灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术制造技术

本发明专利技术是一种灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术。灵芝孢子粉用有机溶剂浸泡，浸提液用离心方法得以分离并经旋转蒸发仪于５０℃减压浓缩得油状物，后者经普通的硅胶柱层析进行分离，用氯仿、乙酸乙酯和甲醇依次洗脱，分别蒸干后得一系列的膏状物，用人宫颈癌ＨｅＬａ细胞检测其毒性。本技术可得到天然抗肿瘤成分，得率高，该成分在很低浓度（０．０８ｍｇ／ｍｌ）时具有明显的活性，应用价值极大。整个工艺过程简单，成本低。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术为灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术，涉及一种用于抗肿瘤成分的提取及部分纯化的生产方法。应用先进的提取技术对中草药中有效成分进行提取和初步分离是中医药现代化的重要发展方向之一，一些中草药的单方或复方的粗提液经粗分后已经用于临床并取得了较好的治疗效果，这既承袭了传统中医药标本兼治的文化思想，同时也体现了西医治疗中见效快、目的性强的特点，重要的是克服了西药治疗中的各种毒副作用及药物依赖性的缺憾。灵芝作为一种传统的中草药，是中草药中的上品，已在我国民间及日本、韩国等地应用了上千年，目前，对灵芝中有效成分的分析已引起了国际上的关注。随着灵芝研究的深入，对灵芝的生殖细胞即孢子的研究也在加强。但灵芝孢子中的抗肿瘤成分进行提取和分离还未见报道。本专利技术的目的在于从灵芝孢子中提取和分离抗肿瘤成分。该灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术的实施方案如下A．所用原料为灵芝孢子粉；B．有机溶剂浸提，投料比即孢子粉重量g数与溶剂体积ml数之比为1∶5～1∶15，浸提3次，每次2-5小时，得浸提液；C．浸提液用普通离心机离心沉淀，转速2000～40000转／分，收集上清液；D．上清液用旋转蒸发仪减压蒸干得到油状物，温度维持在45～55℃并回收乙醇；E．油状物用硅胶柱层析进行分离，所用的柱层析填料为无机吸附剂-硅胶，160-200目，在105-110℃恒温加热0．5-1小时后备用；层析柱为普通的玻璃柱，内径2．0cm，柱高20cm，使得直径∶柱高=1∶10，具体操作是1)装柱 硅胶用石油醚溶胀后直接装柱，尽量避免气泡的产生；2)上样 油状物用正己烷溶解后上样，每次上样约5．0g，相当于20．0g孢子粉；3)洗脱 依次用200ml氯仿、200ml乙酸乙酯和100ml甲醇进行洗脱得到3种洗脱液；F．上述3种洗脱液均用旋转蒸发仪进行减压蒸干，得到3种样品；G．细胞毒性检测，用常规实验方法检测3种样品对人宫颈癌HeLa细胞的影响。灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离方法用于浸提的有机溶剂为乙醇或氯仿。本专利技术的主要优点1 本技术可得到天然抗肿瘤成分，得率高达1．6％，该成分在很低浓度(0．08mg／ml)时具有明显的活性，应用价值极大。2 整个工艺过程简单，所用仪器均为实验室或药厂常用的普通仪器，成本低。实施例1．100g破壁孢子粉用1000ml无水乙醇分3次浸泡提取，每次3小时，得到浸提液；2．浸提液用普通离心机离心沉淀，转速3000转／分，收集上清液；上清液用旋转蒸发仪进行减压蒸干(50℃)后，得到油状物重约25g；3．油状物用硅胶柱层析进行分离。所用的柱层析填料为无机吸附剂-硅胶，160-200目，在105℃恒温加热1小时后备用；层析柱为普通的玻璃柱，内径2．0cm，柱高20cm，使得直径∶柱高=1∶10。具体操作是1)装柱 硅胶用石油醚溶胀后直接装柱，尽量避免气泡的产生；2)上样 油状物用正己烷溶解后上样，每次上样约5．0g，相当于20．0g孢子粉；3)洗脱 依次用200ml氯仿、200ml乙酸乙酯和100ml甲醇进行洗脱，得到3种洗脱液；各洗脱液分别用旋转蒸发仪进行减压蒸干，氯仿洗脱液减压蒸干后重约3．0g，得率为72％(即A101样品)；乙酸乙酯洗脱部分重约1．2g，得率为24％(即A102样品)；甲醇洗脱洗脱液减压蒸干后重约0．08g，得率为1．6％(即A103样品)。然后用乙醇溶解后可直接用于细胞毒性检测。4．细胞毒性检测 按常规方法检测各部分样品对人宫颈癌HeLa细胞的毒性，以此为依据确定它们的抗肿瘤活性大小。结果表明，A101样品不具有细胞毒性；A102样品在浓度为2．5mg／ml时有明显的细胞毒性；A103样品在浓度为0．08mg／ml时有明显的细胞毒性。权利要求1．一种灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术，其特征在于A．所用原料为灵芝孢子粉；B．有机溶剂浸提，投料比即孢子粉重量g数与溶剂体积ml数之比为1∶5～1∶15，浸提3次，每次2-5小时，得浸提液；C．浸提液用普通离心机离心沉淀，转速2000～4000转／分，收集上清液；D．上清液用旋转蒸发仪减压蒸干得到油状物，温度维持在45～55℃并回收乙醇；E．油状物用硅胶柱层析进行分离，所用的柱层析填料为无机吸附剂-硅胶，160-200目，在105-110℃恒温加热0．5-1小时后备用；层析柱为普通的玻璃柱，内径2．0cm，柱高20cm，使得直径∶柱高=1∶10，具体操作是1) 装柱 硅胶用石油醚溶胀后直接装柱，尽量避免气泡的产生；2) 上样 油状物用正己烷溶解后上样，每次上样约5．0g，相当于20．0g孢子粉；3) 洗脱 依次用200ml氯仿、200ml乙酸乙酯和100ml甲醇进行洗脱得到3种洗脱液；F．上述3种洗脱液均用旋转蒸发仪进行减压蒸干，得到3种样品；G．细胞毒性检测，用常规实验方法检测3种样品对人宫颈癌HeLa细胞的影响。2．如权利要求1所述的灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离方法，其特征在于用于浸提的有机溶剂为乙醇或氯仿。全文摘要本专利技术是一种灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术。灵芝孢子粉用有机溶剂浸泡,浸提液用离心方法得以分离并经旋转蒸发仪于50℃减压浓缩得油状物,后者经普通的硅胶柱层析进行分离,用氯仿、乙酸乙酯和甲醇依次洗脱,分别蒸干后得一系列的膏状物,用人宫颈癌HeLa细胞检测其毒性。本技术可得到天然抗肿瘤成分,得率高,该成分在很低浓度(0.08mg/ml)时具有明显的活性,应用价值极大。整个工艺过程简单,成本低。文档编号A61P35/00GK1282611SQ99111169公开日2001年2月7日 申请日期1999年7月29日 优先权日1999年7月29日专利技术者杨新林, 赵东旭, 朱鹤孙, 徐建兰 申请人:北京理工大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝孢子中抗肿瘤成分的分离技术，其特征在于：Ａ．所用原料为灵芝孢子粉；Ｂ．有机溶剂浸提，投料比即孢子粉重量ｇ数与溶剂体积ｍｌ数之比为１∶５～１∶１５，浸提３次，每次２－５小时，得浸提液；Ｃ．浸提液用普通离心机离心沉淀，转速２ ０００～４０００转／分，收集上清液；Ｄ．上清液用旋转蒸发仪减压蒸干得到油状物，温度维持在４５～５５℃并回收乙醇；Ｅ．油状物用硅胶柱层析进行分离，所用的柱层析填料为无机吸附剂－－硅胶，１６０－２００目，在１０５－１１０℃恒温加热０．５ －１小时后备用；层析柱为普通的玻璃柱，内径２．０ｃｍ，柱高２０ｃｍ，使得直径∶柱高＝１∶１０，具体操作是：１）装柱 硅胶用石油醚溶胀后直接装柱，尽量避免气泡的产生；２）上样 油状物用正己烷溶解后上样，每次上样约５．０ｇ，相当于２０． ０ｇ孢子粉；３）洗脱 依次用２００ｍｌ氯仿、２００ｍｌ乙酸乙酯和１００ｍｌ甲醇进行洗脱得到３种洗脱液；Ｆ．上述３种洗脱液均用旋转蒸发仪进行减压蒸干，得到３种样品；Ｇ．细胞毒性检测，用常规实验方法检测３种样品对人宫颈癌ＨｅＬａ细胞 的影响。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨新林，赵东旭，朱鹤孙，徐建兰，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]