用于治疗的免疫原性组合物制造技术

本申请公开了一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg的糖剂量施用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及葡萄球菌免疫原性组合物和疫苗、它们的制备和这样的组合物在药物中的用途的领域。更具体地，它涉及与载体蛋白缀合的、得自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的荚膜糖制备的缀合物的用途。这样的缀合物可以与选定的葡萄球菌蛋白抗原组合以形成多价组合物。
技术介绍
金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus,S.aureus）是寄居在约30%的人受试者的鼻孔、腋、咽以及其它粘膜表面和皮肤表面的共生性革兰氏阳性细菌。据估计，金黄色葡萄球菌引起所有健康护理相关感染的20-25%(Wisplinghoff等人ClinInfect.Dis.2004;39;309-317)，导致受感染的患者与不具有这样的感染的患者相比3倍的住院期持续时间和高5倍的住院死亡风险(Noskin等人Arch.Intern.Med.2005;165;1756-1761)。金黄色葡萄球菌感染可以与高达25%的住院死亡率相关。在历史上，金黄色葡萄球菌已经主要与医院感染相关。这样的感染的严重性已经随着与抗生素抗性有关的金黄色葡萄球菌感染的最近急剧增加而增加。金黄色葡萄球菌是具有显著发病率和死亡率的医院感染的最常见原因(Romero-Vivas等人1995,Infect.Dis.21;1417)。它是骨髓炎、心内膜炎、脓毒性关节炎、肺炎、脓肿和中毒性休克综合征的一些病例的原因。已经研究了包括施用针对葡萄球菌抗原的多克隆抗血清的被动免疫疗法(WO00/15238,WO00/12132)以及使用针对脂磷壁酸的单克隆抗体的免疫疗法(WO98/57994)。但是，迄今都没有被许可使用。几种免疫疗法候选物在人类中没有表现出效力。这些包括：Altastaph(NabiBiopharmaceuticals)，其含有从接种了StaphVAX?(由NabiBiopharmaceuticals,Rockville,MD,USA开发和注册商标的研究疫苗)的受试者纯化出的CP5和CP8抗体；Veronate(Inhibitex)，靶向金黄色葡萄球菌聚集因子A(ClfA)和表皮葡萄球菌（S.epidermidis）粘附SdrG的多克隆抗体；Aurexis(替非珠单抗,Inhibitex)，靶向ClfA的单克隆抗体；Aurograb(NeuTecPharma)，针对ATP-结合盒转运蛋白的单链抗体；和帕昔单抗(Biosynexus)，单克隆抗-脂磷壁酸抗体(Dejonge等人J.Paediatrics2007;151;260-265,Rupp等人Antimicrob.AgentsChemother.2007;51;4249-4254)。一种替代方案是使用主动疫苗接种来产生针对葡萄球菌的多克隆免疫应答。在WO03/61558中报道的一个方案使用与假单胞菌属（Pseudomonas）胞外蛋白A缀合的金黄色葡萄球菌5型和8型荚膜多糖的缀合物(StaphVAX-NabiBiopharmaceuticals)。另一个方案使用金黄色葡萄球菌IsdB蛋白(V710-Merck&Co)，但是没有表现出效力(Fowler等人2013;JAMA309;1368-1378)。存在许多与针对金黄色葡萄球菌感染的疫苗的开发有关的问题。依赖于单一组分(荚膜多糖或IsdB蛋白)的疫苗的失败提示，可能需要含有多种组分的更复杂的疫苗来诱导保护性免疫。但是，在免疫原性组合物中组合不同抗原可以导致在所述组合物中发生的干扰(Skurnik等人(2010)J.Clin.Invest.120;3220-3233)。因此，要在多价组合物中组合的组分的鉴别不是直接的。仍然存在开发针对葡萄球菌感染的有效疫苗的需要，特别是考虑到多药抗性菌株的逐渐增加的频率。在针对医院葡萄球菌感染进行免疫的情况下，免疫经常可以仅在住院治疗或外科手术或留置导管安置之前短时间进行。因此，将其有利的用单次免疫达到高免疫水平。较低剂量的缀合物的应用还具有疫苗生产的相对效率和有关经济效益的优点。因此，提供了一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-10μg、7-20μg、7-15μg或8-12μg的糖剂量施用。在本专利技术的第二方面，提供了一种包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-10μg、7-20μg、7-15μg或8-12μg的糖剂量施用，其用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染，其中给人患者施用单次剂量的免疫原性组合物。在本专利技术的第三方面，提供了一种免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖、与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖、ClfA蛋白或其片段和α类毒素。在本专利技术的第四方面，提供了一种疫苗，其包含与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖、与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖、ClfA蛋白或其片段和α类毒素和药学上可接受的赋形剂。在本专利技术的第五方面，提供了一种用于制备本专利技术的免疫原性组合物或疫苗的方法，所述方法包括下述步骤：a)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，b)将金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，和c)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物、ClfA蛋白或其片段和α类毒素组合以形成免疫原性组合物。附图说明图1-在1或2剂量的4C疫苗以后经历疼痛的受试者的百分比。在每个制剂分组中，前3列提供了在单次剂量以后经历疼痛的受试者的百分比，其中第一列代表所有疼痛报告，第二列代表超过或等于2级的疼痛，和第三列代表3级疼痛。第4列、第5列和第6列显示了第二剂量以后的相同信息。图2-在1或2剂量的4C疫苗以后经历发红的受试者的百分比。在每个制剂分组中，前3列提供了单次剂量以后经历发红的受试者的百分比，其中第一列代表所有发红报告，第二列代表超过50mm的发红，且第三列代表超过100mm的发红。第4列、第5列和第6列显示了第二剂量以后的相同信息。图3–在1或2剂量的4C疫苗以后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3‑50 μg、5‑25 μg、3‑20 μg、3‑12 μg、5‑10 μg、7‑20 μg、7‑15 μg或8‑12 μg的糖剂量施用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.06.05 GB 1310008.61.一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者
施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5
型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄
球菌5型荚膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-10μg、7-20μg、7-15μg
或8-12μg的糖剂量施用。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含金黄色葡萄球菌8型荚膜
糖，所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合
物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-
10μg、7-20μg、7-15μg或8-12μg的糖剂量施用。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过
25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、
30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有
超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-
125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述5型荚膜糖所缀合的载体蛋白选
自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA、铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其中所述8型荚膜糖所缀合的载体蛋白选
自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述载体蛋白是破伤风类毒素。
8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/
或所述8型荚膜糖被50-100%或75-100%O-乙酰化。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/
或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖直接缀合至所述载体蛋白。
10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖使
用氰基化试剂进行缀合。
11.根据权利要求1-10中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖使
用氰基化试剂进行缀合。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述氰基化试剂是CDAP。
13.根据权利要求1-12中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀
合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1(w:w)之间或在1:2和2:1(w/w)、1:2至1:5(w/
w)或1:1和1:2(w/w)之间。
14.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀
合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1(w:w)之间或在1:2和2:1(w/w)、1:2至1:5(w/
w)或1:1和1:2(w/w)之间。
15.根据权利要求1-14中的任一项所述的方法，其中相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型
荚膜糖和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖存在于所述免疫原性组合物中。
16.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物进一步包含
ClfA蛋白或其片段。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段与SEQIDNO:3-12中的
任一个的多肽序列沿着其全长具有至少90%同一性。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N2结构域的
ClfA片段。
19.根据权利要求16-18所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N3结构域的
ClfA片段。
20.根据权利要求16-19中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N1
结构域的ClfA片段。
21.根据权利要求16-20中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段包含N2-
N3结构域，且具有与SEQIDNO:6、7、11、12、15、16、17或18的序列具有至少90%同一性的多
肽序列。
22.根据权利要求16-21中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段含有减小
ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基酸置换。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段含有在氨基酸Ala254、
Tyr256、Pro336、Tyr338、Ile387、Lys389、Tyr474、Glu526或Val527中的至少一个处的氨基
酸置换。
24.根据权利要求22所述的方法，其中氨基酸Pro336被突变成Ser和/或Y338被突变成
Ala。
25.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段作为未缀
合的蛋白存在于所述免疫原性组合物中。
26.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所
述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
27.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所
述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
28.根据权利要求16-18中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段以5-50、
10-30、5-15或20-40μg的剂量存在于所述免疫原性组合物中。
29.根据权利要求1-28中的任一项所述的方法，其中在计划的医院手术之前5-60、6-
40、7-30或7-15天施用所述单次剂量的免疫原性组合物。
30.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含α类毒素。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述α类毒素具有与SEQIDNO:1、2、13或14具有
至少90%同一性的氨基酸序列。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述α类毒素含有降低α类毒素的毒性的点
突变。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述α类毒素含有在氨基酸35处的点突变。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述在氨基酸35处的点突变用精氨酸氨基酸替
代组氨酸。
35.根据权利要求30-34中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素作为未缀合的蛋白
存在于免疫原性组合物中。
36.根据权利要求30-35中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色
葡萄球菌5型荚膜糖。
37.根据权利要求30-36中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色
葡萄球菌8型荚膜糖。
38.根据权利要求30-37中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素以5-50、10-30、5-15
或20-40μg的剂量存在于免疫原性组合物中。
39.根据权利要求30-38中的任一项所述的方法，其中所述ClfA和α类毒素以相同剂量
存在于所述免疫原性组合物中。
40.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物不含有水包油乳剂。
41.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物未加佐剂。
42.一种免疫原性组合物，其包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖，所述金黄色葡萄球菌5型
荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球
菌5型荚膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-10μg、7-20μg、7-15μg或
8-12μg的糖剂量施用，其用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染，其中用单次剂量的所述免
疫原性组合物免疫人患者。
43.根据权利要求42所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，
其中所述免疫原性组合物包含金黄色葡萄球菌8型荚膜糖，所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖
与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚
膜糖缀合物以3-50μg、5-25μg、3-20μg、3-12μg、5-10μg、7-20μg、7-15μg或8-12μg
的糖剂量施用。
44.根据权利要求42或43所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合
物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、
50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分
子量。
45.根据权利要求42-44中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在
25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-
70kDa之间的分子量。
46.根据权利要求42-45中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述5型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、
CRM197、α类毒素、ClfA、铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
47.根据权利要求42-46中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述8型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、
CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
48.根据权利要求46或47所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合
物，其中所述载体蛋白是破伤风类毒素。
49.根据权利要求42-48中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖
被50-100%或75-100%O-乙酰化。
50.根据权利要求42-49中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖
直接缀合至所述载体蛋白。
51.根据权利要求42-50中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
52.根据权利要求42-51中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
53.根据权利要求51或52所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合
物，其中所述氰基化试剂是CDAP。
54.根据权利要求42-53中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5
和5:1(w:w)之间或在1:2和2:1(w/w)、1:2至1:5(w/w)或1:1和1:2(w/w)之间。
55.根据权利要求42-54中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5
和5:1(w:w)之间或在1:2和2:1(w/w)、1:2至1:5(w/w)或1:1和1:2(w/w)之间。
56.根据权利要求42-55中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖
存在于所述免疫原性组合物中。
57.根据权利要求42-56中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物进一步包含ClfA蛋白或其片段。
58.根据权利要求57所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，
其中所述ClfA蛋白或其片段与SEQIDNO:3-12或15-18中任一的多肽序列沿着其全长具有
至少90%同一性。
59.根据权利要求57或58所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合
物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N2结构域的ClfA片段。
60.根据权利要求57-59所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合
物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N3结构域的ClfA片段。
61.根据权利要求57-60中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N1结构域的ClfA片段。
62.根据权利要求57-58中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段包含N2-N3结构域，且具有与SEQIDNO:6、7、
11、12、15、16、17或18的序列具有至少90%同一性的多肽序列。
63.根据权利要求57-62中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免
疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段含有减小ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基
酸置换。
64.根据权利要求63所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，
其中所述ClfA蛋白或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：RL比曼斯，D布特里奥，P德诺埃尔，P杜维维尔，C戈拉吉，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE