一种可吸收胶原止血粉及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种可吸收胶原止血粉及其制备方法。该止血粉由胶原蛋白颗粒组成，颗粒粒径范围为0.1~10mm；组成该止血粉的颗粒，为多孔状，具有极佳的亲水性，吸收血液或渗出液后，可以贴附在创口表面，其中胶原不会被水或酸溶解，也不会产生溶胀反应。本发明专利技术还提供了一种可吸收胶原基复合止血粉，以高纯胶原蛋白为基础，通过壳聚糖、透明质酸钠等辅料的添加，制备出复合止血粉。本发明专利技术还提供了这种可吸收胶原止血粉和胶原基复合止血粉的制备方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医用材料和医疗器械领域，涉及一种可吸收胶原止血粉及其制备方法。
技术介绍
止血材料，按其组成的主要材质可分为：胶原类止血剂、壳聚糖类止血剂、淀粉类止血材料、氧化纤维素和氧化再生纤维素类止血材料、矿物质敷料等（胶原在止血材料中的应用，宋强等，Vol.35No.04，Feb.2013）。在外科手术患者和接受抗凝药物治疗的患者中，例如，出血会身体组织、器官或骨骼带来一些问题，最终造成生命的威胁，无法控制的出血会导致休克和死亡。临床上，常使用凝血酶或纤维蛋白原来进行止血，但是，为保持这些蛋白质制剂的生物止血活性，往往需要低温等特殊储存环境，这也极大地限制了蛋白制剂止血剂的使用。临床使用中，止血材料的外形也对其应用造成很大的影响，止血材料需要能够贴附在复杂器官的表面，这就促使了止血粉的产生。胶原蛋白作为止血材料，可以与血小板结合，促进血小板集聚，也可以直接激活内源性凝血途径，产生凝血作用，也有利于血细胞粘附形成血栓凝块，有效地阻止血液冲开伤口。此外，胶原可促进肉芽组织生成，加速创面愈合。目前的大量研究资料表明，胶原材料的止血活性明显优于其他多糖类止血材料，而且还能促进组织再生和修复。目前国内，对胶原止血粉或胶原基止血粉的研究还鲜有报道。武继民开发了一种粉剂止血药物（授权公告号CN1186096C），是以胶原纤维为原料，使用醛类物质交联固定，然后加入过量干燥剂、醇和盐酸，经甘油水溶液清洗后，真空干燥，用粉碎机研磨后制成粉剂。该止血剂止血迅速，还能促进伤口愈合和修复。但年华等开发了胶原基复合止血粉剂（公布号CN103721247A）是将三七素和I胶原进行改性，复合壳聚糖后冻干成海绵，然后使用改性剂交联改性后，冷冻干燥再粉碎后，得到胶原基复合止血粉。使用醛类交联剂，有很好的交联效果，可以大大延长胶原材料的降解时间，提高材料的力学性能，但是由于醛类物质有一定的细胞毒性，一般的清洗方法又很难去除醛类物质的残留，即使微量的交联剂残留，也会造成很多不良问题的产生。胶原止血材料不仅有很好的止血性能，而且还有引导组织修复再生的作用，是目前研究发现的最好的可吸收止血材料之一，但现有工艺制作的胶原止血材料，主要存在以下缺点：1.材料交联时使用化学交联剂，不仅过程复杂，还会造成交联剂残留，形成细胞毒性；2.胶原提取过程单一，纯度不够，脂肪残留容易造成不良反应等。
技术实现思路
本专利技术提供了一种简单易行的胶原止血粉和胶原基止血粉的制备方法，该方法通过酶切工艺去除了胶原蛋白的端肽结构，彻底去除了胶原蛋白的免疫原性，同时制作过程不使用化学交联剂，这样极大地提高了材料使用的安全性。本专利技术针对现有产品的缺陷，目的在于提供一种可吸收胶原止血粉及其制备方法，该可吸收胶原止血粉具有极佳的亲水性，吸收血液或渗出液后，可以贴附在创口表面，其中胶原不会被水或酸溶解，也不会产生溶胀反应；该止血粉不含有凝血酶，但是比含有凝血酶的明胶海绵有更好的止血活性。同时，本专利技术也提供了一种可吸收胶原基复合止血粉的制备方法，使得胶原止血粉复合壳聚糖、透明质酸钠、凝血酶或氯化钙中的一种或多种，增强止血或防黏连效果。由本专利技术制备的可吸收胶原止血粉和可吸收胶原基复合止血粉可以在装载在止血粉容器中，一并提供，在手术内窥镜引导下，用于微创手术的止血；也可用于皮肤烧伤，压疮等难愈合创面的止血和修复再生。一种可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1:取哺乳动物跟腱或者皮肤去除毛发，加入脱脂酶、丙酮、乙醇、正丁醇、甲氯中的一种，脱去油脂，冷冻切片；S2:然后在pH值为1.0~4.5的酸溶液中，加入蛋白酶，在0~25℃温度下酶解1~96小时；S3:酶解后，使用离心机离心酶解液取上清液，使用碱溶液调节pH值为5~8，再使用盐溶液盐析出胶原蛋白；S4:将盐析出的胶原蛋白装入透析袋中，将透析袋端口密封，在pH1~6的醋酸溶液中进行梯度透析，至透析外液使用硝酸银滴定无沉淀；S5:将透析完成的胶原蛋白凝胶，配置成含胶原蛋白0.5~1.5%wt溶液；S6:使用喷雾干燥机进行喷雾干燥，然后再使用4~100目的筛网进行筛分，制得胶原止血粉；S7:将止血粉进行紫外灯照射交联或高温真空法交联固定，再进行无菌包装，使用辐照或干热灭菌方法灭菌后使用。其中，步骤S1中，所述的哺乳动物为牛、羊、猪中的一种；步骤S2中，所述的酸溶液为盐酸、醋酸、柠檬酸、硫酸、磷酸中的一种或多种；所述的蛋白酶，为胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和无花果蛋白酶中的一种或多种；步骤S3中，所述的碱溶液，为NaOH、KOH中的一种或者两种混合，所述的盐溶液为硫酸钾、氯化钾、硝酸钾、硫酸钠、氯化钠、硫酸钠中的一种或两种混合。其中，步骤S6中，，喷雾参数喷雾干燥参数为：温度100~130℃；步骤S7中紫外灯照射交联参数为：254nm紫外光，照射2~24h；高温真空交联参数为：温度100~150℃，真空度≤0.08MPa，时间2~48h。。其中，步骤S6和步骤S7中，还可以采用如下方法：将步骤S5所配置的溶液，使用冷冻干燥机进行冷冻干燥制成海绵，再将海绵进行紫外灯照射交联或高温真空法交联固定，然后使用粉碎机粉碎，筛分后无菌包装。上述改变的可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于，紫外灯照射交联参数为：254nm紫外光，照射2~24h；高温真空交联参数为：温度100~150℃，真空度≤0.08MPa，时间2~48h。。一种可吸收胶原止血粉，由上述的方法制备而得，其特征在于，该止血粉由胶原蛋白颗粒组成，颗粒粒径范围为0.1~10mm；组成该止血粉的颗粒，为多孔状，颗粒的微观孔径范围为50~500μm；该止血粉的容积密度范围为0.01-0.06g/cm3；该止血粉具有极佳的亲水性，吸收血液或渗出液后，可以贴附在创口表面，其中胶原不会被水或酸溶解，也不会产生溶胀反应；该止血粉不含有凝血酶，但是比含有凝血酶的明胶海绵有更好的止血活性。一种可吸收胶原止血粉，由上述的方法制备而得，其特征在于，该止血粉的性能符合表1的要求：表1可吸收胶原止血粉性能要求及测试方法性能指标性能要求测试方法胶原蛋白纯度≥95%（m/m）按照YY/T0606.6I型胶原蛋白标准要求测定羟脯氨酸含量应不小于总蛋白含量的9%（m/m）按照YY/T0606.6I型胶原蛋白标准要求测定脂含量脂含量≤1%(m/m)按本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1：取哺乳动物跟腱或者皮肤去除毛发，加入脱脂酶、丙酮、乙醇、正丁醇、甲氯中的一种，脱去油脂，冷冻切片；S2：然后在pH值为1.0~4.5的酸溶液中，加入蛋白酶，在0~25℃温度下酶解1~96小时；酶解后，使用离心机离心酶解液取上清液，使用碱溶液调节pH值为5~8，再使用盐溶液盐析出胶原蛋白；S3：将盐析出的胶原蛋白装入透析袋中，将透析袋端口密封，在pH1~6的醋酸溶液中进行梯度透析，至透析外液使用硝酸银滴定无沉淀；S4：将透析完成的胶原蛋白凝胶，配置成含胶原蛋白0.5~1.5%wt溶液；S5：使用喷雾干燥机进行喷雾干燥，然后再使用4~100目的筛网进行筛分，制得胶原止血粉；S6：将止血粉进行紫外灯照射交联或高温真空法交联固定，再进行无菌包装，使用辐照或干热灭菌方法灭菌后使用。

【技术特征摘要】
1.一种可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
S1：取哺乳动物跟腱或者皮肤去除毛发，加入脱脂酶、丙酮、乙醇、正丁醇、甲氯中的一
种，脱去油脂，冷冻切片；
S2：然后在pH值为1.0~4.5的酸溶液中，加入蛋白酶，在0~25℃温度下酶解1~96小时；
酶解后，使用离心机离心酶解液取上清液，使用碱溶液调节pH值为5~8，再使用盐溶液
盐析出胶原蛋白；
S3：将盐析出的胶原蛋白装入透析袋中，将透析袋端口密封，在pH1~6的醋酸溶液中进
行梯度透析，至透析外液使用硝酸银滴定无沉淀；
S4：将透析完成的胶原蛋白凝胶，配置成含胶原蛋白0.5~1.5%wt溶液；
S5：使用喷雾干燥机进行喷雾干燥，然后再使用4~100目的筛网进行筛分，制得胶原止
血粉；
S6：将止血粉进行紫外灯照射交联或高温真空法交联固定，再进行无菌包装，使用辐照
或干热灭菌方法灭菌后使用。
2.如权利要求1所述的可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述的
哺乳动物为牛、羊、猪中的一种；步骤S2中，所述的酸溶液为盐酸、醋酸、柠檬酸、硫酸、磷酸
中的一种或多种；所述的蛋白酶，为胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆
菌蛋白酶和无花果蛋白酶中的一种或多种；步骤S3中，所述的碱溶液，为NaOH、KOH中的一种
或者两种混合，所述的盐溶液为硫酸钾、氯化钾、硝酸钾、硫酸钠、氯化钠、硫酸钠中的一种
或两种混合。
3.如权利要求1所述的可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于，步骤S6中，喷雾参
数喷雾干燥参数为：温度100~130℃；步骤S7中紫外灯照射交联参数为：254nm紫外光，照射2
~24h；高温真空交联参数为：温度100~150℃，真空度≤0.08MPa，时间2~48h。
4.如权利要求1所述的可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于，步骤S6和步骤S7
中，还可以采用如下方法：将步骤S5所配置的溶液，使用冷冻干燥机进行冷冻干燥制成海
绵，再将海绵进行紫外灯照射交联或高温真空法交联固定，然后使用粉碎机粉碎，筛分后无
菌包装。
5.如权利要求4中所述的可吸收胶原止血粉的制备方法，其特征在于，紫外灯照射交联
参数为：254nm紫外光，照射2~24h；高温真空交联参数为：温度100~150℃，真空度≤
0.08MPa，时间2~48h...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨冰，张自强，杨祥宇，
申请(专利权)人：北京湃生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11