低分子量透明质酸制备方法及应用技术

本发明专利技术公布一种低分子量透明质酸制备方法及应用，所述的低分子量透明质酸制备方法的特点是：采用Fe2+及S2O82‑氧化体系硫酸根自由基对透明质酸的氧化降解作用，来制备低分子量透明质酸的方法，包括配制溶液，降解发酵，沉淀，超高速旋转离心，浓缩，冻干等系列工艺；所述的低分子量透明质酸制备方法制得的小分子透明质酸应为医学，化妆品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种低分子量透明质酸制备方法及应用，特别是涉及应用Fe2+及S2O82-氧化体系硫酸根自由基对透明质酸的氧化降解作用，来制备低分子量透明质酸的方法。属于生物

技术介绍
透明质酸(hyaluronicacid，HA)是一种酸性黏多糖，由N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸双糖重复单位通过β-(1→4)糖苷键和β-(1→3)糖苷键构成的无分支高分子糖胺聚糖，存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。透明质酸广泛用于医药、化妆品、食品等领域，分子量一般为105~107Da（道尔顿）。寡聚透明质酸是指分子量小于10kDa的透明质酸。研究表明，分子量对透明质酸的活性有很大影响，但是对分子的渗透性影响很大，因此小分子透明质酸在生物渗透，生物降解方面具有独特的特性，极具应用价值。目前，透明质酸降解的方法主要有物理降解、化学降解、生物降解三大类，物理降解法很难将透明质酸降至10kDa以下，化学降解法和酶法可以制备寡聚透明质酸，但化学降解法制备寡聚透明质酸，需要较剧烈的反应条件（如较高的酸碱浓度等）才能达到最大程度的降解。此时，不但糖链上的糖苷键断裂，而且单糖（葡糖醛酸和乙酰氨基葡糖）残基的结构也遭到破坏，如乙酰基被水解掉，单糖六元环断裂等，对制得的寡聚透明质酸的生物活性产生一定影响。化学降解法制备的寡聚透明质酸还容易发生褐变（专利申请号201110008110.9），生产过程会污染环境。因此，本专利技术采用物理降解方法制备小分子透明质酸。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术存在的上述技术问题，通过研究改进，提供了一种采用Fe2+及S2O82-氧化体系硫酸根自由基对透明质酸的氧化降解作用，来制备低分子量透明质酸的方法。本专利技术包括配制溶液，降解发酵，沉淀，超高速旋转离心，浓缩，冻干等系列工艺。本专利技术给出的技术方案是：这种低分子量透明质酸制备方法，其特点是有以下步骤：1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg;2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;3）以S2O82-(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;4）使用H2So42-溶液将混合溶液PH值调制5-6;5）将液体稀释5倍;6）加热至35℃-40℃，降解30-60分钟;7)降解后使用70%乙醇沉淀降解产物;8)放入离心器中，高速离心，转速400-900r/min;9)凝缩，冻干成冻干粉;10)将冻干粉采用凝胶层析纯化，注入蒸馏水清浇脱水，水流速0.3-0.7ml/min;11)浓缩，冻干得小分子透明质酸。所述低分子量透明质酸制备方法，在于每1kg透明质酸原料，加入0.5kgFe2+标准摩尔溶液，加入0.5kgS2O82-标准摩尔溶液。所述低分子量透明质酸制备方法，在于小分子透明质酸应为医学，化妆品。具体实施方式实施例1。使用材料：透明质酸1x106Da，1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH)、硝基四氮唑蓝(NBT)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、菲洛嗪(ferrozine)Sigma，多糖系列标准品P-820.59-78.8x104Da，FeSO4.7H20、K2S208，分析纯。实验用水为二次蒸馏水，其它试剂均为分析纯。本专利技术给出的这种低分子量透明质酸制备方法，包括有以下步骤。1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg。2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液。3）以S2O82-(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液。4）使用H2So42-溶液将混合溶液PH值调制5-6。5）将液体稀释5倍。6）加热至35℃-40℃，降解30-60分钟。。7）降解后使用70%乙醇沉淀降解产物。8）放入离心器中，高速离心，转速400-900r/min。9）凝缩，冻干成冻干粉。10）将冻干粉采用凝胶层析纯化，注入蒸馏水清浇脱水，水流速0.3-0.7ml/min.浓缩，冻干得小分子透明质酸。本文档来自技高网...

【技术保护点】
低分子量透明质酸制备方法，其特征有以下步骤：1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg;2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;3）以S2O82‑(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;4）使用H2So42‑溶液将混合溶液PH值调制5‑6;5）将液体稀释5倍;6）加热至35℃‑40℃，降解30‑60分钟;7)降解后使用70%乙醇沉淀降解产物;8)放入离心器中，高速离心，转速400‑900r/min;9)凝缩，冻干成冻干粉;10)将冻干粉采用凝胶层析纯化，注入蒸馏水清浇脱水，水流速0.3‑0.7ml/min;11)浓缩，冻干得小分子透明质酸。

【技术特征摘要】
1.低分子量透明质酸制备方法，其特征有以下步骤：1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg;2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;3）以S2O82-(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;4）使用H2So42-溶液将混合溶液PH值调制5-6;5）将液体稀释5倍;6）加热至35℃-40℃，降解30-60分钟;7)降解后使用70%乙醇沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：高淑春，王秋实，张少骞，
申请(专利权)人：沈阳天贺新材料开发有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21