高纯度丹参酮ⅡA的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种高纯度丹参酮ⅡＡ的制备方法，包括：（１）将药材丹参根及根茎以醇提取，浓缩析出胶质，过滤或离心除去杂质；（２）加水，得丹参总酮沉淀，过滤干燥；（３）将丹参总酮采用正相层析，通过多功能层析系统进行分离，洗脱液浓缩，重结晶，得高纯度丹参酮ⅡＡ。该方法收率及纯度高、成本低，适合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属丹参酮IIA的制备方法领域，特别是涉及一种高纯度丹参酮IIA的制备方法。 背暈玟术丹参为唇形科鼠尾草属植物(SalviamiltiorrhizaBunge)丹参的干燥根部及根茎，具活 血化瘀，凉血消肿，清心除烦之功效。丹参酮IIA (TanshinoneIIA， Tan)结构如图1，是 丹参中含量较高，是主要的药效成分之一，对心脑血管疾病、肿瘤、白血病等具有潜在的 治疗作用，已引起国内外学者的重视李瑞环，王玲.丹参酮IIA的药理研究进展.现代中 西医结合杂志，2006,15(23): 3303-3305。然而作为主要的有效成分之一，丹参酮IIA目前常用的提取分离方法中普遍存在得率 低，溶剂消耗量大，能耗大等问题，主要原因在于工艺流程过长、后处理方法繁琐，如文 献报道采用一定浓度的乙醇提取获得浸膏后，用热水洗去浸膏中的水溶性成分，再通过氧 化铝柱层析以苯等有机溶剂洗脱分段切割法等来分离出较纯的单体成分王庆伟，杨频， 张立伟.丹参酮的有效分离.山西大学学报(自然科学版)，1994,17(3》294-298。由于该 方法操作复杂、步骤多，且使用的溶剂有很强的毒性，既污染环境，又危害人们的身体健 康，对于长时间做此分离工作的人员有较大的伤害，难以在工业化生产中应用。也有在用 乙醇提取丹参获得浸膏，再用甲醇溶解除去不溶性杂质，将甲醇溶解物采用Sephadex LH-20 分离获得丹参酮IIA的报道董蕊，郑毅男.丹参中丹参酮成分的分离与鉴定.吉林师范大 学学报(自然科学版)，2004,5(2): 100-104，但由于SephadexLH-20材料昂贵、载样量小， 因此目前多停留在实验室研究阶段。由于丹参酮中存在丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹参酮I、隐丹参酮等一系列化学结构极其 相似的化合物，使得丹参酮IIA的纯化工作非常困难。然而随着近年来分子生物学和细胞生 物学的研究进展，发现丹参酮IIA越来越广泛、突出的生物活性，如可抑制AngII所诱导的 心肌细胞的凋亡和肥大谢辉，郑智.丹参酮IIA对血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大、凋 亡的影响.高血压杂志，2004,12(4): 359、显著改善自发性高血压大鼠的左心室肥厚柳 锋，郑智，钟强.丹参酮nA对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌细胞凋亡的影响.中华实 用中西医杂志，2004，17(8):1096，对大鼠肝星状细胞氧应激所致脂质过氧化的抑制作用， 在细胞水平上表现出显著的抗肝纤维化效应杨伟峰，陈厚昌，夏笔军.丹参酮IIA对肝星 状细胞增殖及分泌细胞外基质的影响.实用医学杂志，2003，19(11): 1191以及通过改善脑线粒体能量代谢、抗氧化作用对脑缺血再灌注损伤的保护作用胡霞敏，周密妹，胡先敏，王 君.丹参酮IIA对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对能量代谢的影响.中国临床药学 杂志，2006,15(3): 176-179。随着研究的深入展开，丹参酮IIA的需求会不断增加，因此迫 切需要研制出一种低毒、低能耗、高纯度、高收率的丹参酮IIA的制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高纯度丹参酮IIA的制备方法，该方法不仅适合实验室制备高 纯度丹参酮IIA样品，更适合工业化生产的要求。本专利技术的高纯度丹参酮IIA的制备方法，包括下列步骤(1) 将药材丹参根及根茎以醇提取，浓縮析出胶质，过滤或离心除去杂质；(2) 加水，得丹参总酮沉淀，过滤干燥；(3) 将丹参总酮采用正相层析，通过多功能层析系统进行分离，洗脱液浓縮，重结晶， 得高纯度丹参酮HA。所述步骤(1)中的以醇提取是用甲醇或乙醇经回流、超声或渗漉方法提取； 所述步骤(2)中的加水是加水量为1% 99%;所述多功能层析系统是集回流、柱色谱分离、样品收集于一体的系统，其中样品洗脱 采用回流方法，可根据需要选择减压回流及常压回流，温度控制在0 60'C，设备示意图 见图2;所述多功能层析系统的柱色谱分离中的色谱分离溶剂为一种低极性与一种中极性溶 剂的组合，其体积比为99:1 90:10，其中低极性溶剂为石油醚、正己烷或环己垸中的一 种，中极性溶剂为乙酸乙酯、二氯甲垸或二氯乙烷中的一种；所述多功能层析系统的柱色谱分离中的色谱材料为硅胶或氧化铝；所述步骤(3)中的浓缩是得含量90%-100%的丹参酮11八；所述步骤(3)中的重结晶是用乙醇反复重结晶；所述的高纯度丹参酮IIA是含量98% 100%丹参酮IIA，该丹参酮IIA可以通过药剂 学方法制成注射剂。本专利技术采用的多功能层析系统主要由三部分组成底部溶剂回流装置、恒压滴液装置、 冷凝装置，为便于说明，以玻璃仪器装置图示意说明如下 (1)溶剂回流装置该部分既相当于加热引起回流的热源部分，又相当于柱色谱的溶剂接收装置，主要包 含三部分1A、 1B、 1C，其中1A为装洗脱溶剂的装置，在实验室装置中可为三颈瓶；1B为回流洗脱完后溶剂的出口；可以真空抽出，1C为溶剂加入的进口。在实验室操作中回流 的热源常用水浴，在工业化生产中可以将1A制造成带夹层的提取罐，夹层通入蒸汽加热 形成溶剂回流。(2) 恒压滴液装置该部分实际上相当于一个柱色谱系统，主要包含2A、 2A'、 2B、 2C,其中2A、 2A' 为两个活塞连接装置，2A相当于层析柱的开关，2A'处的活塞在回流洗脱后溶剂从1B抽 出时处于关闭状态，保证真空度；2B为装填色谱材料的层析系统，可以做成球形、梨形， 目的是增大体积、降低普通柱层析的高度以方便操作，该部分可以装填硅胶或氧化铝；2C 为该系统装填色谱材料的侧方开的进口。(3) 冷凝装置该部分在实验室操作时可以接一球形冷凝管(3A)，上部通过连接活塞(3B)引入真 空减压操作，使1A的溶剂加热在较低温度下即可形成回流。在工业化生产中，3A设备通 常为冷却塔，3B为经冷却塔接入真空系统的配套连接口。本专利技术的有益效果-(1) 本专利技术工艺过程简单、可控，用醇溶液提取丹参药材继而通过浓縮后冷却静置，除 去胶质，加入适当量的水得到丹参总酮的沉淀，大大简化了操作程序；(2) 本专利技术工艺过程污染小、成本低，本专利技术在整个工艺过程中舍弃了苯、氯仿等毒性 大的溶剂，改用基本无毒的己烷、乙酸乙酯等系统，大大降低了对操作人员的危害，减少 了环境污染，非常适合工业化生产；(3) 本专利技术分离速度快，生产周期短，采用多功能层析系统使得回流、柱色谱分离、样 品收集于一体，通过重结晶，2 3天即可完成一个生产周期，因此具有很好的应用前景。 附图说明图1是丹参酮IIA的结构式；图2是实施例1中提取丹参总酮的流程图3是本专利技术中的多功能层析系统；图4是实施例1中制得的丹参酮IIA的HPLC谱图5是实施例2中制得的丹参酮IIA的HPLC谱图6是实施例3中制得的丹参酮IIA的HPLC谱图7是实施例4中制得的丹参酮IIA的HPLC谱图8是丹参酮IIA的标准曲线图。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术 而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术 人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限 定的范围。实施例11. 丹参总酮的提取取丹参药材10kg (直径约lcm)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
高纯度丹参酮ⅡＡ的制备方法，包括下列步骤：（１）将药材丹参根及根茎以醇提取，浓缩析出胶质，过滤或离心除去杂质；（２）加水，得丹参总酮沉淀，过滤干燥；（３）将丹参总酮采用正相层析，通过多功能层析系统进行分离，洗脱液浓缩 ，重结晶，得高纯度丹参酮ⅡＡ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周长新，朱志彬，赵霞，尹金瑶，
申请(专利权)人：上海朗萨医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]