一种红花籽中苯丙烯酰５－羟色胺化合物的富集纯化方法，属于红花籽的综合开发利用技术领域。本发明专利技术以含有Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺的红花籽粕乙醇提取物为原料，采用静态吸附与解吸方法选取合适的阴离子交换树脂，在此基础上，采用Ｄ８１８树脂柱层析法富集纯化Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺，浸膏中其含量分别从粗提物中的３．８２％、２．５８％提高到２３．６％、１９．４％，分别是粗提物中的６．２和７．５倍。本发明专利技术采用Ｄ８１８离子交换层析富集纯化红花籽粕中Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺，方法简便合理，易于工业化，为Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺的进一步纯化奠定了基础，有利于红花籽的综合利用。
【技术实现步骤摘要】
一种红花籽中活性物质苯丙烯酰5-羟色胺化合物的富集纯化方法，属于红 花籽的综合开发利用
技术背景苯丙烯酰5-羟色胺化合物(Phenylpropanoid Amides of 5-Hydroxytryptamine analogues)是一组由5-羟色胺的氨基与苯丙烯酸类发生酰胺化反应的产物，从 属于羟基肉桂酸酰胺类(Hydroxycinnamic acid amide, HCAA)化合物。红花籽 中含有0.5%左右的苯丙烯酰5-羟色胺化合物，目前己发现了7-8种，含量最多 的是iV-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆酰)5-羟色胺，他们具有较强清除自由基和抗 脂质过氧化作用、抗肿瘤活性、抗炎抑菌作用、抑制黑色素的生成等功能活性， 可用于食品、药品、化妆品、工程树脂等领域。关于从红花籽粕中分离纯化苯 丙烯酰5-羟色胺化合物，日本、韩国有了一定的研究，多采用多步硅胶、凝胶 柱层析和高效液相制备色谱进行纯化，但成本昂贵，仅适合于实验室样品的少 量制备；国内这方面的研究较少，仅有采用XDA-1树脂柱纯化富集iV-阿魏酰 5-羟色胺和AKp-香豆酰)5-羟色胺的报道。红花籽粕中W-阿魏酰5-羟色胺和AKp-香豆酰)5-羟色胺的结构式如下。1:R=0CH.2:R=H1、 iV-阿魏酰5-羟色胺2、 iV- (p-香豆酰)5-羟色胺
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种红花籽中W-阿魏酰5-羟色胺和iV-(p-香豆酰)5-羟 色胺的富集纯化方法，采用D818弱碱性阴离子交换柱层析分离纯化红花籽中 W-阿魏酰5-羟色胺和AK^-香豆酰)5-羟色胺属于开创性研究。本专利技术的技术方案 一种红花籽中苯丙烯酰5-羟色胺化合物的富集纯化方 法，以含有7V-阿魏酰5-羟色胺和iV-(p-香豆酰)5-羟色胺的红花籽粕乙醇提取物为 原料，采用D818弱碱性大孔阴离子交换树脂柱层析，上样液的pH值为8-9，3上样流速为1.5mL/min，上样液中的7V-阿魏酰5-羟色胺浓度为30-50 (ig/mL和 AKp-香豆酰)5-羟色胺的浓度为25-4(Hig/mL，通过树脂柱吸附后，用pH8-9、 1.5 倍柱体积的碱液淋洗树脂柱后，再用调节pH3.2、 3倍柱体积的80%乙醇进行洗 脱，流速为lmL/min，收集乙醇洗脱流出液，再进行减压蒸发除去乙醇，留下 的浸膏中iV-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆酰)5-羟色胺得以纯化富集。采用静态吸附与解吸方法，选取合适的阴离子交换树脂，在此基础上，采 用柱层析法，分离纯化富集7V-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆酰)5-羟色胺。一、 弱碱性阴离子交换树脂的选取大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂为多胺基弱碱性离子交换树脂，具有 交换容量大，体积变化小，机械强度高，化学稳定性好，抗污染，抗氧化性能 优越，交换速度快等特点。对D818和D815两种大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交 换树脂进行静态吸附试验，结果表明D818对7V-阿魏酰5-羟色胺和7V-(^-香豆 酰)5-羟色胺有较高的吸附率和解吸率。因而选择D818大孔弱碱性丙烯酸系阴离 子交换树脂作为填料，利用柱层析法纯化富集7V-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆 酰)5-羟色胺。二、 pH对吸附效果的影响7V-阿魏酰5-羟色胺和AKp-香豆酰)5-羟色胺的结构中具有酚羟基，虽从结构 上看属于生物碱，但实际上呈弱酸性，在碱性条件下，7V-阿魏酰5-羟色胺和7V-(/7-香豆酰)5-羟色胺主要以负离子形式存在，在阴离子交换树脂上被吸附。在进行 阴离子交换树脂吸附时，分别用稀酸、稀碱将原料液的pH值分别调至6.2、 6.9、 8.0、 8.6禾n 9.1，过滤后将滤液加入到D818树脂中，进行静态吸附实验。结果 显示在上样液pH值为8-9时，树脂对iV-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆酰)5-羟色 胺的吸附量较大，因此选择pH值为8-9。三、 上样液浓度对吸附效果的影响对于离子交换柱采用低浓度范围内进行实验。将浸提液中的iV-阿魏酰5-羟 色胺和A4p-香豆酰)5-羟色胺配制成不同浓度的上样液，pH值均为9.1，进行 D818树脂层析柱的动态吸附实验。上样液中iV-阿魏酰5-羟色胺的浓度分别为 25、 30、 35、 40、 50、 60pg/mL，对应的AKP-香豆酰)5-羟色胺的浓度分别为20、 25、 29、 33、 40、 49pg/mL。结果表明，低浓度范围内树脂吸附率相差不大，但 是上样液浓度增大，出现层析柱泄漏早，样品的处理量小的情况；上样液浓度 太小会延长上样时间，降低工作效率。综合上述因素，选取7V-阿魏酰5-羟色胺 (FS)和AKp-香豆酰)5-羟色胺(CS)的浓度分别以30-50 (ig/mL、 25-40(ig/mL 为宜。四、 上样液流速对吸附效果的影响吸附流速影响到溶质向树脂表面的扩散，从而决定了吸附效果。为了进行有效的交换，离子交换过程中必须使固液两相有充分的接触时间，如果流速太 快，溶质分子来不及扩散到树脂内表面，就会发生泄漏，造成样品的流失；但 上柱流速过慢，导致操作时间成本增加。取iV-阿魏酰5-羟色胺和7V-(p-香豆酰)5-羟色胺浓度分别为38.64和32.2(^g/mL 的上样液，分别取流速为0.6、 1.0、 1.5、 2.5和4.0mL/min通过柱体积为30mL的 D818树脂柱，收集流出液。结果表明在流速0.6-1.5mL/min之间泄漏率变化不大， 且流速越小泄漏率也小，流速在2.5mL/min以上后导致穿透点提前，会使树脂的 穿透交换容量降低，从而降低离子交换柱的柱效率。此时由于随流速增加，液 膜阻力降低，AT-阿魏酰5-羟色胺和iV-(p-香豆酰)5-羟色胺未能充分进行膜扩散和 内扩散实现交换就流出树脂床层。考虑到吸附时间和泄漏率，最终选取吸附流 速为1.5ml/min。五、洗脱流速的选择阴离子交换树脂在碱性条件下吸附后一般用酸液或者酸性醇溶液进行洗 脱，本实验选用乙醇酸液作为洗脱剂。取AT-阿魏酰5-羟色胺和iy-(p-香豆酰)5-羟色胺浓度分别为38.64和32.20|ig/mL的上样液，以1.5mL/min的流速通过柱 体积为30mL的D818树脂柱吸附后，先用pH8-9碱液淋洗1.5BV后，再用3BV 的pH3.2的80%乙醇解吸，分别调节解吸流速为0.6、 1.0、 1.5、 2.0和3.0mL/min， 测定洗脱液中7V-阿魏酰5-羟色胺和AKp-香豆酰)5-羟色胺的含量，计算解吸率。结果表明，在洗脱流速大于2mL/min时，解吸率下降。这是由于流速太快， 接触时间短，未能充分解吸，这样会增加洗脱剂用量，从而增加了操作成本； 流速太慢，虽然解吸效果好，但操作周期加长，增加了操作时间成本。所以最 终选择洗脱速率为1 .OmL/min。本专利技术的有益效果采用静态吸附与解吸方法，选取合适的阴离子交换树 脂，在此基础上，采用柱层析法，分离纯化富集V-阿魏酰5-羟色胺和iV-(p-香豆 酰)5-羟色胺。本专利技术采用阴离子交换树脂柱层析法纯化富集iV-阿魏酰5-羟色胺 和7V-(p-香豆酰)5-羟色胺，属于开创性研究。采用D818树脂柱层析法纯化富集AT-阿魏酰5-羟色胺和iV-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红花籽中苯丙烯酰５－羟色胺化合物的富集纯化方法，其特征是以含有Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺的红花籽粕乙醇提取物为原料，采用Ｄ８１８弱碱性大孔阴离子交换树脂柱层析，上样液的ｐＨ值为８－９，上样流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，上样液中的Ｎ－阿魏酰５－羟色胺浓度为３０－５０μｇ／ｍＬ和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺的浓度为２５－４０μｇ／ｍＬ，通过树脂柱吸附后，用ｐＨ８－９、１．５倍柱体积的碱液淋洗树脂柱后，再用调节ｐＨ３．２、３倍柱体积的８０％乙醇进行洗脱，流速为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集乙醇洗脱流出液，再进行减压蒸发除去乙醇，留下的浸膏中Ｎ－阿魏酰５－羟色胺和Ｎ－（ｐ－香豆酰）５－羟色胺得以纯化富集。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金青哲，易晓霆，单良，刘元法，王兴国，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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