本发明专利技术涉及一种红叶植物防止叶片花色苷流失的石蜡切片方法，包括如下步骤：第一步：准备原料：采集富含花色苷的植物新鲜叶片作为材料；第二步：材料干燥：将采集叶片放置在干燥器中干燥24小时以上；第三步：浸蜡：将干燥后的叶片裁成方块，放入60-70℃的石蜡中，维持0.1-0.15个大气压，处理时间在6个小时以上；第四步：包埋；第五步：切片；第六步：粘片与脱蜡；第七步：封片。本发明专利技术在制片的过程中没有使用乙醇、丙酮、甲醛及水等极性溶剂，较好的保存了花色苷在细胞中的位置及含量，将切片的整个过程由原来的102小时缩短至现在的30小时，工作量不足原来的1/3。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物叶片切片标本制作方法，特别涉及一种红叶植物防止叶片花色苷 流失的石蜡切片方法。
技术介绍
显微观测是了解植物内部特征的主要途径，其主要方法是植物制片。常用的植物 制片方法有徒手切片、冰冻切片和石蜡切片。徒手切片法的特点是简便快捷，要求设备简 单，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物组织的自然色泽和活体结构，但切片较厚， 很难切到非常薄的切片。石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是显微技 术中最重要的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片，便于器官的三维重构。 但是步骤繁琐，耗时较长，包含取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片与粘 片、脱蜡、染色、封片。冰冻切片的特点是简便、快速、用时短，可以不需要对组织进行固定、 脱水、透明、包埋等步骤即可进行切片，减少了一些中间环节，能很好保存脂肪、类脂、及各 种抗原活性及酶类，特别是对于那些对有机溶剂或热温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原 和水解酶保存较好。但是不容易制作较薄的切片，切取的组织不能过大，组织块在冻结过程 中容易产生冰晶而影响细胞的形态结构及抗原物质的定位，并且组织结构也不如石蜡切片 清晰。 红叶植物是叶片呈现显著紫红色的植物统称，其呈色物质主要是花色苷，其易溶 于水、乙醇及丙酮等溶剂。不同红叶植物呈色组织不同，在研究中常需进行显色组织定位， 进而了解其在细胞内生成及运输过程。而在进行切片的过程中，徒手切片法和冰冻切片法 难以切到足够薄的切片以观察到理想的组织结构，而石蜡切片法在固定、脱水等必要环节 需使用乙醇和甲醛等溶液，会造成花色苷流失，无法进行显色组织定位观测。因此，传统的 制片方法均无法有效的实现细胞内花色苷形成与积累过程的动态观测。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术在于提供一种避免水、乙醇、丙酮及甲醛等溶剂使用的红叶植物 防止叶片花色苷流失的石蜡切片方法。 本专利技术是采用如下技术方案实现的： ，包括如下步骤： 第一步、准备原料：采集富含花色苷的植物新鲜叶片作为材料； 第二步、材料干燥：将采集叶片放置在干燥器中干燥24小时以上； 第三步、浸蜡：将干燥后的叶片裁成方块，放入60-70°C的石蜡中，维持0. 1-0. 15个大 气压，处理时间在6个小时以上； 第四步、包埋； 第五步、切片； 第六步、粘片与脱蜡； 第七步、封片。 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第二步中的干燥时间为24_36h。本专利技术 的中的干燥实在室温下进行的，一般根据室温的高低决定干燥时间。选择24_36h，是在室温 25-35Γ做出的最优选择，干燥时间不长，可以保证干燥合适，植物叶片脱水合适，最大限度 的保护植物组织不发生大的变形。 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第三步、浸蜡：将干燥后的叶片放入65°C 的石蜡中，维持〇. 1个大气压，处理时间6-8个小时 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第四步、包埋：将浸蜡后的溶解的石蜡倒入 小正长方体的包埋盒中，再将经石蜡浸透的叶片放入盒中，调整叶片的位置，并迅速放入 8-15 °C冷水中使之快速冷却。 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第五步、切片：将包埋好的蜡块经分割、 修整、固着，后经旋转切片机切成8~1〇μπι厚的蜡带。 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第六步、粘片与脱蜡；将分割成小段的蜡 带放在涂有柴油的载玻片上使蜡片展平，并在叶片位置滴上柴油，3分钟后使用滤纸吸收， 重复操作，直至石蜡全部去除。 进一步，本专利技术的一种优选方案：所述的第七步、封片：将封藏剂均匀、布满在叶 片上，然后轻轻盖上干净的盖玻片。 本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术在制片的过程中没有使用乙醇、丙酮、甲醛及水等极性溶剂，较好的保存了花 色苷在细胞中的位置及含量。 2、通过本专利技术的实施，可以切出8~10um的叶片组织切片，有利于进行显微观测。 3、本专利技术简化了普通石蜡切片的步骤，降低了实验人员的工作强度，缩短了实验 时间，将切片的整个过程由原来的102小时缩短至现在的30小时，工作量不足原来的1/3。 4、本专利技术操作方法简便、规范，生产过程中使用对人体无害的有机溶剂，对保证实 验室人员健康有积极意义。【具体实施方式】 为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将通过实施例对 本专利技术的技术方案进行简单地介绍，显而易见地，下面描述中的实施例仅仅是本专利技术的一 些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些 实施例获得其他的实施例。 实施例1 第一步、材料采集：采集'红叶'杜仲（价co蕭ia i/hoiofes 'Hongye'）新鲜叶片作为材 料； 第二步、材料干燥：将采集叶片在干燥器中放置24小时； 第三步、浸蜡：将干燥后的叶片和液态石蜡放入小锥形瓶中，置于65°C的水浴锅内，使 用真空栗抽维持0. 1个大气压6个小时。 第四步、包埋：将浸蜡后的溶解的石蜡倒入体积为2cmX2cmX Icm的小正长方体 的包埋盒中，再将经石蜡浸透的叶片放入盒中，调整叶片的位置，并迅速放入8°C冷水中使 之快速冷却； 第五步、切片：将包埋好的蜡块经分割、修整、固着，后经旋转切片机切成8~1〇μπι厚的 蜡带。 第六步、粘片与脱蜡：将切下的蜡片放在涂有柴油的载玻片上使蜡片展平，在材料 位置滴上柴油，3分钟后使用滤纸吸收，重复操作，直至石蜡全部去除。 第七步、封片：将封藏剂均匀地布满在叶片上，然后轻轻盖上干净的盖玻片。 实施例2 第一步、材料采集：采集紫叶碧桃jOersica L. var. per sica f. atropurpurea Schneid.)新鲜叶片作为材料。 第二步、材料干燥：将采集叶片在干燥器中放置36小时； 第三步、浸蜡：将干燥后的叶片和液态石蜡放入小锥形瓶中，置于70°C的水浴锅内，使 用真空栗抽维持0. 15个大气压7个小时。 第四步、包埋：将浸蜡后的溶解的石蜡倒入体积为2cmX2cmX Icm的小正长方体 的包埋盒中，再将经石蜡浸透的叶片放入盒中，调整叶片的位置，并迅速放入KTC冷水中使 之快速冷却； 第五步、切片：将包埋好的蜡块经分割、修整、固着，后经旋转切片机切成8~1〇μπι厚的 蜡带。 第六步、粘片与脱蜡：将切下的蜡片放在涂有柴油的载玻片上使蜡片展平，在材料 位置滴上柴油，3分钟后使用滤纸吸收，重复操作，直至石蜡全部去除。 第七步、封片：将封藏剂均匀地布满在叶片上，然后轻轻盖上干净的盖玻片。 实施例3 第一步、材料采集：采集红叶石楠刚展开的红色叶片作为材料。 第二步、材料干燥：将采集叶片在干燥器中放置30小时； 第三步、浸蜡：将干燥后的叶片和液态石蜡放入小锥形瓶中，置于60°C的水浴锅内，使 用真空栗抽维持0. 12个大气压8个小时。 第四步、包埋：将浸蜡后的溶解的石蜡倒入体积为2cmX2cmX Icm的小正长方体 的包埋盒中，再将经石蜡浸透的叶片放入盒中，调整叶片的位置，并迅速放入15°C冷水中使 之快速冷却； 第五步、切片：将包埋好的蜡块经分割、修整、固着当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红叶植物防止叶片花色苷流失的石蜡切片方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步、准备原料：采集富含花色苷的植物新鲜叶片作为材料；第二步、材料干燥：将采集植物新鲜叶片放置在干燥器中干燥24小时以上；第三步、浸蜡：将干燥后的叶片裁成方块，放入60‑70℃的石蜡中，维持0.1‑0.15个大气压，处理时间在6个小时以上；第四步、包埋；第五步、切片；第六步、粘片与脱蜡；第七步、封片。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱景乐，张明远，李加茹，张悦，徐梦莎，马志刚，孟伟，李振山，王英，刘照华，张志丹，
申请(专利权)人：国家林业局泡桐研究开发中心，
类型：发明
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。