一种南极磷虾DTDP的提取纯化及检测方法技术

本发明专利技术公开一种南极磷虾DTDP的提取纯化及检测方法，该方法包括将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；将甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；将乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；将酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；将氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；将氯仿层B蒸发除去溶剂，再加入石油醚浸溶，过滤得到石油醚浸提液；将石油醚浸提液蒸发除去溶剂，得到DTDP。本发明专利技术首次在南极磷虾中发现了DTDP，并对其进行了提取检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种南极磷虾5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1’,2’-d]吡嗪的提取纯化及检测方法，属食品、药品和化工领域。
技术介绍
南极磷虾(EuphausiasuperbaDana)，隶属节肢动物门、甲壳纲、磷虾目，体型较小，一般体长约5.5～6.0cm，体重约2g左右。南极生物种类较少，但数量庞大，食物链也相对简单。以浮游植物为食的南极磷虾是鲸、海豹、企鹅等肉食动物的主要食物，也是南极食物链中的基础。南极磷虾是地球上数量最大繁衍最成功的单种生物资源之一，其生物蕴藏量约为6.5×108～10×108吨，最新估算量为3.79×108吨。在粮食短缺，世界渔业资源萎缩，尤其是中国近海渔业开发过度的情况下，南极磷虾无疑是一种具有巨大开发潜力的境外渔业资源。南极磷虾营养丰富，富含活性物质。南极磷虾蛋白及酶类、虾青素、甲壳素等均已有研究报道。随着南极磷虾研究的深入，南极磷虾产品也由初级的饲料虾粉等向高端的保健、医药领域发展。加快南极磷虾研究进度有利于我国在南极磷虾产业方面占据优势地位。5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1’,2’-d]吡嗪(5,10-diethoxy-2,3,7,8-tetrahydro-1H,6H-dipyrrolo[1,2-a；1′,2′-d]pyrazine,简称DTDP)具有明显的抗炎、抗肿瘤等作用，多发现于微生物中，蛴螬、茶叶等也含有DTDP。目前世界上还未有南极磷虾DTDP的研究报道。因此研究南极磷虾中是否含有DTDP以及它的提取和检测方法，这对南极磷虾的活性物质开发，提高其附加值具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种南极磷虾5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的提取纯化方法。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：一种南极磷虾5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的提取纯化方法，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，得到预提取物，使其与石油醚接触而进行浸溶，过滤得到石油醚浸提液；(7)将步骤(6)中的石油醚浸提液蒸发除去溶剂，得到5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。步骤(1)中，南极磷虾在接触甲醇提取前先经过冷冻干燥处理。由于南极磷虾体内的酶具有很高的活性，南极磷虾被捕捞后，其体内的内源消化酶能高活性的降解蛋白质，使死亡后的组织快速分解，加速了南极磷虾的自溶、腐败和变质；通过对南极磷虾进行冷冻干燥预处理，能够防止南极磷虾自溶，有效的保持南极磷虾的品质，从而可以有效提取5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。步骤(1)中，所述南极磷虾与甲醇加入量的比为1g:(6-10)mL，提取温度为75～85℃，优选80℃，甲醇提取的次数为7-9次，每次浸提的时间为1-2h，提取方式可以为回流提取或搅拌提取。甲醇回流提取的次数选为7-9次，能够尽可能多的分离提取出5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。步骤(2)中，所述甲醇膏与乙醚加入量的比为1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次数为4-6次，每次浸提的时间为0.5-1h。乙醚的提取次数选为4-6次，不仅有效分离出南极磷虾中的5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪，还能尽量减少提取次数的增加所带来的能源浪费。步骤(3)中，不同条件所得乙醚浸膏量不同，乙醚复溶时加入乙醚的量可以根据实际情况进行调整。一般所述乙醚浸膏与乙醚的加入量比为1g：8～12mL(优选1g:10mL)，乙醚膏先用适量乙醚溶解，再与酸水萃取，可以增加与酸水的接触面积，保证碱性物质充分溶于酸水层。乙醚很容易旋蒸，即便全部整除，花费的时间也较短。其次实验发现，用旋蒸保留的乙醚不能使乙醚浸提物全部溶解。步骤(3)中，所述酸水溶液为硫酸水溶液或者酒石酸水溶液，优选的为硫酸水溶液；所述乙醚浸膏液与酸水溶液加入量的体积比为1:(10-30)。所述硫酸水溶液的体积分数为1～3％，优选的，所述硫酸水溶液的体积分数为2％，选择该浓度的硫酸水溶液既能保证足够的酸性以去除酸性杂质，又防止硫酸浓度过高引起目的物的氧化分解。步骤(4)中，所述酸水相和氯仿的体积比为1～2：1，优选的，所述酸水层和氯仿的体积比为1：1。氯仿与酸水相的搅拌萃取次数为6-8次，每次搅拌时间为1～1.5h(优选搅拌时间为1h)，充分混匀，尽可能使目标物质溶于氯仿层。本专利技术的萃取工序的萃取溶剂为氯仿时，不仅在萃取效率、分液性方面而且在萃取溶剂的易获得性方面，特别优选。步骤(5)中，所述氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1～2：1，优选的，所述氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1：1。所述氢氧化钠水溶液的体积分数为1～3％。加入氯仿与氢氧化钠水溶液的搅拌萃取次数为6-8次，每次搅拌时间为1～1.5h(优选为1h)，充分混匀，尽可能除去弱酸性杂质。步骤(6)中，所述预提取物与石油醚的质量体积比为1mg:1-3mL，加入石油醚后轻振，浸溶，保证尽可能的使目标物质溶于石油醚。从有效的纯化的观点出发，本专利技术优选选择石油醚，使得纯化后的DTDP的纯度较高。本专利技术中的搅拌方式为机械搅拌或磁力搅拌。对于萃取的具体方法，可列举出使用公知的萃取方法进行萃取，例如可列举出采用分液漏斗进行静置分液的方式进行萃取的方法等。采用上述提取纯化方法制备得到含有5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的样品。本专利技术还提供一种采用上述方法提取纯化的南极磷虾5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的检测方法，该方法采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析检测，检测条件为：DB-1色谱柱；载气：氦气；流速：0.8～1.2mL/min，溶剂延迟2～2.2min；升温程序：初始温度为45～55℃，以1.8～2.2℃/min升温到55～65℃，再以25～35℃/min升到240～260℃，保持5～10min。离子化方式:EI，60～80eV；离子源温度:240～260℃；载气:氦气；柱流速：0.8～1.2mL/min。以上条件是本专利技术人经过大量实验与分析进行摸索得到的色谱-质谱条件。优选的，为有效分离检测提取得到的物质成分，所述检测条件为：DB-1色谱柱，型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南极磷虾5,10‑二甲氧基‑2,3,7,8‑四氢‑1H,6H‑吡咯并[1,2‑a；1′,2′‑d]吡嗪的提取纯化方法，其特征是，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，得到预提取物，使其与石油醚接触而进行浸溶，过滤得到石油醚浸提液；(7)将步骤(6)中的石油醚浸提液蒸发除去溶剂，得到5,10‑二甲氧基‑2,3,7,8‑四氢‑1H,6H‑吡咯并[1,2‑a；1′,2′‑d]吡嗪。

【技术特征摘要】
1.一种南极磷虾5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的提取纯化方法，其特征是，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，得到预提取物，使其与石油醚接触而进行浸溶，过滤得到石油醚浸提液；(7)将步骤(6)中的石油醚浸提液蒸发除去溶剂，得到5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(1)中，南极磷虾在接触甲醇提取前先经过冷冻干燥处理；所述南极磷虾与甲醇加入量的比为1g:(6-10)mL，提取温度为75～85℃，甲醇提取的次数为7-9次，每次浸提的时间为1-2h，提取方式为回流提取或搅拌提取。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(2)中，所述甲醇膏与乙醚加入量的比为1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次数为4-6次，每次浸提的时间为0.5-1h。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：所述乙醚浸膏液与酸水溶液加入量的体积比为1:(10-30)；优...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翩翩，刘代成，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37