生物菌剂及制备方法技术

一种生物菌剂及制备方法属于农业应用微生物技术领域，其特点是：利用国家菌库提供的八株菌种经斜面菌种培养、三角瓶发酵、一、二、三、四级种子罐混合发酵、混载体而制成本发明专利技术，其优点是：具有固氮，解磷、钾，分解纤维素、木质素，分解蛋白质及有害有机酸和酸素，抑制和杀灭病原菌，克服连作障碍等多种功能。可以起到促进增根、促早熟、防虫抗病、改善品质、改良土壤、提高产量、增加效益等综合作用。另外，施用有益的微生物菌群与土壤微生物协同作用，能够促进植物（农作物）生长，保证动物（主要是人类）生存、生活条件，维护自然界生态平衡（以物质交换、能量交换为基础），构成了农业战线上的绿色工程。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业应用微生物
，尤其涉及的是一种多株菌混合发酵制成的。现代农业依赖化肥，但化肥的利用率低于40％，更多的化肥经淋溶(损失约10％)、地面冲刷(损失约15％)、挥发(损失约20％)及反硝化脱氮(损失约15％)等进入土壤及周围环境，造成多种不良后果一是给人类带来许多严重的污染问题；二是农作物特别是瓜果、蔬菜等品质显著下降；三是土壤板结，无机养分不易分解，造成地力下降。后者又迫使农民年复一年的加大化肥用量，不仅费用加大，而且加重了上述弊端，形成了恶性循环。本专利技术的目的旨在提供一种防止土地板结，保护自然生态环境，促进农业大幅度增产，防止病虫害，为生产优质绿色食品创造条件的微生物肥料及制备方法。本专利技术的技术方案是制备方法中所使用的八株菌种均来自国家菌库，具体如下1、固 氮 菌 (AS.1.222 Azotobater)、2、巨大芽孢杆菌 (AS.1.151 Bacillus megaterium de Bary)、3、胶冻样芽孢杆菌(AS.1.153 Bacillus mucilaginosus)、4、枯草芽孢杆菌 (AS.1.108 Bacillus subtilis)、5、产黄纤维单胞菌(AS.1.102 Cellulomonas flaxigera)、6、荧光假单胞菌 (AS.1.867 Pseudomonas fluorescens)、7、恶臭假单胞菌 (AS.1.870 Pseudomonas putida)、8、苏云金芽孢杆菌松躅亚种(AS.1.294 Bacillus thuringiensis)。生产工艺路线首先，八株菌种分别经原始菌种→斜面菌种→三角瓶摇床深层发酵三步工艺制成所需要的扩大菌种，其中，各种斜面培养基配比如下(1)固氮菌斜面培养基配比KH2PO40.1—0.4克、K2HPO40.5—1.2克、MgSO4·7H2O 0.05—0.4克、CaSO4·2H2O 0.005—0.02克、FeCl3微量、Na2MoO4·2H2O微量、酵母膏0.2—0.8克、甘露醇15—25克、琼脂18—25克、葡萄糖2％、PH7.2的蒸馏水1升，灭菌121℃/30min，培养温度30℃。(2)巨大芽孢杆菌斜面培养基配比蛋白胨4—6克、牛肉膏2—4克、NaCl4—6克、琼脂18—25克、PH7.0—7.1的水1升，灭菌121℃/30min。(3)胶冻样芽孢杆菌斜面培养基配比同上。(4)枯草芽孢杆菌斜面培养基配比同上。(5)产黄纤维单胞菌斜面培养基配比NaCl4—8克、MgSO4·7H2O 0.05—0.2克、KH2PO40.4—0.6克、CaCl20.05—0.2克、K2HPO41—3克、(NH4)2SO41—4克、酵母膏0.5—2克、滤纸条1片、PH7.0—7.5的蒸馏水1升、灭菌121℃/30min。(6)荧光假单胞菌斜面培养基配比同(2)。(7)恶臭假单胞菌斜面培养基配比同上。(8)苏云金芽孢杆菌松躅亚种斜面培养基配比同上。各种生产菌的三角瓶摇床发酵培养基配比同斜面培养基配比减去琼脂即可。第三步三角瓶摇床深层发酵的温度为30℃，时间是48小时。然后，把经过深层发酵的八株菌种混合再经过一级种子罐发酵→二级种子罐发酵→三级种子罐发酵→四级种子罐发酵四步工艺，最后第四级发酵罐放罐标准含菌数为20—150×108个/ml。其中四步发酵工艺的参数如下(1)发酵温度30℃±1℃；(2)PH7.0—7.2；(3)无菌空气通入量 M3/min；(4)发酵时间连续48小时；(5)罐压控制0.3—0.5Kg/cm2左右；(6)接种量10％(含菌数10×108—15×108个/ml)。一级到四级发酵罐培养液的配比如下一级发酵罐培养液的配比是重过磷酸钙28—34克、氯化钾28—34克、尿素56—64克、用玉米糖浆调糖度至4°—5°(依糖度代调整)、自来水26—30千克、灭菌108℃/40min；以下各级发酵罐培养液逐步以10倍量放大，其培养参数相同。最后拌载体(矿粉)制成本专利技术的产品。本专利技术的积极效果是具有固氮，解磷、钾，分解纤维素、木质素，分解蛋白质及有害有机酸和酸素，抑制和杀灭病原菌，克服连作障碍等多种功能。可以起到促进增根、促早熟、防虫抗病、改善品质、改良土壤、提高产量、增加效益等综合作用。另外，施用有益的微生物菌群与土壤微生物协同作用，能够促进植物(农作物)生长，保证动物(主要是人类)生存、生活条件，维护自然界生态平衡(以物质交换、能量交换为基础)，构成了农业战线上的绿色工程。以下是本专利技术应用效果的实施例一、本专利技术的生物菌剂在玉米上应用效果的实施例(一)试验材料与方法1、供试土壤黑土，肥力中等，PH值近中性。2、试验处理处理1—常规施肥＋菌剂250克/亩作底肥一次性施入土壤；处理2—常规施肥＋菌剂500克/亩作底肥一次性施入土壤；处理3—常规施肥。3、试验设计试验采用小区试验，小区面积20平方米，三次重复，三次处理，随机区组排列。(二)试验结果与分析1、在玉米生长期，对不同处理的玉米生育情况进行调查研究中发现，采用本专利技术处理的玉米，改善了玉米的生长发育性状，与对照相比，株高增高7—12cm，叶色深绿，穗长增长2.1—3.5cm，每穗粒数增加20—35个，百粒重增加2.3—3.8克。(见表1)表1玉米生育性状调查表 2、试验中对玉米的生育时期进行了调查，调查结果发现，施用本专利技术的玉米，比对照早出苗2—3天，拔节、抽穗期提前2—3天，成熟期提前4—5天。(见表2)表2 玉米生育时间调查表 、施用本专利技术的生物菌剂对玉米产量的影响进行统计分析。(见表3)表3玉米产量调查表 Kg/小区 4、对建设乡玉米的增产调查结果进行差异显著性检验，以验证其可靠性。表4 资料的方差分析 二、本专利技术的生物菌剂在蔬菜上应用效果的实施例(一)试验材料与方法1、试验土壤草甸土，肥力中等，PH值7.5。2、试验作物黄瓜。3、试验处理处理1—常规施肥＋生物菌剂250克/亩作底肥一次性施入土壤；处理2—常规施肥＋生物菌剂500克/亩作底肥一次性施入土壤；处理3—常规施肥。4、试验设计本试验采取小区试验法，小区面积20平方米，三次重复，随机区组排列。(二)试验结果与分析1、通过观查与分析，施用本专利技术的生物菌剂的黄瓜叶色明显比对照浓绿，单果重增加，单株果数增加，增产效果显著。(见表5)表5黄瓜生育性状调查表 2、选取红旗乡的试验数据对施用本专利技术的生物菌剂的黄瓜产量性状影响进行统计分析，增产率达8.3％。(见表6)这四种含添加剂的柴油燃料被装入到四个250cm3的试管中。将这四个试管密封塞好，在-20℃下静置于一个冷室24小时。24小时后，用每支试管中所观察到的相数和它们的性质来评价含添加剂的柴油燃料的均匀性，然后测定上层和下层相的浊点温度。上层相的性质对添加剂组合物的抗沉降效果是关键的。当上层相是混浊的，则大部分蜡都保持悬浮状态，而当这一相是澄清的，所有的蜡实际上都已沉降下去，也就是说已经在试管底部结块。试管中不同相所占的体积百分比和上层相与下层相的浊点温差，这些定量结果列于下面的表Ⅲ表 可以发现，将一种抗沉降剂加入到已加入FLT的柴油燃料中时(样品1和2)，柴油燃料的均匀性得到了改进，这一点可从试管本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物菌剂及制备方法，其特征在于：制备方法中所使用的八株菌种是：（１）固氮菌（ＡＳ．１．２２２ Ａｚｏｔｏｂａｔｅｒ）、（２）巨大芽孢杆菌（ＡＳ．１．１５１ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ｄｅ Ｂａｒｙ）、（３）胶冻 样芽孢杆菌（ＡＳ．１．１５３ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓｕｓ）、（４）枯草芽孢杆菌（ＡＳ．１．１０８ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、（５）产黄纤维单胞菌（ＡＳ．１．１０２ Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ ｆｌａｘｉｇ ｅｒａ）、（６）荧光假单胞菌（ＡＳ．１．８６７ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、（７）恶臭假单胞菌（ＡＳ．１．８７０ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）、（８）苏云金芽孢杆菌松躅亚种（ＡＳ．１．２９４ Ｂａ ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王景迢，
申请(专利权)人：王景迢，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]