【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种亚洲I型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法及其试剂盒和应用。
技术介绍
口蹄疫(foot and mouth disease, FMD)是猪、牛、羊等主要家畜和其它偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，易感动物达70多种。临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹。该病传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须申报的传染病，我国也将其列为一类动物传染病之首。口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，有七个血清型:0型、A型、亚洲I型、C型以及南非1、2、3型。各血清型之间没有交叉保护。现阶段我国主要流行O型、A型和亚洲I型。疫苗接种是预防、控制口蹄疫的有效手段之一。在我国，口蹄疫灭活疫苗使用最为广泛；为确保它安全有效，对其质量进行严格的控制极为必要。目前，国际上通用的疫苗效力检测方法是本动物攻毒保护试验，或采用TO5tl测定法(欧洲):即用疫苗50%动物保护剂量(PD50)来评价疫苗...
【技术保护点】
一种亚洲Ⅰ型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）储备亚洲Ⅰ型口蹄疫标准对照抗原；2）纯化定量亚洲Ⅰ型口蹄疫标准对照抗原146S；3）建立亚洲Ⅰ型口蹄疫间接夹心ELISA方法；4）绘制标准对照抗原标准曲线；5）计算被检样品146S?抗原含量；6）检测敏感性和特异性。
【技术特征摘要】
1.种亚洲I型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)储备亚洲I型口蹄疫标准对照抗原； 2)纯化定量亚洲I型口蹄疫标准对照抗原146S； 3)建立亚洲I型口蹄疫间接夹心ELISA方法； 4)绘制标准对照抗原标准曲线； 5)计算被检样品146S抗原含量； 6)检测敏感性和特异性。2.据权利要求1所述的一种亚洲I型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法，其特征在于，所述步骤I)中，对亚洲I型口蹄疫标准对照抗原，一部分按5mL/瓶，置于-70°C储备，此部分仅解冻一次，用于ELISA试验；另一部分按3X100 mL，置于_70°C储备，此部分仅解冻一次，分三次用于146S抗原纯化定量。3.据权利要求2所述的一种亚洲I型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，是利用蔗糖密度梯度法，梯度浓度为45%、35%、25%、15%，纯化亚洲I型口蹄疫标准对照抗原，三次测得146S抗原含量的平均值为1.74μ g/ml。4.据权利要求3所述的一种亚洲I型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测方法，其特征在于，所述步骤3)中，建立亚洲I型口蹄疫间接夹心ELISA方法的过程具体如下: a)包被ELISA板:用pH9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释口蹄疫亚洲I型兔抗血清至工作浓度，工作浓度为1:1000,即将I μ I 口蹄疫亚洲I型兔抗血清加入1000 μ I碳酸盐包被缓冲液中，混匀，每孔加50μ I于底部，震荡2-3分钟后用封板膜封板或置湿盒中室温过夜； b)洗涤ELISA板:揭掉封板膜，弃去ELISA板中液体，每孔加满洗涤液，洗涤液为0.01M,pH 7.4的磷酸盐吐温缓冲液，I XPBST，静置30秒后弃去液体，重复4次，拍干； c)加样:用IXPBST将对照抗原和被检抗原从1:2，即50μI抗原加50 μ I PBST，开始做2倍连续稀释至1:256，每孔加50μ 1，37°C，温育I小时，用PBST洗涤ELISA板4次，拍干; d)加二抗:用豚鼠抗血清稀释液稀释口蹄疫亚洲I型豚鼠抗血清至工作浓度，工作浓度为1:1000，即将1μ I 口蹄疫亚洲I型豚鼠抗血清加入ΙΟΟΟμ I豚鼠抗血清稀释液中，...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯霞，马军武，周广青，杨亚民，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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