用于视网膜及CNS基因疗法的AAV载体制造技术
AAV vector for retina and CNS gene therapy
This paper provides an improved rAAV (e.g. rAAV2, rAAVrh8R) for enhanced gene therapy of ocular disorders or symptoms of CNS, wherein the rAAV contains one or more amino acids and heparan sulfate proteoglycan interactions replaced. The present invention provides improved methods for the transduction of retinal cells, as well as methods of treating ocular diseases using improved compositions of rAAV particles. Improved recombinant adeno-associated virus (rAAV) (e.g. rAAV2, rAAVrh8R, etc.) is also provided in this paper for enhanced gene therapy for CNS disorders. The present invention provides a method for delivering rAAV to CNS, a method of treating a CNS disorder with an improved composition of rAAV particles, and kits for delivery of rAAV to CNS and / or treatment of CNS conditions.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2014年5月2日提交的美国临时申请序号61/988,131和2015年2月10日提交的美国临时申请序号62/114,575的优先权权益，其各自通过提述以其整体并入本文。ASCII文本文件上的序列表的提交ASCII文本文件上的如下提交的内容通过提述以其整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：159792010440SEQLIST.txt，记录日期：2015年4月29日，大小：85KB)。专利
本专利技术涉及变体重组腺相关病毒(rAAV)载体，其用于改进对眼部和中枢神经系统的递送；例如用于改进的视网膜基因治疗和改进的CNS基因治疗。专利技术概述视网膜退化性疾病对于腺相关载体(AAV)介导的基因治疗是很有前景的焦点。AAV载体能介导视网膜中的长期基因表达和引发最小免疫响应，使得这些载体对于向眼睛的基因递送而言成为了吸引人的选择。视网膜是眼睛的后部的光敏感性组织，其由多种细胞类型(包括感光细胞、视网膜色素上皮细胞和视网膜神经节细胞)组成。AAV基因治疗载体的靶细胞类型和载体递送途径取决于疾病指征。例如，年龄相关性黄斑变性的I期临床试验采用载体的玻璃体内(intravitreally)递送以实现视网膜神经节细胞的转导，而用于治疗患有Leber氏先天性黑矇2型(一种形式的视网膜色素变性)的患者的一项最近的临床试验使用RPE65基因的视网膜下递送以转导视网膜色素上皮细胞。鉴于这样的效用，需要开发用于改进AAV至眼部递送的新的药剂和方法。基于腺相关病毒(AAV)的载体也已成为用于神经基因治疗的优选载体系统，在多个临床试验中...
【技术保护点】
一种用于将异源核酸递送至个体的眼部的方法，其包括将重组腺相关病毒(rAAV)颗粒施用于个体的视网膜下，其中所述rAAV颗粒包含：a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan)相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.02 US 61/988,131;2015.02.10 US 62/114,5751.一种用于将异源核酸递送至个体的眼部的方法，其包括将重组腺相关病毒(rAAV)颗粒施用于个体的视网膜下，其中所述rAAV颗粒包含：a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfateproteoglycan)相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。2.一种与用包含野生型衣壳的rAAV转导细胞相比在将rAAV颗粒经视网膜下递送至个体的眼部后改进细胞的rAAV转导的方法，该方法包括在AAV衣壳蛋白中并入一个或多个氨基酸取代，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置，编号基于AAV2的VP1编号；其中所述rAAV颗粒包含rAAV衣壳蛋白和rAAV载体，该rAAV载体包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。3.一种将rAAV颗粒经视网膜下递送至个体的眼部后改进异源核酸的表达的方法，该方法包括在AAV衣壳蛋白中并入一个或多个氨基酸取代，该氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置，编号基于AAV2的VP1编号；其中该rAAV颗粒包含rAAV衣壳蛋白和rAAV载体，该rAAV载体包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。4.一种在个体中治疗眼部病症的方法，其包括将包含rAAV颗粒的组合物递送至个体的视网膜，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代减少所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。6.权利要求5的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代将所示rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合减少约至少10％，约至少25％，约至少50％，约至少75％，或约至少100％。7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用不带正电荷的氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。8.权利要求7的方法，其中用疏水性氨基酸残基取代所述带正电荷的氨基酸残基。9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括精氨酸或赖氨酸残基的取代。10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用丙氨酸残基取代精氨酸或赖氨酸残基。11.权利要求1的方法，其中所述rAAV颗粒包括AAV血清型2(AAV2)衣壳。12.权利要求1-11任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487或532，编号基于AAV2的VP1编号。13.权利要求12的方法，其中编号基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。14.权利要求1-11和13任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括在位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。15.权利要求1-12任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:2、4和/或6具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％序列同一性。16.权利要求1-12任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括在位置R484和R487处或在位置R585和R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。17.权利要求1-12任一项的方法，其中所示一个或多个氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，编号基于AAV2的VP1。18.权利要求1-12任一项的方法，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代R585A和R588A，编号基于AAV2的VP1。19.权利要求1-12任一项的方法，其中所示AAV衣壳包含氨基酸取代K532A，编号基于AAV2的VP1。20.权利要求1-10任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣壳。21.权利要求20的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589处，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528或533处，编号基于AAVrh8R的VP1编号。22.权利要求21的方法，其中所述编号基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。23.权利要求20-22任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括在位置R485、R488、K528、R533或T589处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代包括在位置R485、R488、K528或R533处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号。24.权利要求20-23任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所示rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:11具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％序列同一性。25.权利要求20-24任一项的方法，其中一个氨基酸取代包括R533A取代，编号基于AAVrh8R的VP1。26.权利要求1-25任一项的方法，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。27.权利要求1-26任一项的方法，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：抗氧化剂、神经营养因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。28.权利要求1-27任一项的方法，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、内皮他汀(Endostatin)、血管他汀(Angiostatin)、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。29.权利要求1-26任一项的方法，其中所述异源核酸编码治疗性核酸。30.权利要求29的方法，其中所述治疗性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反义RNA、核酶或脱氧核酶(DNAzyme)。31.权利要求1-30任一项的方法，其中所述异源核酸处于在视网膜中表达的启动子序列的控制下。32.权利要求1-31任一项的方法，其中所述异源核酸可操作地连接至适于治疗性多肽或治疗性核酸在一个或多个视网膜细胞类型中表达的启动子。33.权利要求32的方法，其中所述视网膜细胞是感光细胞、视网膜色素上皮细胞、双极细胞、水平细胞、无长突细胞、Muller细胞和/或神经节细胞。34.权利要求32或33的方法，其中所述视网膜细胞是感光细胞。35.权利要求31-34任一项的方法，其中所述启动子是视紫红激酶(RK)启动子、视蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。36.权利要求1-35任一项的方法，其中所述个体是人。37.权利要求36的方法，其中所述异源核酸用于治疗选自下组的眼部病症：常染色体隐性重度早发型视网膜变性(Leber氏先天性黑矇(Leber’sCongenitalAmaurosis))、先天性全色盲、斯塔加特氏病(Stargardt’sdisease)、贝斯特氏病(Best’sdisease)、Doyne氏病、锥体营养不良(conedystrophy)、视网膜色素变性、X连锁视网膜劈裂症(X-linkedretinoschisis)、Usher氏综合征(Usher’ssyndrome)、年龄相关性黄斑变性、萎缩性年龄相关性黄斑变性、新生血管性AMD、糖尿病性黄斑病变、增生性糖尿病性视网膜病(PDR)、囊样黄斑水肿(cystoidmacularoedema)、中心性浆液性视网膜病(centralserousretinopathy)、视网膜脱落、眼内炎、青光眼和后葡萄膜炎。38.权利要求1-37任一项的方法，其中所述rAAV载体是自身互补的rAAV载体。39.权利要求38的方法，其中所述载体包含编码异源核酸的第一核酸序列和编码所述核酸的互补体的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能与第二核酸序列沿其全长或长度的大部分形成链内碱基对。40.权利要求39的方法，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列通过突变的AAVITR连接，其中所述突变的AAVITR包含D区的缺失并包含末端解析序列的突变。41.权利要求1-40任一项的方法，其中所述rAAV颗粒在药物组合物中。42.权利要求41的方法，其中所述药物组合物中颗粒的浓度为约1x106DRP/ml至约1x1014DRP/ml。43.权利要求41或42的方法，其中所述rAAV颗粒的药物组合物对治疗个体的视觉功能是有效的。44.权利要求43的方法，其中视觉功能通过微视野检查法、暗适应视野检查法、视觉活动性评估(assessmentofvisualmobility)、视敏度、ERG、或阅读评估来评价。45.权利要求43或44的方法，其中所述方法导致个体视觉功能的改进。46.权利要求1-45任一项的方法，其中所述方法导致预防由于眼部病症的进展所致的人的视觉功能衰退或是减缓所述衰退的进展。47.一种用于将载体视网膜下递送至个体的眼部的系统，其包括a)组合物，其包含有效量的rAAV颗粒，其中i)rAAV颗粒的衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及ii)所述载体包含异源核酸，所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性RNA和至少一个AAV末端重复；和b)用于视网膜下递送rAAV的装置。48.权利要求47的系统，其中所述装置包含细孔套管和注射器，其中所述细孔套管是27至45号(gauge)。49.权利要求48的系统，其中所述rAAV颗粒的组合物容纳于该注射器内。50.权利要求48或49的系统，其中所述套管附接至该注射器。51.权利要求47-50任一项的系统，其中所述组合物中的颗粒的浓度为约1x106DRP/ml至约1x1014DRP/ml。52.权利要求47-51任一项的系统，其中所述rAAV颗粒包含AAV1衣壳、AAV2衣壳、AAV3衣壳、AAV6衣壳、AAV8衣壳、AAVrh8R衣壳、AAV9衣壳、或AAVrh10衣壳。53.权利要求47-52任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代减少所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。54.权利要求53的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代将所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合减少约至少10％，约至少25％，约至少50％，约至少75％，或约至少100％。55.权利要求47-54任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用不带正电荷的氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。56.权利要求55的系统，其中用疏水性氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。57.权利要求47-56任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括精氨酸或赖氨酸残基的取代。58.权利要求47-57任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用丙氨酸残基取代精氨酸或赖氨酸残基。59.权利要求47-58任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487或532处，编号基于AAV2的VP1编号。60.权利要求59的系统，其中所述编号基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。61.权利要求47-58和60任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位于位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。62.权利要求47-61任一项的系统，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:2、4和/或6具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％、或100％序列同一性。63.权利要求47-61任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括在位置R484和R487处或在位置R585和R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。64.权利要求47-61任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括R484A和R487A处取代或R585A和R588A处取代，编号基于AAV2的VP1。65.权利要求47-61任一项的系统，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代R585A和R588A，编号基于AAV2的VP1。66.权利要求47-61任一项的系统，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代K532A，编号基于AAV2的VP1。67.权利要求47-58任一项的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589处，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528或533处，编号基于AAVrh8R的VP1编号。68.权利要求67的系统，其中所述编号基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。69.权利要求67或68的系统，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528、R533或T589处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528或R533处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号。70.权利要求67-69任一项的系统，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:11具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。71.权利要求67-70任一项的系统，其中一个氨基酸取代包含R533A取代，编号基于AAVrh8R的VP1。72.权利要求47-71任一项的系统，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。73.权利要求47-72任一项的系统，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：抗氧化剂、神经营养因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。74.权利要求47-73任一项的系统，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、内皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。75.权利要求47-72任一项的系统，其中所述异源核酸编码治疗性核酸。76.权利要求75的系统，其中所述治疗性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反义RNA、核酶或脱氧核酶。77.权利要求47-76任一项的系统，其中所述异源核酸处于在视网膜中表达的启动子序列的控制下。78.权利要求47-77任一项的系统，其中所述异源核酸可操作地连接至适于治疗性多肽或治疗性核酸在一个或多个视网膜细胞类型中表达的启动子。79.权利要求78的系统，其中所述视网膜细胞是感光细胞、视网膜色素上皮细胞、双极细胞、水平细胞、无长突细胞、Muller细胞和/或神经节细胞。80.权利要求79的系统，其中所述视网膜细胞是感光细胞。81.权利要求77-80任一项的系统，其中所述启动子是视紫红激酶(RK)启动子、视蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。82.权利要求47-81任一项的系统，其中所述个体是人。83.权利要求82的系统，其中所述异源核酸用于治疗选自下组的眼部病症：常染色体隐性重度早发型视网膜变性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、贝斯特氏病，Doyne氏病、锥体营养不良、视网膜色素变性、X连锁视网膜劈裂症、Usher氏综合征、年龄相关性黄斑变性、萎缩性年龄相关性黄斑变性、新生血管性AMD、糖尿病性黄斑病变、增生性糖尿病性视网膜病(PDR)、囊样黄斑水肿、中心性浆液性视网膜病、视网膜脱落、眼内炎、青光眼和后葡萄膜炎。84.权利要求47-83任一项的系统，其中所述rAAV载体是自身互补的rAAV载体。85.权利要求84的系统，其中所述载体包含编码异源核酸的第一核酸序列和编码该核酸的互补体的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能与第二核酸序列沿其全长或长度的大部分形成链内碱基对。86.权利要求85的系统，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列通过突变的AAVITR连接，其中所述突变的AAVITR包含D区的缺失并包含末端解析序列的突变。87.一种用于治疗眼部病症的试剂盒，其包含a)包含rAAV颗粒的组合物，其中所述rAAV颗粒包含i)包含rAAV衣壳蛋白的rAAV衣壳，所述rAAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及ii)rAAV载体，其包含用于治疗眼部病症的异源核酸和至少一个AAV反向末端重复；和b)适于视网膜下施用的药物赋形剂。88.权利要求87的试剂盒，其中所述rAAV颗粒包含AAV1衣壳、AAV2衣壳、AAV3衣壳、AAV6衣壳、AAV8衣壳、AAVrh8R衣壳、AAV9衣壳或AAVrh10衣壳。89.权利要求87或88的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代减少所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。90.权利要求89的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代将所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合减少约至少10％，约至少25％，约至少50％，约至少75％，或约至少100％。91.权利要求87-90任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用不带正电荷的氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。92.权利要求91的试剂盒，其中用疏水性氨基酸残基取代所述带正电荷的氨基酸残基。93.权利要求87-92任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代包括精氨酸或赖氨酸残基的取代。94.权利要求87-93任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用丙氨酸残基取代精氨酸或赖氨酸残基。95.权利要求87-94任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487或532处，编号基于AAV2的VP1编号。96.权利要求95的试剂盒，其中所述编号基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。97.权利要求87-94和96任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。98.权利要求87-97任一项的试剂盒，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:2、4和/或6具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。99.权利要求87-97任一项的试剂盒，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484和R487处或位置R585和R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。100.权利要求87-97任一项的试剂盒，其中达到一个或多个氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，编号基于AAV2的VP1。101.权利要求87-97任一项的试剂盒，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代R585A和R588A，编号基于AAV-2的VP1。102.权利要求87-97任一项的试剂盒，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代K532A，编号基于AAV-2的VP1。103.权利要求87-94任一项的试剂盒，其中所述一个氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589处，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个氨基酸取代位于位置485、488、528或533处，编号基于AAVrh8R的VP1编号。104.权利要求103的试剂盒，其中所述编号基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。105.权利要求103或104的试剂盒，其中所述一个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528、R533或T589处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528或R533处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号。106.权利要求103至105任一项的试剂盒，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:11具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。107.权利要求103至106任一项的试剂盒，其中一个氨基酸取代包含R533A取代，编号基于AAVrh8R的VP1。108.权利要求87-107任一项的试剂盒，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。109.权利要求87-108任一项的试剂盒，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：抗氧化剂、神经营养因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。110.权利要求87-109任一项的试剂盒，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、内皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。111.权利要求87-108任一项的试剂盒，其中所述异源核酸编码治疗性核酸。112.权利要求111的试剂盒，其中所述治疗性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反义RNA、核酶或脱氧核酶。113.权利要求87-112任一项的试剂盒，其中所述异源核酸处于在视网膜中表达的启动子序列的控制下。114.权利要求87-113任一项的试剂盒，其中所述异源核酸可操作地连接至适于治疗性多肽或治疗性核酸在一个或多个视网膜细胞类型中表达的启动子。115.权利要求114的试剂盒，其中所述视网膜细胞是感光细胞、视网膜色素上皮细胞、双极细胞、水平细胞、无长突细胞、Muller细胞和/或神经节细胞。116.权利要求114的试剂盒，其中所述视网膜细胞是感光细胞。117.权利要求114-116任一项的试剂盒，其中所述启动子是视紫红激酶(RK)启动子、视蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。118.权利要求87-117任一项的试剂盒，其中所述个体是人。119.权利要求118的试剂盒，其中所述异源核酸用于治疗选自下组的眼部病症：常染色体隐性重度早发型视网膜变性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、贝斯特氏病、Doyne氏病、锥体营养不良、视网膜色素变性、X连锁视网膜劈裂症、Usher氏综合征、年龄相关性黄斑变性、萎缩性年龄相关性黄斑变性、新生血管性AMD、糖尿病性黄斑病变、增生性糖尿病性视网膜病(PDR)、囊样黄斑水肿、中心性浆液性视网膜病、视网膜脱落、眼内炎、青光眼和后葡萄膜炎。120.权利要求118的试剂盒，其中所述异源核酸用于治疗选自下组的眼部病症：常染色体隐性重度早发型视网膜变性(Leber氏先天性黑矇)、斯塔加特氏病、视网膜色素变性、Usher氏综合征和年龄相关性黄斑变性。121.权利要求87-120任一项的试剂盒，其中所述rAAV载体是自身互补的rAAV载体。122.权利要求121的试剂盒，其中所述载体包含编码异源核酸的第一核酸序列和编码该核酸的互补体的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能与第二核酸序列沿其全长或长度的大部分形成链内碱基对。123.权利要求122的试剂盒，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列通过突变的AAVITR连接，其中所述突变的AAVITR包含D区的缺失并包含末端解析序列的突变。124.权利要求87-123任一项的试剂盒，其进一步包含用于视网膜下递送rAAV颗粒的组合物的装置。125.权利要求87-124任一项的试剂盒，其进一步包含用于视网膜下递送rAAV颗粒的组合物的说明书。126.一种用于将异源核酸递送至个体的中枢神经系统(CNS)的方法，其包括将重组腺相关病毒(rAAV)颗粒施用于所述个体的CNS，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含所述异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。127.一种与用包含野生型衣壳的rAAV转导细胞相比改进个体的中枢神经系统(CNS)中细胞的rAAV转导的方法，该方法包括将重组腺相关病毒(rAAV)颗粒施用于所述个体的CNS，其中所述rAAV颗粒包含a)包含rAAV衣壳蛋白的rAAV衣壳，所述rAAV衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。128.一种用于改进异源核酸在个体的中枢神经系统(CNS)中的表达的方法，该方法包括将重组腺相关病毒(rAAV)颗粒施用于所述个体的CNS，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。129.一种治疗个体的中枢神经系统(CNS)病症的方法，其包括将有效量的包含rAAV颗粒的组合物施用于所述个体的CNS，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。130.权利要求126-129任一项的方法，其中所述异源核酸以增加的表达水平表达，所述增加是与包含参考rAAV衣壳的rAAV颗粒的异源核酸表达水平相比。131.权利要求126-130任一项的方法，其中所述rAAV颗粒导致与包含参考rAAV衣壳的rAAV颗粒相比减少的神经性炎症。132.权利要求126-131任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含AAV1衣壳、AAV2衣壳、AAV3衣壳、AAV6衣壳、AAV8衣壳、AAVrh8R衣壳、AAV9衣壳，或AAVrh10衣壳。133.权利要求126-132任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代将所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合任选地减少至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约100％。134.权利要求126-133任一项的方法，其中所述施用包括直接脊髓注射、颅内和/或脑内施用。135.权利要求134的方法，其中所述脑内施用位于选自下组的部位：大脑、髓质、脑桥、小脑、颅内腔、围绕脑的脑膜、硬脑膜、蛛网膜、软脑膜、围绕脑的蛛网膜下腔的脑脊液(CSF)、小脑的深部小脑核、大脑的脑室系统、蛛网膜下腔、纹状体、皮层、隔膜、丘脑、下丘脑和脑的实质。136.权利要求126-135任一项的方法，其中所述施用是脑室内注射入至少一个大脑侧脑室。137.权利要求126-135任一项的方法，其中所述施用是鞘内注射于颈、胸和/或腰部中。138.权利要求126-135任一项的方法，其中所述施用是纹状体内注射。139.权利要求126-135任一项的方法，其中所述施用为丘脑内注射。140.权利要求126-135任一项的方法，其中所述施用是实质内(intraparenchymal)注射。141.权利要求126-140任一项的方法，其中所述rAAV颗粒施用于单一部位。142.权利要求135的方法，其中所述rAAV颗粒通过立体定向递送来递送。143.权利要求135或142的方法，其中所述rAAV颗粒通过对流增强递送来递送。144.权利要求143的方法，其中所述rAAV颗粒使用CED递送系统来递送。145.权利要求144的方法，其中所述CED递送系统包含套管和/或泵。146.权利要求145的方法，其中所述套管是抗回流套管或阶梯式套管。147.权利要求145或146的方法，其中所述泵是手动泵。148.权利要求145或146的方法，其中所述泵是渗透泵。149.权利要求145或146的方法，其中所述泵是输液泵。150.权利要求126-149任一项的方法，其中所述异源核酸在CNS的一种或多种细胞中表达。151.权利要求150的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞是少突胶质细胞、星形胶质细胞、神经元、脑实质细胞、小胶质细胞、室管膜细胞(ependemalcell)，和/或浦肯野细胞(Purkinjecell)。152.权利要求126-151任一项的方法，其中所述异源核酸在神经元中表达。153.权利要求152的方法，其中所述异源核酸仅在神经元中表达。154.权利要求126-153任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用不带正电荷的氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。155.权利要求154的方法，其中用疏水性氨基酸残基取代所述带正电荷的氨基酸残基。156.权利要求126-155任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括精氨酸或赖氨酸残基的取代。157.权利要求156的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用丙氨酸残基取代精氨酸或赖氨酸残基。158.权利要求126-157任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585和/或588处，编号基于AAV2的VP1编号。159.权利要求158的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487、527或532处，编号基于AAV2的VP1编号。160.权利要求158或159的方法，其中所述编号基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。161.权利要求126-158和160任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。162.权利要求126-161任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484、R487、K527和/或K532处的取代，编号基于AAV2的VP1。163.权利要求126-162任一项的方法，其中该rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，该rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:2、4和/或6具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。164.权利要求126-162任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，编号基于AAV2的VP1。165.权利要求126-162任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484和R487处或位置R585和R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。166.权利要求126-162任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，编号基于AAV2的VP1。167.权利要求126-162任一项的方法，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代R585A和R588A，编号基于AAV2的VP1。168.权利要求126-162任一项的方法，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代K532A，编号基于AAV2的VP1。169.权利要求126-157任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589处，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528或533处，编号基于AAVrh8R的VP1编号。170.权利要求169的方法，其中所述编号基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。171.权利要求169或170的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528、R533或T589处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528或R533处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号。172.权利要求169-171任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:11具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。173.权利要求169-172任一项的方法，其中一个氨基酸取代包含R533A取代，编号基于AAVrh8R的VP1。174.权利要求126-173任一项的方法，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。175.权利要求126-174任一项的方法，其中所述异源核酸编码CNS相关的基因。176.权利要求126-175任一项的方法，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：酶、神经营养因子、在患有CNS相关病症的个体中缺乏或突变的多肽、抗氧化剂、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子、α-突触核蛋白、酸性β-葡糖苷酶(GBA)、β-半乳糖苷酶-1(GLB1)、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)、半乳糖基神经酰胺酶(GALC)、甘露糖苷酶、α-D-甘露糖苷酶(MAN2B1)、β-甘露糖苷酶(MANBA)、假芳基硫酸酯酶A(ARSA)、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸转移酶(GNPTAB)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、尼曼-皮克C蛋白(Niemann-PickCprotein)(NPC1)、酸性α-1,4-葡糖苷酶(GAA)、己糖胺酶β亚基、HEXB、N-磺基葡糖胺磺基水解酶(MPS3A)、N-α-乙酰葡糖胺酶(NAGLU)、肝素乙酰-CoA、α-葡糖胺酶N-乙酰转移酶(MPS3C)、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶(GNS)、α-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)、β-葡糖醛酸糖苷酶(GUSB)、己糖胺酶α亚基(HEXA)、亨廷顿蛋白(HTT)、溶酶体酸性脂肪酶(LIPA)、天冬氨酰葡糖胺酶、α-半乳糖苷酶A、棕榈酰蛋白硫酯酶、三肽基肽酶、溶酶体跨膜蛋白、半胱氨酸转运蛋白、酸性神经酰胺酶、酸性α-L-岩藻糖苷酶、组织蛋白酶A、α-L-艾杜糖醛酸糖苷酶(alpha-L-iduronidase)、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶A、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯、酸性β-半乳糖苷酶或α-神经酰胺酶(neuramidase)。177.权利要求176的方法，其中所述异源核酸编码选自下组的多肽：神经元细胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神经生长因子(NGF)、神经胶质来源的生长因子(GDNF)、脑源性生长因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、酪氨酸羟化酶(TH)、GTP环化水解酶(GTPCH)、氨基酸脱羧酶(AADC)、抗氧化剂，抗血管生成多肽、抗炎多肽，和天冬氨酸酰基酶(ASPA)。178.权利要求126-175任一项的方法，其中所述异源核酸编码治疗性核酸。179.权利要求178的方法，其中所述治疗性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反义RNA、核酶或脱氧核酶。180.权利要求126-179任一项的方法，其中所述异源核酸处于在CNS的一种或多种细胞中表达的启动子序列的控制下。181.权利要求126-180任一项的方法，其中所述异源核酸处于选自下组的启动子序列的控制下：巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子，猿猴病毒40(SV40)启动子，CK6启动子，甲状腺素转运蛋白启动子(TTR)，TK启动子，四环素响应性启动子(TRE)，HBV启动子，hAAT启动子，LSP启动子，嵌合肝特异性启动子(LSP)，E2F启动子，端粒酶(hTERT)启动子；巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β球蛋白启动子(CAG)启动子，延伸因子1-α启动子(EF1-α)启动子，人β葡糖醛酸糖苷酶启动子，鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子，逆转录病毒劳氏肉瘤病毒(RSV)LTR启动子，二氢叶酸还原酶启动子，和13-肌动蛋白启动子。182.权利要求180的方法，其中所述异源核酸可操作地连接至适于治疗性多肽或治疗性核酸在CNS的一种或多种细胞中表达的启动子。183.权利要求180的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞包含脑的一种或多种细胞。184.权利要求182或183的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞是少突胶质细胞、星形胶质细胞、神经元、脑实质细胞、小胶质细胞、室管膜细胞，和/或浦肯野细胞。185.权利要求182-184任一项的方法，其中所述CNS的细胞是神经元。186.权利要求126-185任一项的方法，其中所述rAAV载体是自身互补的rAAV载体。187.权利要求186的方法，其中所述载体包含编码所述异源核酸的第一核酸序列和编码该核酸的互补体的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能与第二核酸序列沿其全长或长度的大部分形成链内碱基对。188.权利要求187的方法，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列通过突变的AAVITR连接，其中所述突变的AAVITR包含D区的缺失并包含末端解析序列的突变。189.权利要求126-188任一项的方法，其中所述个体是人。190.权利要求126-189任一项的方法，其中所述异源核酸编码用于治疗CNS的病症的治疗性多肽或治疗性核酸。191.权利要求190的方法，其中所述CNS的病症是溶酶体贮积病(LSD)、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、癫痫、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、中风、皮质基底变性(corticobasaldegeneration)(CBD)、皮质基底神经节变性(CBGD)、额颞叶痴呆(FTD)、多系统萎缩症(MSA)、进行性核上麻痹(PSP)或脑癌。192.权利要求191的方法，其中所述病症是选自下组的溶酶体贮积病：天冬氨酰葡糖胺尿症(Aspartylglusoaminuria)、法布里病(Fabry)、婴儿巴藤病(BattenDisease)(CNL1)、经典婴儿后期巴藤病(CNL2)、幼年巴藤病(CNL3)、巴藤病形式CNL4、巴藤病形式CNL5、巴藤病形式CNL6、巴藤病形式CNL7、巴藤病形式CNL8、胱氨酸贮积症、法伯氏病(Farber)、岩藻糖苷贮积症、半乳糖苷贮积症(Galactosidosialidosis)、戈谢病(Gaucherdisease)1型、戈谢病2型、戈谢病3型、GM1神经节苷脂贮积症、亨特病(Hunterdisease)、克拉伯病(Krabbedisease)、α甘露糖苷贮积症、β甘露糖苷贮积症、马-拉病(Maroteaux-Lamy)、异染性脑白质营养不良病、穆尔丘病(Morquio)A、穆尔丘病B、粘脂贮积病II/III、尼曼-皮克病A、尼曼-皮克病B、尼曼-皮克病C、蓬佩病(Pompedisease)、桑德霍夫病(Sandhoffdisease)、圣菲利柏氏症A(SanfillipoAdisease)、圣菲利柏氏症B、圣菲利柏氏症C、圣菲利柏氏症D、辛德勒病(Schindlerdisease)、辛德勒-神崎病(Schindler-Kanzaki)、涎酸贮积症、史莱氏症(Slydisease)、泰-萨二氏病(Tay-Sachsdisease)和沃尔曼病(Wolmandisease)。193.权利要求191的方法，其中所述CNS的病症为亨廷顿氏病或帕金森氏病。194.一种在个体中治疗亨廷顿氏病的方法，其包括将有效量的包含重组腺相关病毒(rAAV)颗粒的组合物施用于所述个体的纹状体，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。195.权利要求194的方法，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。196.权利要求195的方法，其中所述治疗性多肽是亨廷顿蛋白多肽或其片段。197.权利要求195的方法，其中所述治疗性核酸包含针对亨廷顿蛋白的RNAi。198.权利要求197的方法，其中所述RNAi是miRNA。199.一种治疗个体中的帕金森氏病的方法，其包括将有效量的包含重组腺相关病毒(rAAV)颗粒的组合物施用于所述个体的纹状体，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV末端重复。200.权利要求199的方法，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。201.权利要求200的方法，其中所述治疗性多肽为TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。202.权利要求200或权利要求201的方法，其中所述治疗性多肽是AADC或其片段。203.权利要求194-202任一项的方法，其中所述异源核酸以增加的表达水平表达，所述增加是与包含参考rAAV衣壳的rAAV颗粒的异源核酸的表达水平相比。204.权利要求194-203任一项的方法，其中所述rAAV颗粒导致与包含参考rAAV衣壳的rAAV颗粒相比减少的神经性炎症。205.权利要求194-204任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含AAV血清型2(AAV2)衣壳。206.权利要求194-205任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代减少所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合或增加中枢神经系统中细胞的转导。207.权利要求206的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代将所述rAAV颗粒与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合减少约至少10％，约至少25％，约至少50％，约至少75％，或约至少100％，或者将中枢神经系统中细胞的转导增加约至少10％，约至少25％，约至少50％，约至少75％，或约至少100％。208.权利要求194-207任一项的方法，其中所述rAAV颗粒通过立体定向递送来递送。209.权利要求194-207任一项的方法，其中所述rAAV颗粒通过对流增强递送来递送。210.权利要求209的方法，其中所述rAAV颗粒使用CED递送系统来施用。211.权利要求210的方法，其中所述CED递送系统包含套管和/或泵。212.权利要求211的方法，其中所述套管是抗回流套管或阶梯式套管。213.权利要求211或212的方法，其中所述泵是手动泵。214.权利要求211或212的方法，其中所述泵是渗透泵。215.权利要求211或212的方法，其中所述泵是输液泵。216.权利要求194-215任一项的方法，其中该异源核酸在该CNS的一种或多种细胞中表达。217.权利要求216的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞是少突胶质细胞、星形胶质细胞、神经元、脑实质细胞、小胶质细胞、室管膜细胞，和/或浦肯野细胞。218.权利要求194-217任一项的方法，其中所述异源核酸在神经元中表达。219.权利要求218的方法，其中所述异源核酸仅在神经元中表达。220.权利要求194-219任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用不带正电荷的氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。221.权利要求220的方法，其中用疏水性氨基酸残基取代带正电荷的氨基酸残基。222.权利要求194-221任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括精氨酸或赖氨酸残基的取代。223.权利要求222的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括用丙氨酸残基取代精氨酸或赖氨酸残基。224.权利要求194-223任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于484、487、527、532、585和/或588处，编号基于AAV2的VP1编号。225.权利要求224的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置484、487、527或532处，编号基于AAV2的VP1编号。226.权利要求224或225的方法，其中所述编号基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。227.权利要求194-224和226任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。228.权利要求194-227任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484、R487和/或K532处的取代，编号基于AAV2的VP1。229.权利要求194-228任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述衣壳蛋白与SEQIDNO:2、4和/或6具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。230.权利要求194-228任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R484和R487处的取代，编号基于AAV2的VP1。231.权利要求194-228任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R585和R588处的取代，编号基于AAV2的VP1。232.权利要求194-228任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括R484A和R487A取代，编号基于AAV2的VP1。233.权利要求194-228任一项的方法，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代R585A和R588A，编号基于AAV2的VP1。234.权利要求194-228任一项的方法，其中所述AAV衣壳包含氨基酸取代K532A，编号基于AAV2的VP1。235.权利要求194-223任一项的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589处，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代位于位置485、488、528或533处，编号基于AAVrh8R的VP1编号。236.权利要求235的方法，其中所述编号基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。237.权利要求235或236的方法，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528、R533或T589处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号，或所述一个或多个氨基酸取代包括位置R485、R488、K528或R533处的取代，编号基于AAVrh8R的VP1编号。238.权利要求235-237任一项的方法，其中所述rAAV颗粒包含一个或多个rAAV衣壳蛋白，所述rAAV衣壳蛋白与SEQIDNO:11具有至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％，或100％序列同一性。239.权利要求235-238任一项的方法，其中一个氨基酸取代包含R533A取代，编号基于AAVrh8R的VP1。240.权利要求194-239任一项的方法，其中所述异源核酸处于在CNS的一种或多种细胞中表达的启动子序列的控制下。241.权利要求194-239任一项的方法，其中所述异源核酸处于选自下组的启动子序列的控制下：巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子，猿猴病毒40(SV40)启动子，CK6启动子，甲状腺素转运蛋白启动子(TTR)，TK启动子，四环素响应性启动子(TRE)，HBV启动子，hAAT启动子，LSP启动子，嵌合肝特异性启动子(LSP)，E2F启动子，端粒酶(hTERT)启动子；巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β球蛋白启动子(CAG)启动子，延伸因子1-α启动子(EF1-α)启动子，人β-葡糖醛酸糖苷酶启动子，鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子，逆转录病毒劳氏肉瘤病毒(RSV)LTR启动子，二氢叶酸还原酶启动子，和13-肌动蛋白启动子。242.权利要求240的方法，其中所述异源核酸可操作地连接至适于治疗性多肽或治疗性核酸在CNS的一种或多种细胞中表达的启动子。243.权利要求240的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞包含脑的一种或多种细胞。244.权利要求242或权利要求243的方法，其中所述CNS的一种或多种细胞是少突胶质细胞、星形胶质细胞、神经元、脑实质细胞、小胶质细胞、室管膜细胞和/或浦肯野细胞(Purkinjecell)。245.权利要求243的方法，其中所述脑的细胞是神经元。246.权利要求194-245任一项的方法，其中所述rAAV载体是自身互补的rAAV载体。247.权利要求246的方法，其中所述载体包含编码所述异源核酸的第一核酸序列和编码该核酸的互补体的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能与第二核酸序列沿其全长或长度的大部分形成链内碱基对。248.权利要求247的方法，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列通过突变的AAVITR连接，其中所述突变的AAVITR包含D区的缺失并包含末端解析序列的突变。249.权利要求37-46和190-248任一项的方法，其中所述个体是人。250.一种用于权利要求1-46和126-249任一项的方法的试剂盒，其包含重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。251.一种用于将异源核酸递送至个体的中枢神经系统(CNS)的试剂盒，其包含含有重组腺相关病毒(rAAV)颗粒的组合物，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。252.一种用于在个体中治疗中枢神经系统(CNS)病症的试剂盒，其包含含有重组腺相关病毒(rAAV)颗粒的组合物，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含用于治疗CNS病症的异源核酸和至少一个AAV反向末端重复。253.权利要求251或252的试剂盒，其中所述CNS病症是亨廷顿氏病。254.权利要求251-253任一项的试剂盒，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。255.权利要求254的试剂盒，其中所述治疗性多肽是亨廷顿蛋白多肽或其片段。256.权利要求254的试剂盒，其中所述治疗性核酸包含针对亨廷顿蛋白的RNAi。257.权利要求256的试剂盒，其中所述RNAi是miRNA。258.权利要求251或252的试剂盒，其中所述CNS病症是帕金森氏病。259.权利要求258的试剂盒，其中所述异源核酸编码治疗性多肽或治疗性核酸。260.权利要求259的试剂盒，其中所述治疗性多肽是TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。261.权利要求259或权利要求260的试剂盒，其中所述治疗性多肽是AADC或其片段。262.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其用于权利要求1-46和126-249任一项的方法。263.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其用于权利要求1-46任一项的方法。264.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其用于权利要求126-249任一项的方法。265.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其用于治疗个体中的亨廷顿氏病或帕金森氏病，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣壳，其包含含有一个或多个氨基酸取代的rAAV衣壳蛋白，所述氨基酸取代位于与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一个或多个位置处或在对应于氨基酸484、487、527、532、585或588的一个或多个位置处，编号基于AAV2的VP1编号，及b)rAAV载体，其包含异源核酸和至少一个AAV末端重复，其中所述rAAV颗粒经配制用于递送至纹状体。266.一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其用于治疗个体中的亨廷顿氏病或帕金森氏病，其中所述rAAV颗粒包含a)rAAV衣...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·斯卡利亚，J·沙利文，L·M·施塔内克，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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