本发明专利技术公开了一种海蜇胶原蛋白。其是从海蜇的中胶层提取的，该胶原蛋白为白色纤维状固体或浅黄色固体粉末，堆密度为０．１１０－０．６４５ｇ／ｍｌ，该胶原蛋白在酸性溶液中完全溶解，呈澄清透明溶液；该胶原蛋白的单链分子量在１０－３０万道尔顿，糖含量为２．５－５％，氨基酸含量为８０－９５％ｍｇ／１００ｍｇ；其中，天门冬氨酸占７．９－８．３％，谷氨酸占１０．０－１２．９％，苏氨酸占３．５－４．０％，缬氨酸占３．５－３．９％，异亮氨酸占２．２－２．５％，赖氨酸占３．４－３．８％，羟赖氨酸占２．０－２．７％。该海蜇胶原蛋白的制备方法是：（１）使用盐渍海蜇或新鲜海蜇；（２）原料的预处理；（３）分离中胶层；（４）解离中胶层；（５）超滤分离浓缩；得到分子量在１０－３０万道尔顿的胶原蛋白，其截留率９５％－９８％；该方法可以有效回收蛋白酶，使反应体系循环利用，得到的胶原蛋白产品纯度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及海洋生物化工原料的改进，具体讲是一种。其属于生物医药化工
技术介绍
海蜇，又名水母，属腔肠动物。海蜇是肉食性的，以浮游生物，小的甲壳类、多毛类甚至小的鱼类为食。身体呈伞体半球形，伞径一般30至45厘米，大的可达100厘米。海蜇的表皮层与胃层之间为中胶层(mesoglea)，中胶层非常发达，占据了其身体的几乎整个厚度，其中含有纤维及少量来源于外胚层的细胞。中胶层硬而厚，电子显微镜下可见中胶层有许多小纤维。中胶层中的主要成分是水分，其中含有极少量的蛋白质及多糖，含有机物为5％，并以胶原蛋白质的形式存在，这种物质具有很强的弹性和粘合力。海蜇是我国久负盛名的食用大型浮游动物，近年来，养殖界攻克了人工育苗、螅状体幼体越冬和幼蜇放流等技术难关，具有持续的海蜇资源供应。海蜇皮主要成分为蛋白质(胶原蛋白)，不含胆固醇和脂肪酸。有美国专利(USpatent6,894,029)报道了利用口冠水母科的口冠水母(Stomolophus meleagris)采用冻干、碱洗、酸洗、蛋白酶消化、分级盐析工艺，制得类II胶原，用于治疗类风湿关节炎。还有日本专利(JP2004099513)报道了利用洋须水母科的海月水母(Aureiiaaurita)，采用缓冲液萃取胶原、胶原沉淀和分离、胶原脱水、冷冻干燥工艺制备胶原，从海月水母中提取的活性水母胶原具有抗菌活性，microorganismPropionibacterium acnes疮疱丙酸杆菌，是引起面部丘疹的致病菌。国内较多文献报道了从牛腱、猪皮、猪软骨、鱼皮、鱼鳞中提取胶原蛋白的技术和工艺，均是采用酶解盐析提取工艺，采用盐析提取存在的问题是蛋白酶回收困难、盐回收困难和酸性溶液的循环利用困难。现有技术的海蜇胶原提取方法，均是采用将海蜇内外胚层与中胶层混合提取。这种内外胚细胞杂蛋白溶解和解离，对海蜇胶原提取带来影响。另外大多采用胶原蛋白酶解离与盐析工艺结合提取，盐析工艺缺点是采用大量的食盐，对形成含盐废水。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种，采用新的纯化工艺，有效回收提取工具酶，循环利用反应体系，得到的活性胶原蛋白纯度高，收得率高。本专利技术的目的是由以下技术方案实现的，研制了一种海蜇胶原蛋白。所述的胶原蛋白是从海蜇的中胶层提取的，该胶原蛋白为白色纤维状固体或浅黄色固体粉术，堆密度为0.110-0.645g/ml，该胶原蛋白在酸性溶液中完全溶解，呈澄清透明溶液；该胶原蛋白的单链分子量在10-30万道尔顿，糖含量为2.5-5％，氨基酸含量为80-95％mg/100mg；其中，天门冬氨酸占7.9-8.3％，谷氨酸占10.0-12.9％，苏氨酸占3.5-4.0％，缬氨酸占3.5-3.9％，异亮氨酸占2.2-2.5％，赖氨酸占3.4-3.8％，羟赖氨酸占2.0-2.7％。一种上述海蜇胶原蛋白的制备方法，按如下步骤进行；(1)采用的原料为大型海蜇，使用盐渍海蜇或新鲜海蜇；(2)原料的预处理；将经盐渍脱水后的海蜇，用浓度为0.1-0.5％的碱性溶液洗涤、浸泡；浸泡时间0.5-2h，浸泡后的溶液pH为6-8，碱洗时有氨气产生，气泡明显；海蜇皮的上下皮层由原来的白色不透明，变为透明，而且容易剥离去掉，除去不良气味，氨离子及杂质；(3)分离中胶层；将碱性溶液洗涤、浸泡后的盐渍脱水海蜇，去掉透明的上下皮层，可明显见白色的中胶层，磨碎该白色的中胶层；(4)解离中胶层；采用蛋白酶解离磨碎的中胶层，酶用量0.1％-2％，解离温度10-30℃，搅拌解离时间10-48h；(5)超滤分离浓缩；将上述蛋白酶解离的中胶层离解液，采用超滤膜过滤器，控制膜进口压力在12kg/cm2，或采用外加电场10-70V/cm，截留浓缩分子量在10-30万道尔顿的胶原蛋白，其截留率95％-98％；再将剩下的含有蛋白酶的离解液，采用醋酸纤维HFA-200膜，将蛋白酶截流分离出来，回收该蛋白酶重复循环使用；(6)分离浓缩的胶原蛋白再经冷冻干燥，即采用慢速冻结方式，升华阶段的真空度在10-30Pa，冷阱温度在-50±0.1℃，得到白色纤维状固体或浅黄色固体粉末。所述的(1)步采用的大型海蜇原料包括根口水母科(Rhizostomalidae)的海蜇属的海蜇(Rhopilema esculentum Kishinouye)；黄斑海蜇(Rhopilema hispidum)和叶腕水母科(Lobonematidae)的叶腕水母属(Lobonema)的叶腕海蜇(LobonmaSmithi)。所述的(1)步原料盐渍海蜇质量符合国家标准，即水分，小于68％，食盐，18-25％，明矾，1.2-2.2％。所述的(2)步原料的预处理中采用的碱性溶液为氢氧化钠溶液，碳酸钠溶液，碳酸氢钠溶液。所述的(4)步解离中胶层所采用的蛋白酶或为酸性蛋白酶，或碱性蛋白酶。所述的(4)步解离中胶层之后，还可将浓缩的湿胶原蛋白，再经胶原酶深度水解，该胶原酶的用量0.1-2.0％，解离温度20-40℃，解离时间10-48h，得到水解多肽，即，得到含30个左右的氨基酸残基的结构胶原多肽，该多肽分子长度为30-50纳米，分子量3000-20000道尔顿。所述的(5)步超滤分离浓缩中所采用超滤膜，或采用聚合物膜Diaflo(XM30)，或采用聚芳醚砜膜，或采用中空纤维素膜，或采用非对称超滤UF膜，或采用非对称超滤FS膜，或采用非对称超滤HF膜，或采用非对称超滤T膜。本专利技术的优点在于由于在(2)步原料的预处理中，将经盐渍脱水后的海蜇，用浓度为0.1-0.5％的碱性溶液洗涤、浸泡；碱洗时有氨气产生，气泡明显；碱洗预处理目的是将海蜇皮上下皮层(即表皮层与胃层)，由原来的白色不透明，变为透明，软化容易剥离，去除有色层；再是除去盐渍过程中的明矾等杂质和分解的氨类物质等，恢复海蜇蛋白活性；使得(3)步分离中胶层，去掉透明的上下皮层，顺利得到白色的中胶层，以便磨碎该白色的中胶层。由于在(4)步解离中胶层是，采用蛋白酶解离磨碎的中胶层，同时保留胶原蛋白的糖含量。采用苯酚-硫酸法(张维杰，1999)测定样品中糖含量；以果糖为标准，于490nm处测定。由于采用超滤浓缩纯化工艺，可以有效回收蛋白酶，使反应体系循环利用。本工艺得到的胶原蛋白产品，明显不同于牛、猪、鱼等提取的胶原蛋白的特征。采用分离的脱水脱腥的中胶层，经绞碎后，采用蛋白酶解离，超滤工艺，冷冻干燥，得到纯度高，具有活性的胶原蛋白。若进一步得到胶原蛋白多肽，可以将未干燥胶原，再经胶原酶深度水解，得到水解多肽，采用喷雾干燥工艺得到干粉，以利于存储。经不论从紫外吸收，常规氨基酸质量分数测定，还是从红外谱图测定看，所提取的蛋白质凝胶是胶原蛋白，与文献报道的海蜇胶原蛋白相符，而且获得的胶原蛋白纯度也较高。本专利技术海蜇胶原蛋白以盐渍海蜇原料计算，胶原蛋白收得率为3-5％。具体实施例方式实施例1)取盐渍海蜇120g，在0.2M氢氧化钠溶液100ml，浸泡2h，浸泡后的溶液为pH6.5，碱洗时有氨气产生，气泡明显，可以除去氨离子及杂质。海蜇皮由白色不透明，变为透明(与冷冻脱水海蜇类似)，可明显见中胶层。去掉上下皮层，白色中胶层切片后置冰柜中保存。取上述中胶层，磨碎，加0.1M乙酸，20ml，再加600mg胃蛋白酶(华美，Sina-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种海蜇胶原蛋白，其特征在于：所述的胶原蛋白是从海蜇的中胶层提取的，该胶原蛋白为白色纤维状固体或浅黄色固体粉末，堆密度为０．１１０－０．６４５ｇ／ｍｌ，该胶原蛋白在酸性溶液中完全溶解，呈澄清透明溶液；该胶原蛋白的单链分子量在１０－３０万道尔顿，糖含量为２．５－５％，氨基酸含量为８０－９５％ｍｇ／１００ｍｇ；其中，天门冬氨酸占７．９－８．３％，谷氨酸占１０．０－１２．９％，苏氨酸占３．５－４．０％，缬氨酸占３．５－３．９％，异亮氨酸占２．２－２．５％，赖氨酸占３．４－３．８％，羟赖氨酸占２．０－２．７％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：石红旗，
申请(专利权)人：国家海洋局第一海洋研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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