一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法技术

本发明专利技术公开一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚；2)胰酶冲洗；3)匀浆；4)消化；5)分散；6)传代培养，得到鸡胚成纤维细胞。本发明专利技术提供的方法得到的鸡胚成纤维细胞收获量相较于传统的方法，收获量提高20倍以上且操作时间短。经实践证明，每个鸡胚可以传10‑20个T225的细胞瓶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法,属于细胞培养

技术介绍
鸡胚成纤维细胞(CEF)除了应用于病毒学领域的相关研究，还广泛用于兽用疫苗生产，例如传染性法氏囊病、马立克病、新城疫等，也可用为表达一些基因工程产物等。目前报道分离鸡胚成纤维细胞的方法多种多样，主要适合应用于实验室制备少量鸡胚成纤维细胞，其通常包括无菌取鸡胚，去头、四肢、内脏等，剪碎，PBS或Hank’s溶液洗涤，胰酶消化，吹散，纱布过滤，离心回收细胞、细胞计数、培养等步骤。其操作步骤繁多容易污染，操作时间长通常需要3个小时左右，并且收获的鸡胚成纤维细胞非常少，完全不适合大量生产。因此，本专利技术致力于解决上述问题，快速制备大量的CEF细胞。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种细胞收获量高、操作时间短的快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚：取9-11日龄SPF鸡胚，消毒，无菌操作取出鸡胚；2)胰酶冲洗：将步骤1)取出的鸡胚剪成直径为0.5-1cm块状组织；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚：取9‑11日龄SPF鸡胚，消毒，无菌操作取出鸡胚；2)胰酶冲洗：将步骤1)取出的鸡胚剪成直径为0.5‑1cm块状组织；然后加入0.25wt％胰酶溶液冲洗，去除红细胞；3)匀浆：无菌条件下使用匀浆机将步骤2)处理后的鸡胚粉碎匀浆至鸡胚组织块直径小匀1mm；4)消化：向步骤3)匀浆后的组织块中加入0.25wt％胰酶溶液，轻晃混匀使进行消化；5)分散：吸取步骤4)消化后得到的上清液，转移至细胞瓶，吹打1‑3min，使细胞分散；6)培养：向步骤5)的细胞瓶内加入含有胎牛血清的培养基，在37℃、5％CO2培养箱中培养，24‑32h后更换培养...

【技术特征摘要】
1.一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚：取9-11日龄SPF鸡胚，消毒，无菌操作取出鸡胚；2)胰酶冲洗：将步骤1)取出的鸡胚剪成直径为0.5-1cm块状组织；然后加入0.25wt％胰酶溶液冲洗，去除红细胞；3)匀浆：无菌条件下使用匀浆机将步骤2)处理后的鸡胚粉碎匀浆至鸡胚组织块直径小匀1mm；4)消化：向步骤3)匀浆后的组织块中加入0.25wt％胰酶溶液，轻晃混匀使进行消化；5)分散：吸取步骤4)消化后得到的上清液，转移至细胞瓶，吹打1-3min，使细胞分散；6)培养：向步骤5)的细胞瓶内加入含有胎牛血清的培养基，在37℃、5％CO2培养箱中培养，24-32h后更换培养基，传代培养，得到鸡胚成纤维细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，具体消毒步骤为：采用75vt％...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞爱，徐家华，王新秋，孙贝贝，任常宝，谢小雨，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，广东温氏大华农生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44