蒙药漏芦花指纹图谱建立方法以及质量评价方法技术

本发明专利技术涉及一种蒙药漏芦花指纹图谱的建立方法，包括：1)供试品溶液的制备：取药材粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇，超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过；2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱85％B(0min)～78％B(12min)～74％B(13min)～60％B(60min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～40℃；进样量：5～30μL。本发明专利技术还提供一种利用指纹图谱评价蒙药漏芦花质量的方法，该方法灵敏度高，重现性好；所获得的标准指纹图谱能较全面的反映漏芦花蒙药材中所含的化学成分种类与数量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及中药材指纹图谱建立方法和药材质量评价方法。
技术介绍
随着蒙药产业的快速发展，资源不合理利用和环境变迁等原因带来的野生资源日益减少的问题凸显，严重制约了蒙药产业的健康发展。蒙药材的自采自用也很普遍，目前市场上有一些蒙医专用的道地产药材并没有商品流通，有的有市场流通的商品药材，但品种混乱，临床使用情况不清，这就给合理有效的使用蒙药材造成很大困扰。漏芦花就是其中一种，其同名异物现象非常普遍，多被误用同科其他植物头状花序入药。所以选择一种能快速、高效、全面的反映蒙药材质量信息的手段是非常必要和重要的，而指纹图谱技术就是符合这些特点的技术手段，且化学成分指纹图谱亦可鉴别饮片的品质，也可辅助对品种鉴定，能基本反映中药全貌，实现对中药内在质量的控制。蒙药漏芦花为菊科漏芦属植物祁州漏芦Rhaponticumuniflorum(L.)DC.的干燥花。蒙药名：洪古尔-珠尔,分布于我国内蒙古、东北、河北、陕西、甘肃、青海、山西、河南、四川、山东等地。入蒙药可杀“粘”、止刺痛、清热、解毒、解表等，主治感冒、心热痢疾、血热及传染性热症等。漏芦花为蒙医临床常用药，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)，但无鉴别、检查、含量测定项，《中国药典》2015版中只有关于中药漏芦(祁州漏芦的根)的质量控制方法，但并不适用于漏芦花。这不仅制约了漏芦花资源的有效利用，也无法保证用药的安全性和有效性。本专利技术首次建立了蒙药漏芦花指纹图谱，标识了13个共有峰中的8个峰。研究所用的HPLC法操作简单，分离度高，重现性好。建立的标准指纹图谱典型、全面、有代表性，能真实、客观地反映漏芦花所含化学成分的类型、数量和相对含量。
技术实现思路
本专利技术提出一种漏芦花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：取药材粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇，超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱85％B(0min)～78％B(12min)～74％B(13min)～60％B(60min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～40℃；进样量：5～30μL。作为优选，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm,5μm的YMC-PackODS-A色谱柱或者岛津InertsilODS-SPHPLC色谱柱。进一步的优选是，步骤1)中，取药材粉末约0.2g，精密称定，加入70％甲醇25mL，超声提取40min，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。更优选地，流速为1.2ml/min；采用DAD检测器，检测波长254nm；柱温25℃；进样量10μL。本专利技术还提供一种利用指纹图谱评价黄花列当药材质量的方法，包括以下步骤：步骤一：建立标准指纹图谱，包括：a)供试品溶液的制备：分别制备11个不同批次的漏芦花样品供试品溶液，取样品粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇，超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)蜕皮甾酮、2)槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、3)芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、4)山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、5)泥胡木脂素B苷、6)木犀草素、7)芹菜素、8)5,7,4’-三羟基-3’-甲氧基黄酮共8种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的单一对照溶液，微孔滤膜0.45μm滤过，备用；c)先后将各供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中，分别获得指纹图谱，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱85％B(0min)～78％B(12min)～74％B(13min)～60％B(60min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～40℃；进样量：5～30μL；d)用相似度评价软件计算11个样品的相似度，从中确定一个相似度最高的作为标准指纹图谱。步骤二：用上述相同的方式获得一个待评价样品的指纹图谱；步骤三：用前述相似度评价软件评价所述待评价样品指纹图谱和所述标准指纹图谱的相似度，相似度大于0.9则判定所述待评价样品质量符合要求。进一步地，所述标准指纹图谱包含以下13个共有峰，各峰的相对保留时间分别为：5.40，11.24，16.47，17.46，18.53，18.91，20.92，22.62，23.01，25.43，27.66，33.59，35.22。更进一步地，其中，所述13个共有峰的相对峰面积分别为0.164，1.280，0.378，0.115，0.061，0.617，0.056，0.251，0.446，0.491，0.268，0.038。更进一步地，用所述共有峰中标识出的8个对照品对应峰的峰面积，与待测样品对应的峰面积进行比较，后者峰面积越大，说明样品质量越好。根据本专利技术的供试品溶液制作方法操作溶液，具有较高的精密度、稳定性、和重现性，系统适用性强，可适用于该属药材的制作。所建立的漏芦花指纹图谱分析方法灵敏度高，重现性好；所获得的标准指纹图谱具有典型性、代表性，能较全面的反映漏芦花药材中所含的化学成分种类与数量，进而对药材的整体评价和描述提供一个更为全面的依据。本专利技术建立的漏芦花药材高效液相指纹图谱技术，弥补了现今尚属空白的漏芦花药材质量控制的方法，使漏芦花药材的质量控制技术更加科学全面。附图说明图1是根据本专利技术的方法获得的标准指纹图谱；图2和图3显示8个单一对照品与标准指纹图谱的对照图谱；图4是11批漏芦花药材HPLC指纹图谱叠加图。具体实施方式供试品溶液的制备该环节中，取干燥的漏芦花粉碎，取药材粉末，精密加入计算量的甲醇溶液，超声处理，放置至室温，溶剂补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。本专利技术中，使用甲醇水溶液作为供试品溶剂，甲醇溶液的浓度范围可以在50～100％之间，优选在60～80％之间，最优选70％的甲醇溶液。优选将漏芦粉碎，使用时过65目筛，提取方法可以是回流或者超声处理，优选通过超声提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蒙药漏芦花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：取药材粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇，超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用如下色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：乙腈(A)‑0.2％磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱85％B(0min)～78％B(12min)～74％B(13min)～60％B(60min)；检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；柱温：20～40℃；进样量：5～30μL。

【技术特征摘要】
1.一种蒙药漏芦花指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取药材粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％
甲醇，超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重
量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；
2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用如下色
谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，采用梯度洗脱85％B(0min)
～78％B(12min)～74％B(13min)～60％B(60min)；
检测条件：DAD检测器，检测波长230～400nm；
柱温：20～40℃；
进样量：5～30μL。
2.权利要求1所述的处理方法，其中，色谱柱采用规格为250mm×4.6mm,5μm
的YMC-PackODS-A色谱柱或者岛津InertsilODS-SPHPLC色谱柱。
3.权利要求1所述的处理方法，其中，步骤1)中，取药材粉末约0.2g，精密
称定，加入70％甲醇25mL，超声提取40min，放置到室温后，再称定重量，
用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液以0.45μm微孔滤膜滤过。
4.权利要求3所述的处理方法，其中，流速为1.2mL/min；采用DAD检测器，
检测波长254nm；柱温25℃；进样量10μL。
5.一种利用指纹图谱评价漏芦花药材质量的方法，包括以下步骤：
建立标准指纹图谱，包括：a)供试品溶液的制备：分别制备11个不同批次
的漏芦花样品供试品溶液，取样品粉末，置100mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇，
超声提取，放置到室温后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液
以0.45μm微孔滤膜滤过，备用；b)对照品溶液的制备：称取1)蜕皮甾酮、2)
槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、3)芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、4)山奈酚-3-O-
α-L-鼠李糖苷、5)泥胡木脂素B苷、6)木犀草素、7)芹菜素、8)5,7,4’-三羟
基-3’-甲氧基黄酮共8种对照品，用甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓琴，杜月，李彩峰，特布沁，黄慧，韩国庆，
申请(专利权)人：内蒙古医科大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15