岩黄连根的石蜡切片方法技术

本发明专利技术公开了一种岩黄连根的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连根放于体积浓度为0.8‑1.2％的番红溶液浸染8‑12h；在染色步骤中，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800‑1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8‑1.2％的固绿溶液中染色20‑30秒。本发明专利技术制备的根部切片组织更清晰，轮廓根分明，便于药材的鉴别。

Paraffin sectioning method for rock Huang Liangen

The invention discloses a method of paraffin section of rock Huang Liangen, including sample fixation, dehydration, transparent, paraffin embedding, slicing, and exhibition, dewaxing, dyeing and mounting, in a transparent step prior to dehydration after Huang Liangen on the rock volume concentration of 1.2% of the 0.8 safranin solution dip 8 12h; in the dyeing process, with Huang Liangen's rock slide for water, after water put color in alcohol solution, at the same time to add color for alcohol solution volume ratio of 1/ (800 1000) acetic acid, finally into the volume concentration of 0.8 1.2% solid green staining solution 20 30 seconds. The root section tissue prepared by the invention is clearer, and the outline root is distinct, which is convenient for the identification of medicinal materials.

【技术实现步骤摘要】
岩黄连根的石蜡切片方法
本专利技术涉及组织学领域。更具体地说，本专利技术涉及一种岩黄连根的石蜡切片方法。
技术介绍
岩黄连(CorydalissaxicolaBunting)是罂粟科植物，为多年生草本植物，分布于我国广西、广东、福建、湖南等省。全草入药，全草含脱氢卡维丁(岩黄连碱)等活性成分；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，并观察到有抑制肿瘤细胞作用；主治疮疖肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等症，是著名的壮瑶药品种。岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种。由于生境条件恶劣，其自然繁殖率很低，种群发展困难，资源蕴藏量十分有限。近年来人们大量采挖和收购，导致了野生资源的供不应求，野生岩黄连资源濒临枯竭，市场供不应求。随着日益攀升的市场价格，混淆品层出不穷，因此急需开发出岩黄连根部切片用以鉴别药材的真伪，供规范药材市场，鉴别真伪的岩黄连切片需要达到的效果为岩黄连根部切片结构清晰，能明确分辨各组织结构等，且需要标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。常规切片技术步骤繁杂不统一，且制备出来的岩黄连根部切片达不到要求无法适用于药材的鉴别。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决现有技术制备的岩黄连根部切片不够清晰不能用于药材真伪鉴别的问题，并提供至少后面将说明的优点。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种岩黄连根的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，包括：在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连根放于体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液浸染8-12h；在染色步骤中，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800-1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液中染色20-30秒。优选的是，所述体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液是用2/3体积无水酒精+1/3体积TO型生物透明剂的混合液为溶剂配制而成，所述体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液是用体积浓度为95％的酒精溶液为溶剂配制而成。优选的是，将载有岩黄连根的玻片依次放入1/2体积型生物透明剂+1/2体积无水酒精混合液、无水酒精、无水酒精、体积浓度为95％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为70％酒精中复水，每级3-5秒；再放入体积浓度为50％酒精中分色，3-10秒；之后再依次放入体积浓度为70％酒精、体积浓度为85％酒精中进一步处理，每级3-10秒。优选的是，固绿溶液染色后将载有岩黄连根的玻片放于放入无水酒精中洗去染色剂，此级停留3-10秒；然后依次放入无水酒精、1/2TO型生物透明剂+1/2无水酒精混合液中，每级停留3-10秒；最后将载有岩黄连茎的玻片放入TO型生物透明剂中停留5-10分钟，此步骤重复三次。优选的是，将固定后岩黄连根依次经过体积浓度为80％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为90％酒精、体积浓度为95％酒精逐级脱水，每个浓度梯度脱水45-60分钟，再放于100％酒精中脱水两次，每次30-45分钟。优选的是，每个梯度浓度的酒精溶液在对岩黄连根脱水过程中进行真空抽气15-18分钟。优选的是，所述真空抽气过程包括：将岩黄连根放于每个梯度浓度的酒精溶液中，第1-3分钟，将酒精溶液逐渐升温至35℃，加压50KPa，之后维持2分钟；第6-8分钟，将酒精溶液逐渐升温至40℃，加压100KPa，之后维持2分钟；第11-13分钟，将酒精溶液逐渐升温至45℃，加压150KPa，之后维持2-5分钟，泄压。优选的是，对番红溶液染色后的岩黄连根依次用1/2体积无水酒精+1/2体积TO型生物透明剂混合液以及1/3体积无水酒精+2/3体积TO型生物透明剂混合液进行透明处理，每级透明时间均为60-120分钟；再放于纯TO型生物透明剂中浸泡2次，每次浸泡60-120分钟。优选的是，在每次透明过程中进行真空抽气10-15分钟。优选的是，在透明步骤之前用番红溶液染色时，将脱水后的岩黄连根放于0.8-1.2％的番红溶液中进行真空抽滤20分钟，浸染3小时后，用频率为800兆赫的电磁波对岩黄连根进行辐照45秒，在浸染的第7小时，再用频率为850兆赫的电磁波对岩黄连根进行辐照35秒。本专利技术至少包括以下有益效果：(1)本专利技术公布的岩黄连根切片方法，岩黄连根横切结构清晰，可以在10至12天内切出结构清晰的岩黄连根结构，标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本，可供岩黄连药材显微鉴别应用，供规范市场；(2)岩黄连根部脱水后根部几乎透明，本专利技术在透明前先用番红溶液对样品进行预染色，这样在包埋的时候包埋的位置更准确，本专利技术的番红溶液是用2/3体积无水酒精+1/3体积TO型生物透明剂的混合液为溶剂配制而成，这样既可以进行透明也可以进行染色，省时省力；(3)本专利技术在固绿染色前在50％酒精中加入醋酸进行分色醋酸的加入有利于分色，使得番红固绿染色不同部位效果更明显；(4)在分色后用体积浓度为70％酒精、体积浓度为85％酒精对样品进一步处理，可以使得岩黄连根部中各组织更立体，在染色后效果更突出，更易于观察对比；(5)在固绿染色之后，再将片子依次放入无水酒精、1/2TO型生物透明剂+1/2无水酒精混合液中，每级停留3-10秒；最后将载有岩黄连叶片的玻片放入TO型生物透明剂中停留5-10分钟，此步骤重复三次，目的是完全除去残留在叶片和玻片上蜡；(6)岩黄连根部的组织比较紧密，因此在脱水步骤中的真空抽气时，逐渐升高酒精的温度，并加压，这样可以使得酒精溶液能更容易进入到根部各组织中，从而使得根部脱水的效果更好；(7)岩黄连根部的组织比较紧密，用电磁波对岩黄连根部短时间照射不会改变根部结构，但是却可以加速根部组织内部分子的高速运动，以使染料在根部内的运输加快，增加弥散、渗透和交换效率，从而使得染色的效果更好，做出来的根部切片组织更清晰，轮廓根分明，便于药材的鉴别。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本专利技术的对照组的石蜡切片图；图2为本专利技术的实施例1的石蜡切片图；图3为本专利技术的实施例4的石蜡切片图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1：(1)固定：新鲜岩黄连根部采下后用自来水冲净表面浮尘，吸干叶片表面水分。然后垂直根部中脉横切，每片长约8mm，宽4mm，放入体积浓度为70％酒精配制的FAA固定液中固定24小时，FAA固定液由体积浓度为70％酒精:冰醋酸:甲醛体积比为90:5:5配制而成。(2)脱水：将材料从FAA固定液中取出，滤纸吸干多余FAA固定液，放入带橡胶塞的平底玻璃管内，加入体积浓度为80％酒精中，体积浓度为80％酒精的加入量为材料体积的20倍以上，真空抽气15分钟，停留45分钟；倒出体积浓度为80％酒精，加入体积浓度为85％酒精，真空抽气15分钟，放置45分钟；倒出体积浓度为85％酒精，加入体积浓度为90％酒精，真空抽气15分钟，放置60分钟；倒出体积浓度为90％酒精，加入体积浓度为95本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种岩黄连根的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，其特征在于，在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连根放于体积浓度为0.8‑1.2％的番红溶液浸染8‑12h；在染色步骤中，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800‑1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8‑1.2％的固绿溶液中染色20‑30秒。

【技术特征摘要】
1.一种岩黄连根的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，其特征在于，在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连根放于体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液浸染8-12h；在染色步骤中，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800-1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液中染色20-30秒。2.如权利要求1所述的岩黄连根的石蜡切片方法，其特征在于，所述体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液是用2/3体积无水酒精+1/3体积TO型生物透明剂的混合液为溶剂配制而成，所述体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液是用体积浓度为95％的酒精溶液为溶剂配制而成。3.如权利要求1所述的岩黄连根的石蜡切片方法，其特征在于，将载有岩黄连根的玻片依次放入1/2体积型生物透明剂+1/2体积无水酒精混合液、无水酒精、无水酒精、体积浓度为95％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为70％酒精中复水，每级3-5秒；再放入体积浓度为50％酒精中分色，3-10秒；之后再依次放入体积浓度为70％酒精、体积浓度为85％酒精中进一步处理，每级3-10秒。4.如权利要求1所述的岩黄连根的石蜡切片方法，其特征在于，固绿溶液染色后将载有岩黄连根的玻片放于放入无水酒精中洗去染色剂，此级停留3-10秒；然后依次放入无水酒精、1/2TO型生物透明剂+1/2无水酒精混合液中，每级停留3-10秒；最后将载有岩黄连茎的玻片放入TO型生物透明剂中停留5-10分钟，此步骤重复三次。5.如权利要求1所述的岩黄连根的石蜡切片方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：张占江，缪剑华，李翠，郭晓云，陈晓英，胡营，赵以民，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西,45