山茱萸有效部位提取物及其制备方法和用途技术

山茱萸有效部位提取物及其制备方法和用途，包括山茱萸药材用乙醇提取，提取液减压浓缩后加水沉淀，上清液上大孔吸附树脂柱，水洗脱除杂质，乙醇梯度洗脱，收集洗脱液减压干燥，得到山茱萸有效部位提取物，其医药新用途为在制备防治糖尿病血管病变和降低血糖药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种山茱萸的有效部位提取物，还涉及该提取物的制备方法和用途，属于中药领域。
技术介绍
糖尿病是一种慢性全身进行性的内分泌代谢疾病，持续的高血糖会导致一些组织器官代谢异常，继而引起其功能障碍及形态改变。糖尿病病程超过10年，大部分患者合并程度不等的血管并发症，尤其是微血管并发症。糖尿病微血管病变是指微循环障碍、微血管瘤形成和微血管基底膜增厚，主要包括糖尿病肾病和糖尿病性视网膜病变，严重者可导致尿毒症或失明，给患者造成了巨大的身心痛苦。因此，发现和研制防治糖尿病微血管病变、降低血糖的药物具有重要意义。山茱萸(Cornus officinalis Sieb et Zu cc.)具有补益肝肾、涩精固脱的作用，是临床常用中药，我国自古就有山茱萸应用于糖尿病(中医称为“消渴症“)治疗的记载。近年来，国内外学者对山茱萸的多种有效成分进行了研究，从中分离得到环烯醚萜总苷、总多糖、鞣质等多个有效部位，其中环烯醚萜总苷主要包括马钱素(loganin)，莫诺苷(morroniside)，獐芽菜苷(sweroside)等化合物。中国专利96109637.7公开了具有免疫抑制作用的山茱萸水煎提取物及其制备工艺。中国专利申请02159502.X公开了具有防治缺血性血管病作用的山茱萸水煎提取物及其制备方法。但是，迄今为止，尚未见有针对山茱萸环烯醚萜总苷有效部位的制备工艺，也未见有将该有效部位用于制备防治糖尿病血管病变和降低血糖药物用途的报导。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种山茱萸有效部位提取物及其制备方法，以及该提取物的医药新用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下。本专利技术所述的山茱萸有效部位提取物是通过下述方法获得的提取物(1)山茱萸药材用乙醇提取，合并乙醇提取液，过滤后减压浓缩；(2)将浓缩液加水沉淀后离心，上清液减压浓缩备用；(3)将(2)得到的浓缩液上中等极性或非极性大孔吸附树脂柱；(4)用去离子水洗脱除去杂质后，再用乙醇梯度洗脱；(5)收集乙醇洗脱液减压干燥，粉碎后得到山茱萸有效部位提取物。上述提取方法的条件范围为步骤(1)中乙醇浓度为10～90％，步骤(4)中乙醇浓度为20～70％。上述提取方法的优选条件范围为步骤(1)中乙醇浓度为60％～90％，步骤(4)中乙醇浓度为30～50％。在上述提取方法中，山茱萸有效部位提取物可以采用乙醇回流法、浸渍法和渗漉法提取。本专利技术所说的山茱萸有效部位提取物是以环烯醚萜总苷(iridoids)为主要活性成分的提取物。本专利技术所说的山茱萸是山茱萸属植物山茱萸Cornus officinalis Siebet Zucc.的成熟果肉，包括生药和炮制品。本专利技术对山茱萸有效部位提取物进行了薄层鉴别和含量测定。(1)本专利技术提取物的薄层鉴别条件如下薄层板硅胶G板，展开剂氯仿-甲醇(7∶3)，显色剂喷10％硫酸-乙醇后于105℃烘10分钟，于日光下检测可看到马钱素和莫诺苷的斑点。(2)本专利技术提取物应用了高效液相仪进行了定量分析，其含量测定条件如下色谱柱PhenomenexLuna 5μmC18，250×4.60mm；流动相甲醇-水(30∶70)；流速1ml/min；检测波长240nm；柱温28℃。经分析，山茱萸有效部位提取物中主要为环烯醚萜苷类化合物，其中包括马钱子苷(loganin)，莫诺苷(morroniside)，獐芽菜苷(sweroside)等成分，其含量占有效部位提取物的50％以上。本专利技术山茱萸有效部位提取物的用途为在制备防治糖尿病血管病变和降低血糖药物中的应用。本专利技术的有益效果如下1.本专利技术的提取工艺简便合理，可以得到山茱萸有效部位提取物环烯醚萜总苷。2.经实验证明，本专利技术山茱萸有效部位提取物在防治糖尿病血管并发症、降低血糖方面有确切的疗效，特别是用于治疗糖尿病肾病和糖尿病视网膜病变等糖尿病微血管病变。所说的糖尿病微血管病变是指微循环障碍、微血管瘤形成和微血管基底膜增厚等，表现为结节性肾小球硬化型病变，弥漫性肾小球硬化型病变，肾小球基底膜增厚，蛋白排泄率增高；视网膜微血管瘤，出血，硬性渗出或棉絮状渗出。所说的降低血糖是指降低糖尿病导致的血糖升高。3.本专利技术山茱萸有效部位提取物能显著降低糖尿病导致的血糖升高；显著降低血清蛋白质糖基化终产物-肽(AGE-P)水平；降低尿微量白蛋白的排除量；降低血清早期蛋白质非酶糖化产物-果糖胺的生成量；改善糖尿病血管并发症引起的血管内皮和肾组织形态学病理改变；抑制肾皮质AGEs的形成，使其受体mRNA表达水平下降，具有减轻糖尿病肾病变的作用；显著降低糖尿病大鼠视网膜毛细血管的内周比，对实验性糖尿病视网膜病变具有一定的防治作用；显著增加SOD的含量，对由糖尿病血管并发症引起的氧化应激损伤具有保护作用；显著升高糖尿病血管并发症大鼠血清NO、NOS的含量，并降低血浆ET含量，部分恢复NO和ET的动态平衡，保护血管内皮细胞；显著降低糖尿病血管并发症模型大鼠血清sICAM-1、TNF-α的含量，有利于控制糖尿病血管并发症的发生和发展。实验例1.山茱萸有效部位提取物对链脲佐菌糖尿病大鼠高血糖的治疗作用实验目的观察本专利技术提取物对链脲佐菌糖尿病大鼠高血糖的治疗作用实验方法取正常大鼠80只，随机取10只作为正常对照组，其余禁食24h，由大鼠腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌60mg/kg造成糖尿病模型，1周后(禁食12h)取尾静脉血用血糖仪测血糖值，若血糖值≥16.7mmol/L并出现多饮、多尿、消瘦的大鼠则列为糖尿病模型动物。取糖尿病模型大鼠36只随机分为3组，模型对照组(生理盐水10ml/kg，ig.)，阳性对照氨基胍组(0.1g.kg-1，ig.)，本专利技术提取物组(0.15g.kg-1，ig.)，另设10只作为正常对照组(生理盐水10ml/kg，ig.)，连续12周，分别给药并禁食2h后6周与12周测定空腹血糖。实验结果造模后大鼠血糖明显升高，并出现多饮、多尿和消瘦的体征。用药12周后，除正常对照组以外，各组均见不同程度的死亡，本专利技术提取物能一定程度的降低糖尿病大鼠血糖。结果见表1。表1本专利技术提取物对链脲佐菌糖尿病大鼠空腹血糖的影响(X±S)剂量 动物数 血糖(mmol/L)组别(g.kg-1) (只) 药前 药后6周 药后12周正常对照组 - 10 5.0±1.1 5.1±1.1 5.3±1.1模型对照组 - 821.4±2.4△△20.9±2.1△△20.6±1.4△△本专利技术提取物组 0.15 821.1±2.8 18.8±2.0△△17.2±1.6△△氨基胍组0.1 821.4±2.2△△18.5±1.9△△*#16.6±0.6△△**##*p＜0.05**p＜0.01与模型组比较；#p＜0.05##p＜0.01与给药前比较；△△p＜0.01与正常对照组比较。本专利技术提取物对糖尿病具有一定的降糖作用。实验例2.山茱萸有效部位提取物对糖尿病血管并发症大鼠血清、血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响实验目的观察本专利技术提取物对糖尿病血管并发症大鼠血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响。实验方法取雄性SD大鼠，180～220g，在正常进食条件下，大鼠先以30mg.kg-1ip.STZ溶液，第本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山茱萸有效部位提取物，其特征在于所说的提取物是通过下述方法获得的提取物：（１）山茱萸药材用乙醇提取，合并乙醇提取液，过滤后减压浓缩；（２）将浓缩液加水沉淀后离心，上清液减压浓缩；（３）将（２）得到的浓缩液上中等极 性或非极性大孔吸附树脂柱；　（４）用去离子水洗脱除去杂质后，再用乙醇梯度洗脱；（５）收集乙醇洗脱液减压干燥，粉碎后得到山茱萸有效部位提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖伟，潘扬，丁岗，章晨峰，韩淑燕，曹亮，
申请(专利权)人：江苏中康新药指纹图谱开发有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]