削弱HIV-1增殖的方法和组合物技术

一种结合出现在ＨＩＶ－１多种毒株和亚型中的ＨＩＶ－１　　Ｔａｔ蛋白表位内的多种变体序列的单一分离的抗体或其抗体片段。这种“泛－表位”抗体被用于治疗性和预防性组合物及治疗ＨＩＶ－１感染而无论是何种毒株。这种泛－表位抗体被用于基于测量生物样品中Ｔａｔ蛋白的量而检测ＨＩＶ－１水平的试验。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】削弱HIV-1增殖的方法和组合物专利技术背景本专利技术总的涉及用于抑制有症状或无症状的慢性感染患者中的人免疫缺陷病毒-ICHIV-I)增殖、从而尽可能减少发展成AIDS的组合物和方法。目前采用了或正在研究多种治疗人免疫缺陷病毒(HIV-1)患者的治疗方法。某些治 疗HIV-1的方法关注于HIV-1的反式激活基因(^0，该基因产生病毒高水平转录必需 的蛋白质(Tat)。已测定了^^基因及其蛋白质的序列，并检测了它们在HIV的建议治 疗中的作用(例如可参见美国专利6,525,179)。 Tat蛋白在细胞外释放，使它可被其它 感染细胞摄取，以增强这些细胞中HIV-1的转录，它也可被未感染的细胞摄取，从 而改变宿主细胞的基因激活作用并使细胞易于被病毒感染。细胞对Tat的摄取非常强 烈，己报道这种摄取由该蛋白质的一条短的碱性序列介导(S. Fawell等，1994 Proc. Natl, Acad. Sci.， USA, 91:664-668)。已经在动物中制得了 Tat蛋白的单克隆和多克隆抗体，这两种抗体显示能在体外 阻断Tat蛋白的摄入，将Tat蛋白的这种单克隆或多克隆抗体加入组织培养介质能在 体外减弱HIV-1感染(例如可参见美国专利6,524,582中提到的文献)。本专利技术共同专利技术人之一先前发表的科学论著和专利(例如，G. Goldstein, 1996 Nature Med.， 2:960; G. Goldstein, 2000 Vaccine, 18:2789; 1995年11月30日公布 的国际专利申请WO 95/31999; 1999年1月21日公布的国际专利申请WO 99/02185; 2002年11月8日公布的国际专利申请WO 01/82944;美国专利5,891,994;6，193,981; 6,399,067; 6,524,582;和6,525,179;公布的美国专利申请US 2003/0,166,832和US 2003/0,180,326)指出，HIV-1 Tat蛋白上某些表位的抗体可作为AIDS疫苗和治疗剂。例如，这些公布涉及与跨越下述Tat氨基酸残基4-12的"HIV-1 Tat表位1"序列 内的表位特异性结合的抗体Val-Asp-Pro-X7-Leu-Y9-Pro-Trp-Z12-(SEQIDNO: 1)，其 中，X7是Arg、 Lys、 Ser或Asn， Y9是Glu或Asp， Z^是Lys或Asn，以及由该抗 体和HIV-1 Tat的其它抗体组成的组合物。这些公布还涉及含有与跨越下式所示Tat 氨基酸残基41-50的"HIV-1 Tat表位2"序列内的表位特异性结合的分离抗体的其它 抗体组合物-Lys-X4rLeu-Gly-Ile-Ser-Tyr-Gly-Arg-Lys-(SEQ ID NO: 2)，其中，X42是Gly或Ala。此外，这些公布涉及与跨越下式所示Tat氨基酸残基56-62的"HIV-1 Tat表位3"序列内的表位特异性结合的分离抗体-Arg-ATg-X58-Z59-A6(rY61-Ser- (SEQ ID NO: 3)，其中，Xss是Ala、 Pro、 Ser或Gln， Zs9是Pro或His， A6o是Gln或Pro， Y^是Asp、 Asn、 Gly或Ser，或是与跨越下式所示Tat氨基酸残基62-73的"HIV-1 Tat表位4 "序列内的表位特异性结合的分离抗体 -Ser-Gln-X64-His-Gln-Y67-Ser-Leu-Ser-Lys-Gln-Pro- (SEQ ID NO: 4),其中，X64是Asn 或Thr， Y67是Ala或Val。由这些抗体的组合，其中尤其包括一种表位1变体的抗体和分别结合不同表位1 变体的一种或多种抗体的组合，以及这种表位1抗体和表位2抗体的其它组合，形 成的组合物能够结合大量多种HIV-l毒株和亚型(B进化支和非B进化支)特有的Tat 变体序列。这些抗体组合物被设计用来在感染初期和/或血清转化后病毒载量较低时 抑制HIV-l感染，从而延迟发展成AIDS。再者，这些所得组合物或这种抗-Tat抗体 的混合物具有可治疗病毒许多毒株和亚型的优点，因此不需要不同的、特异于毒株的治疗剂。尽管关于HIV-l疾病发展的知识不断积累，但本领域仍需要开发治疗慢性HIV-l 感染的组合物和方法，以延迟或阻止感染发展到通常致命的、全面的AIDS。专利技术概述一方面，本专利技术提供了一种单一分离的抗体或其片段，其结合多种HIV-l Tat表 位1变体序列(以后称为"泛-表位(pan-epitope) 1"抗体)，从而结合多种毒株和亚型 的HIV-1 Tat蛋白。 一实施方案中，所述单一泛-表位1抗体结合HIV-l Tat表位1的 5种或至少5种变体序列，这将在以下本专利技术的详细描述中详细定义。另一实施方案中，所述单一泛-表位1抗体结合HIV-l Tat表位1的至少2种变体 序列。再在其它实施方案中，所述单一泛-表位1抗体或片段结合至少一种如下文所 定义的变体Tat表位1序列(a)-(d)和至少一种如下文所定义的变体序列(e)-(h)。另一 实施方案中，所述单一泛-表位l抗体结合至少3种、或者至少4种变体HIV-lTat表 位1序列。另一实施方案中，所述单一泛-表位1抗体结合这些序列中的至少6种。另一实 施方案中，所述单一泛-表位1抗体结合至少7种或者至少8种变体HIV-1 Tat表位1 序列。另一实施方案中，所述单一泛-表位1抗体结合9种或更多变体HIV-1 Tat表位 1序列。另一实施方案中，单一泛-表位1抗体与95%以上的HIV-1 Tat蛋白(B进化 支和非B进化支)的已知变体反应。另一方面，本专利技术提供了一种含有一种上述单一泛-表位1抗体的药物组合物。 另一实施方案中，所述组合物含有多种不同上述泛-表位1抗体。再在另一实施方案 中，所述组合物含有其它HIV-1抗体。这种组合物被用来使导致AIDS的慢性病毒血 症最小化。这种组合物对于有或没有症状慢性感染患者或对于接受其它抗逆转录病 毒治疗的患者有用。再一方面，本专利技术提供了一种诊断试验试剂，其中含有上述单一泛-表位1抗体 或片段以及可检测标记或标记系统。另一方面，本专利技术提供了一种用于进行夹心试验的试剂盒，其中装有一种或多种 泛-表位1抗体或片段、一种或多种结合HIV-1 Tat上除表位1之外的表位的其它HIV-1 Tat抗体，以及任选的一种或多种用于鉴定抗体的结合的可检测标记或标记系统。在其它方面，本专利技术提供了一种用于进行某种试验的试剂盒，其中装有一种或多 种泛-表位1抗体或片段以及一种或多种用于鉴定泛-表位1抗体与Tat的结合的可检 测标记或标记系统。本专利技术的另一种试剂盒还包括有涂层的固态支持物、混杂基材 和引起或检测由标记提供的信号的装置，以及采集血样的常规装置、合适的试管和 其它诊断试验组件。再在另一方面，本专利技术提供了一种通过给予受感染的人类对象这里所述的药物组 合物以在所述对象中抑制HIV-1复制或降低HIV-1病毒水平的方法。 一实施方案中， 所述方法包括给予本专利技术的组合物以在慢性感染对象中维持较低的HIV-1病毒水平。另一方面，本专利技术提供了泛-表位1抗体在制备用于在人类对象中抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单一分离的抗体或其抗体片段，其结合ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白表位内的多种变体序列，其中，所述表位用下式表示　　　　Ｒ↓［１］－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｘ↓［７］－Ｌｅｕ－Ｙ↓［９］－Ｐｒｏ－Ｒ↓［２］（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５），　　　　其中，Ｘ↓［７］是Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ或Ａｓｎ；　　　　其中，Ｙ↓［９］是Ｇｌｕ或Ａｓｐ；　　　　其中，Ｒ↓［１］不存在或是Ｖａｌ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ或Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ；　　　　其中，Ｒ↓［２］不存在或是Ｔｒｐ－Ｚ↓［１２］－Ｒ↓［３］；　　　　其中，Ｚ↓［１２］不存在或是Ｌｙｓ或Ａｓｎ；和　　　　其中，Ｒ↓［３］不存在或是序列－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－的全部或部分；　　　　所述单一抗体或片段结合多种毒株和亚型的ＨＩＶ－１　　Ｔａｔ蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：G戈尔茨坦，R卡尔松，E索内森，Y斯藤伯格，L斯特兰德伯格，
申请(专利权)人：西蒙有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]