一种黑曲霉的复合诱变方法技术

本发明专利技术公开了一种黑曲霉的复合诱变方法，该方法包括如下步骤：(1)孢子预培养；(2)菌体酶解脱壁；(3)常压室温等离子体诱变；(4)原生质体再生培养；(5)24孔板筛选；(6)摇瓶发酵复筛。本发明专利技术方法中脱去细胞壁后的原生质体，没有细胞壁的阻挡，诱变剂更容易进入细胞核内，可以快速地作用于遗传物质，遗传物质发生变异的概率更大、效率更高，诱变效果会更明显。

【技术实现步骤摘要】
一种黑曲霉的复合诱变方法
本专利技术涉及微生物菌种的诱变选育
，尤其是涉及一种一种原生质体与常压室温等离子体诱变复合选育黑曲霉柠檬酸高产菌株的方法。
技术介绍
柠檬酸具有广阔的应用前景和市场需求。出于经济层面考虑，一部分研究在现有菌种的基础上利用价格更低廉的粗糖原料以及农业废渣来生产柠檬酸，而另一部分研究则致力于改良菌种。生产菌种的改造和选育是柠檬酸发酵工业的基础，决定了发酵过程的成败和发酵产品工业化生产的价值。我国是柠檬酸生产大国，虽然柠檬酸转化率已经接近理论水平，产量可以达到170g/L，但发酵周期偏长，工业生产发酵周期普遍为72h，工业发酵水平还有待提高。目前，国内的黑曲霉生产菌株均由诱变育种获得，常用的诱变方法为化学诱变(硫酸二乙酯、亚硝基胍和氯化锂等)和物理诱变(紫外、60Co等)。化学诱变剂主要通过与碱基结合形成加合物以及造成DNA烷基化引入变异，紫外则通过使DNA分子形成环丁烷嘧啶二聚体阻碍碱基间的正常配对造成核酸变异。这些诱变操作存在安全性风险，此外诱变效率可控性有限。常压室温等离子体诱变是最近发展起来的技术，电子在射频电场作用下获得能量，通过碰撞，与周围中性粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黑曲霉的复合诱变方法，其特征在于所述方法为在黑曲霉原生质体上进行常压室温等离子体诱变，具体包括如下步骤：(1)孢子预培养；(2)菌体酶解脱壁；(3)常压室温等离子体诱变；(4)原生质体再生培养；(5)24孔板筛选；(6)摇瓶发酵复筛。

【技术特征摘要】
1.一种黑曲霉的复合诱变方法，其特征在于所述方法为在黑曲霉原生质体上进行常压室温等离子体诱变，具体包括如下步骤：(1)孢子预培养；(2)菌体酶解脱壁；(3)常压室温等离子体诱变；(4)原生质体再生培养；(5)24孔板筛选；(6)摇瓶发酵复筛。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中孢子预培养的方法为：从活化培养好的斜面收集孢子，并以106个/mL的接种量接种到装有50mL培养基的250mL三角瓶中，30℃，200rpm培养16h，然后收集菌球。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)的具体方法为：将菌球用KMC液洗涤2～3次后过滤，然后加入50mL溶壁酶和几丁质酶溶液，混匀，置于37℃水浴保温处理2h后，4℃2000g离心10min，弃上清液，用KMC液洗涤2次除去细胞壁酶解液，将原生质体悬浮于100μLKMC液中备用。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)的具体方法为：将原生质体悬液吸取10μL置于载片上，常压室温等离子体诱...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭艳红，胡志杰，蒋小东，孙福新，金赛，邵玉芬，李江华，刘龙，
申请(专利权)人：江苏国信协联能源有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32