本发明专利技术公开了一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌及其应用，属于微生物学、生物化学和发酵工程技术领域。本发明专利技术产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌为保藏编号为CCTCC NO：M2015481的东湖假单胞菌（Pseudomonas donghuensis）HT，该菌株能够合成并分泌7-羟基环庚三烯酚酮，可用于生产7-羟基环庚三烯酚酮。以东湖假单胞菌HT为出发菌，在液体低铁培养基培养即可得到7-羟基环庚三烯酚酮，7-羟基环庚三烯酚酮主要存在于发酵液上清中。东湖假单胞菌HT在MKB液体培养基培养，所得发酵液上清中7-羟基环庚三烯酚酮的量约为80mg/L。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物学、生物化学和发酵工程
，具体涉及一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌及其应用。
技术介绍
假单胞菌是一类好氧（一些假单胞菌亦可利用硝酸盐与其他氮氧化合物进行无氧呼吸）、直或微弯的革兰氏阴性杆菌，并伴有极生鞭毛，不能形成芽孢。铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）由于逐渐对常见抗生素产生抗性，因此成为院内感染的主要病原菌。有一些假单胞菌可以增加重要食品农作物的收成。恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）可用来降解有毒垃圾（如芳香族与氯化化合物）。绿针假单胞菌（Pseudomonaschlororaphis）会侵蚀有用与废弃的塑料，尤其是聚氨酯，该菌亦可用做摧毁飞机上的对抗雷达探测保护涂层的战剂。恶臭假单胞菌中的酶系可用于立体定向有机合成。7-羟基环庚三烯酚酮类化合物是属于环庚三烯酮型化合物的一类天然产物，在很多个方面表现出多元的生物活性。由于在酮基的邻位多了一个羟基，使得7-羟基环庚三烯酚酮相对于环庚三烯酚酮表现出更强的抑制活性。一些研究显示7-羟基环庚三烯酚酮及其衍生物β-苧侧柏酚（β-thujaplicinol）、3,7-二羟基环庚三烯酚酮、软毛青霉酸（puberulicacid）、软毛青霉酮酸（puberulonicacid）可作为多种疾病的潜在治疗药物。7-羟基环庚三烯酚酮对于革兰氏阳性细菌表现出较强的抑制活性，如金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）与藤黄微球菌（Micrococcusluteus）的MIC值为90μM。7-羟基环庚三烯酚酮对于B16黑色素瘤细胞的IC50值为2.2μM。7-羟基环庚三烯酚酮具有抗疟疾活性，对于对具有氯喹抗性的恶性疟原虫（Plasmodiumfalciparum）K1菌株的IC50值为6.4μM。α-羟基环庚三烯酚酮类化合物对于双原子金属酶有抑制活性，7-羟基环庚三烯酚酮对于双原子金属酶肌醇单磷酸酶（IMPase）、碱性磷酸酶（APase）、多巴胺β-氧化酶（DBM）的IC50值分别为8、60、3μM。7-羟基环庚三烯酚酮还可以抑制细菌内氨基糖苷2”-O-腺嘌呤转移酶，可作为氨基糖苷类抗生素的增强性共药物。7-羟基环庚三烯酚酮具有极大药用潜力，目前主要来源是化学合成。美国科学家Allen首次在寝屋川链霉菌（Streptomycesneyagawaensis）的发酵液中分离得到7-羟基环庚三烯酚酮（N.E.Allen,W.E.Alborn,JR.,J.N.Hobbs,Jr.1982.7-Hydroxytropolone:anInhibitorofAminoglycoside-2\-O-Adenylyltransferase.AntimicrobialAgentsandChemotherapy.22:824-831）。1981年德国科学家H.Korth等人发现了一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌，该假单胞菌利用葡萄糖和葡萄糖酸作为碳源，铵盐和硝酸盐作为氮源，不能利用阿拉伯糖、肌醇、甘露醇、木糖、蔗糖、淀粉、麦芽糖、纤维二糖（H.Korth,G.Pulverer.1981.7-HydroxytropolonausPseudomonassp.[1].Z.Naturforsch.36c:728-729.）。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌。本专利技术目的还在于提供所述假单胞菌的应用以及利用该假单胞菌发酵生产7-羟基环庚三烯酚酮的方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌为东湖假单胞菌（Pseudomonasdonghuensis）HT，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心（保藏日期：2015年8月6日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学），其分类命名为PseudomonasdonghuensisHT，保藏编号为CCTCCNO：M2015481。东湖假单胞菌HT能够合成并分泌7-羟基环庚三烯酚酮，可用于生产7-羟基环庚三烯酚酮。利用东湖假单胞菌HT发酵生产7-羟基环庚三烯酚酮的方法，包括如下步骤：以东湖假单胞菌HT为出发菌株，在液体低铁培养基中培养得到7-羟基环庚三烯酚酮。7-羟基环庚三烯酚酮主要存在于发酵液上清中。所述的液体低铁培养基中铁离子与亚铁离子总含量不高于1μM。所述的液体低铁培养基的pH优选为7-7.2。所述的培养的条件优选为：培养温度28-30℃，培养时间8-12h。本专利技术的东湖假单胞菌HT在可以在限铁培养基中分泌7-羟基环庚三烯酚酮。东湖假单胞菌HT能够利用阿拉伯糖与蔗糖，与H.Korth等人发现的假单胞菌有明显差异。东湖假单胞菌HT发酵液上清的产量约为80mg/L。本专利技术具有如下有益效果：利用东湖假单胞菌HT可以通过发酵生产7-羟基环庚三烯酚酮，避免了化学合成方法中易燃、易爆、有害试剂等问题，对人类健康和公共环境不会造成任何危害，对实验条件要求较低。东湖假单胞菌HT可永久保存，为今后的机理研究和更进一步的产业应用打下基础。附图说明图1是提纯的7-羟基环庚三烯酚酮的紫外可见光光谱图。图2是提纯的7-羟基环庚三烯酚酮的高效液相色谱图，A：检测波长为258nm，B：检测波长为330nm，C：检测波长为375nm。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术做进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌东湖假单胞菌HT东湖假单胞菌HT于2015年8月6日保藏于中国典型培养物保藏中心（保藏地址：中国.武汉.武汉大学），其分类命名为PseudomonasdonghuensisHT，保藏编号为CCTCCNO：M2015481。东湖假单胞菌HT能够合成并分泌7-羟基环庚三烯酚酮。对东湖假单胞菌HT的生理生化反应检测结果表明东湖假单胞菌HT能利用的碳源包括N-乙酰-D-半乳糖胺、N-乙酰-D-葡糖胺、琥珀酰胺酸、溴琥珀酸、葡萄糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、阿东糖、吐温80、葵二酸、乳酸。与H.Korth等人发现的假单胞菌有明显差异。实施例27-羟基环庚三烯酚酮的提纯与鉴定（1）7-羟基环庚三烯酚酮的提取与纯化培养东湖假单胞菌HT与提纯7-羟基环庚三烯酚酮的培养基为MKB液体培养基。每升MKB液体培养基中含有成分：15mL甘油，3.28g三水磷酸氢二钾，5g酸水解酪蛋白，2.5g七水硫酸镁，pH7-7.2；MKB液体培养基中铁离子与亚铁离子总含量不高于1μM。1）将东湖假单胞菌HT接种在含有5mL液体MKB培养基的试管中，30℃摇床震荡培养过夜活化。2）将培养过夜后的菌液按1%（V/V）的接种量转接于含有50mL液体MKB培养基的250mL三角摇瓶中，30℃摇床震荡培养12h。3）将培养12h后的菌液用大型冷冻离心机室温10000rpm离心30min，收集上清。通过0.22μmmillipore微孔过滤器过滤上清去除剩余菌体与不溶物。4）将过滤后的上清用上清体积的1/2的乙酸乙酯萃取两次，用以去除疏水性的杂质，保留下层的水相。将水相的pH用浓盐酸调至pH=2，将pH调至2的水相再次用水相体积的1/2的乙酸乙酯萃取两次，此时7-羟基环庚三烯酚酮进入到乙酸乙酯中，保留上层有机相。将有机相中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株产7‑羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌，其特征在于：所述的假单胞菌为保藏编号为CCTCC NO：M 2015481的东湖假单胞菌HT。
【技术特征摘要】
1.一株产7-羟基环庚三烯酚酮的假单胞菌，其特征在于：所述的假单胞菌为保藏编号为CCTCCNO：M2015481的东湖假单胞菌HT。2.权利要求1所述的假单胞菌在生产7-羟基环庚三烯酚酮中的应用。3.利用权利要求1所述的假单胞菌生产7-羟基环庚三烯酚酮的方法，其特征在于：包括如下步骤：以权利要求1所述的假...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢志雄，姜桢，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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