗体）得到检测线包被液，用步骤（1）制备的包被基液稀释羊抗鼠IgG多克隆抗体得到对照线包被液；（4）用步骤（2）制备的用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）标记的免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用步骤（3）制备的所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在贴有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；（5）将样品垫、免疫金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（1）中所述聚乙烯吡咯烷酮、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述三羟甲基氨基甲烷和所述定容后总体积的比例为0.5g：10g：5g：1g：0.242g：100mL。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（1）中所述重悬液的pH值是用1M盐酸调节至8.4；所述磷酸缓冲溶液是0.01M、pH值为7.4的磷酸缓冲溶液。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（2）的具体过程为：往搅拌的胶体金中加入碳酸钾，调节pH并搅拌10min，加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）并搅拌15min，再加入牛血清白蛋白溶液，搅拌15min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心3min，吸取得到第一沉淀，剩下上清液，将所述上清液继续在4℃、转速为10000r/min的条件下离心10min，吸取得到第二沉淀，将所述第一沉淀和所述第二沉淀合并，用所述重悬液重悬至离心前体积的1/10，得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）标记的免疫金，其中所述搅拌是置于磁力搅拌器上实现的。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（2）中所述碳酸钾为0.2M碳酸钾，所述牛血清白蛋白溶液为质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液；所述碳酸钾和所述抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（标记抗体）的比例为4uL/mL:14µg/mL；所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（3）中所述检测线包被液中所述抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体（包被抗体）的浓度为0.45mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为1.5mg/mL。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（4）中所述喷金过程是通过点膜喷金设备实现的；所述金垫采用玻璃纤维膜；所述点膜的聚氯乙烯底板放入37℃±3℃、相对湿度≤30%的条件下烘干2h。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（5）中所述样品垫采用玻璃纤维膜；在使用前用样品垫处理液对所述样品垫浸泡10min后干燥，其中所述样品垫处理液是将比例为0.2g：1mL：20mg：1.21g的牛血清白蛋白、吐温80、鼠抗人红细胞抗体和三羟甲基氨基甲烷溶于水中定容至100mL，pH值调节至8.0；所述乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸是组装后切割得到的。本专利技术的有益效果是：本专利技术的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，得到的检测试纸基于免疫侧向流层析技术，不需任何仪器设备，能够通过手工操作、肉眼读取判断血液样本中是否含有乙型肝炎病毒表面抗原，诊断快速且结果准确，不会对受检者身体造成伤害。所述检测试纸容易在基层门诊进行推广应用，不仅对乙型肝炎的诊断和评价具有重要的临床意义，同时，为有效阻断乙型病毒性肝炎在人群间的广泛传播起到非常重要的作用。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。（一）容器及材料容器设备：烧杯、量筒、容量瓶、玻璃棒、磁力搅拌机、电子天平、移液枪、点膜喷金设备、裁切机、切条机、封口机、压壳机、pH计、鼓风干燥箱。试剂辅料：氯金酸、柠檬酸三钠、K2CO3、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、HCl、BSA（牛血清白蛋白）本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）制备重悬液：所述重悬液中包括聚乙烯吡咯烷酮PVP、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷，将聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷溶于水并定容，调节pH值至8‑9，得到重悬液；制备包被基液：所述包被基液中包括海藻糖，用海藻糖溶于0.01M，pH值为7‑8的磷酸缓冲溶液PB，得到包被基液；（2）向胶体金中加入碳酸钾，调节pH，再依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体、牛血清白蛋白溶液混合，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金；（3）用步骤（1）制备的包被基液、无水乙醇稀释抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体得到检测线包被液，用步骤（1）制备的包被基液稀释羊抗鼠IgG多克隆抗体得到对照线包被液；（4）用步骤（2）制备的用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用步骤（3）制备的所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在粘贴有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；（5）将样品垫、免疫金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸。...

【技术特征摘要】
1.一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）制备重悬液：所述重悬液中包括聚乙烯吡咯烷酮PVP、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷，将聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到重悬液；制备包被基液：所述包被基液中包括海藻糖，用海藻糖溶于0.01M，pH值为7-8的磷酸缓冲溶液PB，得到包被基液；（2）向胶体金中加入碳酸钾，调节pH，再依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体、牛血清白蛋白溶液混合，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金；（3）用步骤（1）制备的包被基液、无水乙醇稀释抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体得到检测线包被液，用步骤（1）制备的包被基液稀释羊抗鼠IgG多克隆抗体得到对照线包被液；（4）用步骤（2）制备的用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用步骤（3）制备的所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在粘贴有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；（5）将样品垫、免疫金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸。2.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述聚乙烯吡咯烷酮、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述三羟甲基氨基甲烷和所述定容后总体积的比例为0.5g：10g：5g：1g：0.242g：100mL。3.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述重悬液的pH值是用1M盐酸调节至8.4；所述磷酸缓冲溶液是0.01M、pH值为7.4的磷酸缓冲溶液。4.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程为：往搅拌的胶体金中加入碳酸钾...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁锦勤，黄政，马军，
申请(专利权)人：苏州万木春生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32