稳定同位素巯基化合物标记试剂及其合成方法和应用技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机小分子同位素标记
，具体涉及一种稳定同位素巯基化合物标记试剂及其合成方法和应用。
技术介绍
高效液相色谱-串联质谱技术(HPLC-MS/MS)由于其高灵敏度和高选择性而被广泛应用于生命分析、环境分析、食品分析等研究领域当中。采用HPLC-MS/MS的选择反应监测(SRM)或多级反应离子监测(MRM)模式可以选择性的监测样品中的指定分析物，可以有效地降低噪音影响，提高检测的灵敏度。然而，由于样品基质或者共洗脱物质引起的信号衰减或增强的基质效应的问题使HPLC-MS/MS的分析性能大打折扣，在JournalofChromatographyA,2010.1217(25):3929-3937中有详细介绍。近年来，同位素编码衍生技术受到了很大的关注，借助轻/重同位素编码衍生试剂，可获得具有相同官能团的一类分析物的同位素衍生物，以此作为内标物进行HPLC-MS/MS定量分析，可以有效地克服基质效应的影响。然而，迄今所有的化学标记方法都有一些缺陷，如标记反应速率慢、标记产物信号弱、标记准确性和灵敏性较差等等，并且很多标记试剂不易获得，因此限制了它们的广...
【技术保护点】
一种稳定同位素巯基化合物标记试剂，其特征在于：以吖啶酮为同位素基团，马来酰亚胺为反应基团，其化学名称为：[d0]/[d4]‑吖啶酮‑10‑乙基‑N‑马来酰亚胺，其化学结构式为：其中：当X＝H时，为[d0]‑吖啶酮‑10‑乙基‑N‑马来酰亚胺；当X＝D时，为[d4]‑吖啶酮‑10‑乙基‑N‑马来酰亚胺。
【技术特征摘要】
1.一种稳定同位素巯基化合物标记试剂，其特征在于：以吖啶酮为同位素基团，马来酰亚胺为反应基团，其化学名称为：[d0]/[d4]-吖啶酮-10-乙基-N-马来酰亚胺，其化学结构式为：其中：当X＝H时，为[d0]-吖啶酮-10-乙基-N-马来酰亚胺；当X＝D时，为[d4]-吖啶酮-10-乙基-N-马来酰亚胺。2.一种权利要求1所述的稳定同位素巯基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于包括以下步骤：(1)第一步缩合反应：将[d0]/[d5]-溴苯、邻氨基苯甲酸溶解到硝基苯中，加入铜粉和碳酸钾，回流反应3小时，反应完后用水蒸汽蒸馏除去溶剂，将反应液倒入水中，调pH值至5-6，回收固体并干燥，得到中间体Ⅰ[d0]/[d5]-2-苯氨基苯甲酸；(2)第二步缩合反应：将中间体Ⅰ溶解于质量百分数为98wt.％的浓硫酸中，于100℃下反应2小时，冷却后，倒入水中淬灭反应，回收固体并干燥，用乙腈和N,N-二甲基甲酰胺按照体积比v:v＝3:1重结晶制得中间体Ⅱ[d0]/[d4]-吖啶酮；(3)羟基化反应：将中间体Ⅱ和碳酸乙烯酯溶解到二甲基亚砜中，加入碳酸钾作为催化剂，在90℃反应3小时，冷却后倒入饱和盐水中回收固体并干燥，用乙腈重结晶制得中间体Ⅲ[d0]/[d4]-10-(2-羟乙基)-吖啶酮；(4)卤代反应：中间体Ⅲ溶解到二氯甲烷中，加入三乙胺，于常温下逐滴加入二氯亚砜，继续搅拌反应1小时，反应完后旋蒸除去溶剂，将残余物用乙腈复溶后倒入水中，回收固体并干燥，用乙腈重结晶制得中间体Ⅳ[d0]/[d4]-10-(乙基-2-氯)-吖啶酮；(5)盖布瑞尔合成反应：将中间体Ⅳ与邻苯二甲酰亚胺钾盐溶于二甲基亚砜中，加热至100℃反应3小时，之后将反应液倒入水中，过滤并干燥所得到的固体；将固体溶于无水乙醇中，加入质量百分数为80wt.％的水合肼，回流反应1.5小时，反应完成后向其中滴加浓盐酸至无固体产生，过滤掉固体并回收滤液，将滤液旋蒸浓缩，再倒入冰水中，调pH值至9-10，回收固体并干燥，得到中间体Ⅴ[d0]/[d4]-10-(乙基-2-氨)-吖啶酮；(6)酰化反应：将马来酸酐溶解到乙腈中，滴加溶有中间体Ⅴ的乙腈溶液，常温下反应1小时，反应完成后旋蒸除去溶剂；加入乙酸酐溶解残余物，再加入无水乙酸钠，于100℃下反应1小时，冷却后倒入水中，回收固体并干燥，用乙腈重结晶得目标产物[d0]/[d4]-吖啶酮-10-乙基-N-马来酰亚胺。3.根据权利要求2所述的稳定同位素巯基化合物标记试剂的合成方法，其特征在于：步骤(1)所述第一步缩合反应中，[d0]/[d5]-溴苯和邻氨基...
【专利技术属性】
技术研发人员：尤进茂，吕政贤，路帅敏，窦昆，孙志伟，李国梁，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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