艾滋病感染细胞分离器制造技术

本发明专利技术涉及生物医学领域的艾滋病感染细胞分离器，其特征是以高生物相容性材料制成能通过单个血细胞和化学成份但不能通过两个及以上粘合而成的大体积细胞、孔径为150～250μm、50～150μm、15～40μm、8～15μm、5～8μm、3～5μm、1～2μm、相对应标定为I～VII型的细胞分离器，同时制备HIVgp120和CD4抗体，HIV感染细胞表面的gp120能自身或在gp120抗体或CD4抗体作用下粘合另外的CD4+细胞，形成大体积的多核巨细胞，选用I～II型分离器分离特大体积的真菌、螺旋菌、肿瘤细胞，选用III～VII型分离HIV感染的大体积多核巨细胞、多细胞聚合体、易受HIV感染的CD4+细胞，艾滋病感染细胞在分离器与其他部件构成的体外循环中被分离清除。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及艾滋病感染细胞分离器，主要应用于生物医学领域中艾滋病患者血液中被艾滋病毒感染的CD4+细胞的筛滤清除，从而达到治疗艾滋病的目的。
技术介绍
艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)引起的传染病，在全球广泛流行，根据世界卫生组织(WHO)和联合国艾滋病规划署的有关报告，自1981年美国发现首例艾滋病病例以来，至今全球有208个国家和地区受到了艾滋病的严重威胁，约有4000万人感染了艾滋病，死亡人数已超过2000万，每天约有6000人成为艾滋病感染者，同时每天约有300多人死于艾滋病。在中国HIV感染者正处于高速增长期，目前已远超过100万。艾滋病已经成为继肿瘤、心脑血管疾病、结核病、糖尿病后又一个人类面临的重大感染性疾病，已成为全球关注的严重的公共卫生和社会问题。HIV是感染人类免疫细胞的反转录病毒，直径约120纳米，大致呈球形，外膜是类脂包膜(来自宿主细胞)，并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41，gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并与gp41通过非共价作用结合，向内是由蛋白p17形成的球形基质(Matrix)，以及蛋白p24形成的半锥形衣壳(Capsid)，衣壳内含有病毒的RNA基因组、酶(逆转录酶、整合酶、蛋白酶)以及其他来自宿主细胞的成分；HIV进入人体后，首先被巨噬细胞吞噬，但HIV很快改变了巨噬细胞内某些部位的酸性环境，创造了适合其生存的条件，不但不被杀灭反而在其内繁殖。因为CD4是HIV的受体，所以经巨噬细胞内繁殖的HIV通过其囊膜蛋白gp120并在gp41的辅助下(gp41起着桥的作用，利用自身的疏水作用介导病毒囊膜与细胞膜融合)进入CD4+细胞(细胞、单核巨噬细胞、树突状细胞等)，在细胞内迅速增殖，每天产生109～1010病毒颗粒，并不断进入其他正常的和再生的CD4+细胞内复制，制造更多的病毒感染细胞，使外周血CD4+T细胞持续破坏、减少。CD4+T细胞是最重要的免疫细胞，感染者一旦失去了大量CD4+T细胞，整个免疫系统就会遭到致命的打击，对各种疾病的感染都失去抵抗力；HIV进入宿主CD4+细胞后也可以表现为长期潜伏而不表现出临床症状，其基因组RNA反转录成双链DNA，与病毒整合酶进入宿主细胞核内，在整合酶的作用下，双链DNA整合到宿主细胞基因组内，被整合的病毒DNA称为前病毒，可潜伏数月甚至多年不复制，造成AIDS数月至多年的潜伏期。在AIDS的潜伏期，HIV主要在淋巴结的巨噬细胞和树突状细胞内繁殖，这些细胞是体内的HIV贮存库，可释放至外周血或转染外周血中的CD4+T细胞，有丝分裂原、抗原、TNF、IL-2和淋巴素(LT)都能激发HIV前病毒基因在感染的CD4+T细胞内转录复制。此外，HIV病毒颗粒从感染的细胞释放至细胞外以前，表达于感染细胞表面的gp120和gp41能介导感染细胞与未感染细胞之间的融合，如感染的CD4+T细胞表达的gp120与未感染细胞的CD4结合，导致细胞融合而形成多核巨细胞。所以可设法清除血液中含有大量HIV的大体积多核巨细胞，以及将含有大量HIV的小体积单个细胞转变为大体积多细胞聚合体予以清除。HIV感染后可刺激机体生产囊膜蛋白(Gp120，Gp41)抗体和核心蛋白(P24)抗体。在HIV携带者、艾滋病病人血清中测出低水平的抗病毒中和抗体，其中艾滋病病人水平最低，HIV携带者最高，说明该抗体在体内有保护作用。但抗体不能与单核巨噬细胞内存留的病毒接触，且HIV囊膜蛋白易发生抗原性变异，原有抗体失去作用，使中和抗体不能发挥应有的作用。在潜伏感染阶段，HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，因此HIV不会被免疫系统所识别，所以仅依靠自身免疫功能无法将其清除。但可以应用目前技术上已经很成熟的各种常规多克隆或单克隆抗体等制备方法，进行产业化、工业化制备高滴度的HIV(Gp120，Gp41)抗体(市场有供应产品)及CD3、CD4抗体，由于抗体能与抗原发生特异性结合，所以感染HIV的细胞或含有CD3、CD4细胞分别能被HIV(Gp120，Gp41)抗体或CD3、CD4抗体结合形成大体积的多细胞聚合体而根据体积不同在体外予以筛滤清除，达到治疗艾滋病的目的。从目前已用于临床的艾滋病治疗方法看，效果不那么理想：(1)HIV逆转录酶抑制剂：仅能防止尚未感染HIV的易感细胞感染，对已感染的细胞没有治疗作用，且毒副作用较多，包括腺粒体毒性、骨髓抑制、红细胞性贫血、粒细胞和血小板减少、胰腺炎，加之交叉耐药性的产生，这类药已不单独使用，主要做联合用药，且易产生耐药变株，导致临床疗效下降或失效。(2)HIV蛋白酶抑制剂：易产生药物性肝损伤、脂质代谢紊乱等毒副作用及耐药性。(3)HIV整合酶抑制剂：通过抑制HIV病毒DNA与宿主细胞DNA整合而发挥作用，与HIV逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合同时使用对抗病毒有协同作用。(4)抑制HIV病毒进入抑制剂：包括阻断gp120与CD4结合、阻断HIV与辅助受体结合、作用于gp41膜亚单位及作用于T淋巴细胞表面CC趋化因子受体5(CCR5)来阻断HIV进入宿主细胞，但对肝和心脏有副作用。(5)细胞因子治疗：主要用于调节T细胞动态平衡。(6)HIV疫苗治疗：由于HIV的特殊性，如固有免疫不足以抵御HIV及其靶向破坏免疫系统，病毒突变迅速，导致至今尚未开发出真正安全有效的疫苗。(7)基因治疗：HIV基因治疗的研究从未间断，包括反义技术、RNA诱饵、RNA干扰、细胞内抗体、显性阴性突变体、自杀基因等，但进入II期临床试验阶段的基因疗法几乎没有。(8)单克隆抗体被动免疫疗法：通过下调CD4+T细胞表面CCR5来降低HIV的易感性、延缓艾滋病的进展和减少HIV的扩散，中和单克隆抗体2G12、2F5和4E10应用于HIV感染者具有良好的耐受性和安全性，能延缓但不能阻止病毒的反弹(9)过继性免疫细胞治疗：体外大量培养HIV自体的CD4+T细胞时会导致病毒大量扩增，增加病毒感染的CD4+T细胞数量，而回输CD4+T细胞可能会增加体内病毒复制的场所，导致病毒载量反弹，总体上看，过继性免疫细胞治疗无明显的毒副作用，也未取得满意的治疗效果。血液净化技术，是指把患者的血液引出体外并通过一种净化装置，除去其中某些致病物质，净化血液，再回输入体内，达到治疗疾病的目的，早期的血液净化常指血液透析技术，用于尿毒症患者肾替代治疗，随着医学的进步和血液净化装置的发展，在血液透析的基础上派生出不同的血液净化方式，如血浆置换、血液灌流、免疫吸附、血液滤过等，不同血液净化技术的应用，大大改善了某些疑难复杂疾病的治疗，如应用血浆置换技术清除大分子免疫复合物类致病因子以减轻、调节和治疗某些免疫性疾病。20世纪80年代以来，浙大一院李兰娟团队开始运用血浆置换治疗肝衰竭，即将肝衰竭患者的血液引出体外，分离出血浆，经吸附除去有害物质后，重新回输患者体内，取得了较好疗效，并在此基础上创立了非生物型、生物型、混合型人工肝支持系统，以及所涉及的人工肝透析器、血液滤过器、活性炭(树脂)吸附器、生物反应器等人工肝支持系统部件的改良和创新。但未见国内外将血液净化技术应用于艾滋病治疗的文献报道。总之，各种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于生物医学领域的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，分离器(7)含有内腔(6)，内腔(6)的管壁(5)由生物相容性好的高分子材料制成，内腔(6)通过管壁(5)上的微孔与外腔(8)相通，所述微孔的孔径为1～250μm，能通过单个细胞和化学成份但不能通过2个及以上粘合而成的大体积细胞。

【技术特征摘要】
1.一种用于生物医学领域的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，分离器(7)含有内腔(6)，内腔(6)的管壁(5)由生物相容性好的高分子材料制成，内腔(6)通过管壁(5)上的微孔与外腔(8)相通，所述微孔的孔径为1～250μm，能通过单个细胞和化学成份但不能通过2个及以上粘合而成的大体积细胞。2.根据权利要求1所述的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，所述分离器的微孔孔径为150～250μm、50～150μm、15～40μm、8～15μm、5～8μm、3～5μm、1～2μm。3.根据权利要求2所述的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，选用微孔孔径为150～250μm、50～150μm的分离器分离特大体积的真菌、螺旋菌和/或肿瘤细胞；选用微孔孔径为15～40μm、8～15μm、5～8μm、3～5μm的分离器分离HIV感染的单核巨噬细胞、多核巨细胞、多细胞聚合体、吸附有HIV的颗粒性物质和/或易受HIV感染的CD4+细胞。4.根据权利要求1-3任一所述的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，在分离器内腔(6)中加入抗体，以分离在抗体作用下形成的含艾滋病毒的多细胞聚合体。5.根据权利要求4所述的艾滋病感染细胞分离器，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，李兰娟，徐威，周志斌，潘小平，
申请(专利权)人：翁炳焕，
类型：发明
国别省市：浙江;33