合成双功能复合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种合成包含反应产物和编码区域的双功能复合物的方法。该复合物是新生双功能复合物和构件之间的杂交产物。新生双功能复合物包含连接到寡核苷酸标识符区的连接实体，构件包含和与该标识符区足够互补以允许杂交的寡核苷酸连接的功能实体。然后，功能实体可通过化学反应转移到连接实体上。互补标识符区还包含独特密码子，它明确地标识该功能实体。该密码子在使用酶(例如聚合酶)延伸该标识符区域时用作模板以形成独特密码子。独特密码子可用于解码几轮功能实体转移后反应产物的合成历史。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2003年10月30日、专利技术名称为“合成双功能复合物的方法”的中国专利申请号CN201210222023.8的分案申请。其中，中国专利申请号CN201210222023.8是申请日为2003年10月30日、专利技术名称为“合成双功能复合物的方法”的中国专利申请号200380104764.5的分案申请。该申请要求2002年10月30日递交的U.S.临时申请系列No.60/422,167；2002年12月19日递交的U.S.临时申请系列No.60/434,425,和2003年7月11日递交的U.S.临时申请系列No.60/486,199的权益,这些申请在此作为参考完全并入本专利技术。在这些专利申请中或在本申请中引用的所有专利和非专利参考文件在此作为参考完全并入本专利技术。
本专利技术涉及一种用于得到包含展示分子部分和编码部分的双功能复合物的方法。本专利技术还涉及一种用于生成双功能复合物库的方法,一种用于鉴定具有预选性能的展示分子的方法。
技术介绍
已经开发出能够对多肽和其它生化聚合物进行合成编码的方法。该方法的一个例子公开于US5,723,598,其中涉及双功能分子库本文档来自技高网...

【技术保护点】
获得包含展示分子部分和编码部分的双功能复合物的方法，包括步骤：a)提供包含反应基团和寡核苷酸标识符区域的新生双功能复合物,b)提供包含对标识符区域足够互补从而允许杂交的寡核苷酸、可转移的功能实体和标识该功能实体的反密码子的构件,c)将新生双功能复合物和构件在杂交条件下混合形成杂交产物,d)通过涉及新生双功能复合物的反应基团的反应将构件的功能实体转移至新生双功能复合物上,和e)酶促延伸该寡核苷酸标识符区域,以得到连接到已接收该功能实体的双功能复合物上的密码子。

【技术特征摘要】
2002.10.30 DK 200201652;2002.12.19 DK 200201955;201.获得包含展示分子部分和编码部分的双功能复合物的方法，包括步骤：a)提供包含反应基团和寡核苷酸标识符区域的新生双功能复合物,b)提供包含对标识符区域足够互补从而允许杂交的寡核苷酸、可转移的功能实体和标识该功能实体的反密码子的构件,c)将新生双功能复合物和构件在杂交条件下混合形成杂交产物,d)通过涉及新生双功能复合物的反应基团的反应将构件的功能实体转移至新生双功能复合物上,和e)酶促延伸该寡核苷酸标识符区域,以得到连接到已接收该功能实体的双功能复合物上的密码子。2.用于产生双功能复合物库的方法,包括步骤:a)提供一种或多种不同的包含反应基团和寡核苷酸标识符区域的新生双功能复合物,b)提供多个不同的构件,每个构件包含与标识符区域足够互补从而允许杂交的寡核苷酸、可转移的功能实体和标识该功能实体的反密码子，c)将新生双功能复合物和多个构件在杂交条件下混合以形成杂交产物,d)通过涉及新生双功能复合物的反应基团的反应将构件的功能实体转移至新生双功能复合物上,e)酶促延伸该寡核苷酸标识符区域,以得到连接到已接收该化学实体的双功能复合物上的密码子,f)分开杂交产物的组分和回收复合物,g)适当地重复步骤c)至f)一次或多次。3.包含化学反应部位和用于酶加入标签的引发部位的新生双功能复合物。4.新生双功能复合物，其包含：a)通过化学反应部位与反应物反应得到的反应产物，其中，化学反应部位通过连接部分与标识该化学反应部位的第一寡核苷酸标签连接，其中，第一寡核苷酸标签包括用于通过酶催化来加入第二寡核苷酸标签的引发部位，b)标识反应物的第二寡核苷酸标签，和c)互补的寡核苷酸，它杂交到所述的第一核苷酸标签和第二寡核苷酸标签的每一个上。5.由不同的根据权利要求3和4任一项所述的新生双功能复合物构成的库。6.组合物，其包含根据权利要求3和4任一项所述的新生双功能复合物和能够连接所述第一寡核苷酸标签和所述第二寡核苷酸标签的酶。7.组合物，包含a)反应物，其能够与包含具有一个或多个连接的反应基团的支架的化学反应部位反应，所述支架通过连接部分共价连接到标识所述支架的第一寡核苷酸标签，b)化学反应部位，其包含具有一个或多个连接的反应基团的支架，所述支架通过连接部分共价连接到标识所述支架的第一寡核苷酸标签，c)标识所述反应物的第二寡核苷酸标签，和d)能够连接所述第一寡核苷酸标签和所述第二寡核苷酸标签的酶。8.双功能复合物，其包含展示分子和寡核苷酸标识符，所述展示分子通过连接部分连接到所述寡核苷酸标识符，其中所述寡核苷酸标识符包含标识已参与所述展示分子形成的反应物的寡核苷酸标签，其中所述寡核苷酸标识符包含双链部分，所述双链部分包含互补链，和/或其中所述寡核苷酸标识符处于包含互补链的双链态下，和/或其中所述寡核苷酸标识符包含脱氧核糖核苷酸(DNA)，不含有核糖核苷酸(RNA)，和/或其中寡核苷酸标识符各包含各自构架序列和/或标识各自寡核苷酸标识符的侧翼序列，和/或其中所述寡核苷酸标识符的各个标签通过间隔基序列分离，所述间隔基序列提供与各反应物反应时所采用的反应条件的信息，其中优选地，所述间隔基序列具有1-20个核苷酸，和/或其中，一种或多种标识符标签标识两种或更多种反应物，和/或其中标识符标签标识几种不同的反应物，和/或其中几种不同的标识符标签标识或用于标识相同的反应物，和/或其中接头是柔性接头并包含PEG部分或烷基链，和/或其中柔性接头连接所述双链标识符寡核苷酸的两条链，和/或其中所述展示分子是通过与多个反应物反应获得的环形、具有支架的分子，和/或其中当合成所述展示分子时一种或两种反应物被反应，和/或其中所述展示分子是分子量小于1000Da的小分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的非聚合分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的聚合分子，和/或其中所述展示分子是通过进行以下的一种或多种反应获得的反应产物：酰基化反应、烷基化、乙烯基化反应、链烯基化反应、HWE反应、Wittig反应、过渡金属催化的反应、过渡金属催化的芳基化反应、过渡金属催化的杂芳基化反应、过渡金属催化的乙烯基化反应、钯催化的反应、钯催化的芳基化反应、钯催化的杂芳基化反应、钯催化的乙烯基化反应、使用硼酸或硼酸酯的反应、使用芳基碘化物的反应、使用烯胺的反应、使用烯醇醚的反应、狄尔斯-阿尔得反应(Diels-Aldertypereaction)、1,3-偶极环加成反应、使用EDC的反应、使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(DMTMM)的反应和涉及多组分反应的反应，和/或其中所述展示分子包含酰胺键、羧酸酯键、磺酰胺键、二硫键、S-烷基键、NR-烷基键、O-烷基键、芳基-乙烯基键、炔基-乙烯基键、肟键、亚胺键，和/或其中所述展示分子是双环产物、三唑、己烯、7-氧杂-双环[2.2.1]庚-2-烯衍生物、7-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-烯衍生物或7-甲基-7-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-烯。9.新生双功能复合物，包含a)反应产物，其通过反应物与化学反应部位反应获得，其中所述化学反应部位通过连接部分连接到标识所述化学反应部位的第一寡核苷酸标签，其中所述第一寡核苷酸标签包含用于酶加入第二寡核苷酸标签的引发部位，b)标识反应物的第二寡核苷酸标签，和c)互补的寡核苷酸，它杂交到所述的第一核苷酸标签和第二寡核苷酸标签的每一个上，其中所述寡核苷酸标识符包含双链部分，所述双链部分包含互补链，和/或其中所述寡核苷酸标识符处于包含互补链的双链态下，和/或其中所述寡核苷酸标识符包含脱氧核糖核苷酸(DNA)，不含有核糖核苷酸(RNA)，和/或其中寡核苷酸标识符各包含各自构架序列和/或标识各自寡核苷酸标识符的侧翼序列，和/或其中所述寡核苷酸标识符的各个标签通过间隔基序列分离，所述间隔基序列提供与各反应物反应时所采用的反应条件的信息，其中优选地，所述间隔基序列具有1-20个核苷酸，和/或其中，一种或多种标识符标签标识两种或更多种反应物，和/或其中标识符标签标识几种不同的反应物，和/或其中几种不同的标识符标签标识或用于标识相同的反应物，和/或其中接头是柔性接头并包含PEG部分或烷基链，和/或其中柔性接头连接所述双链标识符寡核苷酸的两条链，和/或其中所述展示分子是通过与多个反应物反应获得的环形、具有支架的分子，和/或其中当合成所述展示分子时一种或两种反应物被反应，和/或其中所述展示分子是分子量小于1000Da的小分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的非聚合分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的聚合分子，和/或其中所述展示分子是通过进行以下的一种或多种反应获得的反应产物：酰基化反应、烷基化、乙烯基化反应、链烯基化反应、HWE反应、Wittig反应、过渡金属催化的反应、过渡金属催化的芳基化反应、过渡金属催化的杂芳基化反应、过渡金属催化的乙烯基化反应、钯催化的反应、钯催化的芳基化反应、钯催化的杂芳基化反应、钯催化的乙烯基化反应、使用硼酸或硼酸酯的反应、使用芳基碘化物的反应、使用烯胺的反应、使用烯醇醚的反应、狄尔斯-阿尔得反应、1,3-偶极环加成反应、使用EDC的反应、使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(DMTMM)的反应和涉及多组分反应的反应，和/或其中所述展示分子包含酰胺键、羧酸酯键、磺酰胺键、二硫键、S-烷基键、NR-烷基键、O-烷基键、芳基-乙烯基键、炔基-乙烯基键、肟键、亚胺键，和/或其中所述展示分子是双环产物、三唑、己烯、7-氧杂-双环[2.2.1]庚-2-烯衍生物、7-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-烯衍生物或7-甲基-7-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-烯。10.双功能复合物，包含a)具有环结构[-Sc-BB2-BB3-BB1-]的大环展示分子，b)寡核苷酸标识符，包含标识已参与所述大环展示分子形成的反应物的寡核苷酸标签，和c)连接所述大环展示分子和所述寡核苷酸标识符的连接部分，其中，所述Sc是具有多个能够与反应物BB1和BB2反应的反应基团的支架，其中BB1是具有多个能够与反应物BB3和Sc反应的反应基团的反应物，其中BB2是具有多个能够与反应物BB3和Sc反应的反应基团的反应物，其中BB3是具有多个能够与反应物BB1和BB2反应的反应基团的反应物，其中BB1与BB3和Sc共价连接，其中BB2与BB3和Sc共价连接，和其中BB3与BB1和BB2共价连接，其中所述寡核苷酸标识符包含双链部分，所述双链部分包含互补链，和/或其中所述寡核苷酸标识符处于包含互补链的双链态下，和/或其中所述寡核苷酸标识符包含脱氧核糖核苷酸(DNA)，不含有核糖核苷酸(RNA)，和/或其中寡核苷酸标识符各包含各自构架序列和/或标识各自寡核苷酸标识符的侧翼序列，和/或其中所述寡核苷酸标识符的各个标签通过间隔基序列分离，所述间隔基序列提供与各反应物反应时所采用的反应条件的信息，其中优选地，所述间隔基序列具有1-20个核苷酸，和/或其中，一种或多种标识符标签标识两种或更多种反应物，和/或其中标识符标签标识几种不同的反应物，和/或其中几种不同的标识符标签标识或用于标识相同的反应物，和/或其中接头是柔性接头并包含PEG部分或烷基链，和/或其中柔性接头连接所述双链标识符寡核苷酸的两条链，和/或其中所述展示分子是通过与多个反应物反应获得的环形、具有支架的分子，和/或其中当合成所述展示分子时一种或两种反应物被反应，和/或其中所述展示分子是分子量小于1000Da的小分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的非聚合分子，和/或其中所述展示分子是分子量大于1000Da的聚合分子，和/或其中所述展示分子是通过进行以下的一种或多种反应获得的反应产物：酰基化反应、烷基化、乙烯基化反应、链烯基化反应、HWE反应、Wittig反应、过渡...

【专利技术属性】
技术研发人员：PO·弗里斯克加德，T·弗朗奇，A·H·古利艾夫，M·D·伦多夫，J·费尔丁，E·K·奥尔森，A·霍尔特曼，S·N·雅克布森，C·萨姆斯，S·S·格莱德，K·B·延森，H·佩德森，
申请(专利权)人：纽韦卢森公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK