本发明专利技术公开了一种Ternatusine A在治疗登革病毒感染药物中的应用。Ternatusine A能够有效地抑制登革病毒的增殖，但是对细胞毒性很小，可进一步开发为治疗登革病毒感染引起的疾病的药物，具有广泛的应用前景。本发明专利技术涉及的Ternatusine A在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于登革病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于登革病毒感染的防治显然具有显著的进步。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物TernatusineA的新用途，尤其涉及TernatusineA在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用。
技术介绍
登革病毒(Denguevirus，DENV)能够引起登革热，其通过伊蚊传播，严重感染者出现登革出血热和登革休克综合症，病死率极高。该病毒有四个血清型，血清2型是流行病株。本病主要在东南亚，太平洋地区和美洲的热带和亚热带国家中流行。中国广东省，海南省，广西省曾经有14次不同规模的登革热流行。中国登革热的主要传播媒介是埃及伊蚊和白蚊伊蚊。前者分布于南方沿海地区，后者则在南北地区广泛存在南北地区。有报道显示已经从蚊子体内分离到登革病毒。但是，目前在临床上还没有有效的治疗药物。因此，我们应该高度重视对登革病毒的研究，加强对其的科研力度，做好相关知识和药物的储备，为我国在防控登革病毒感染的方面做出一定的贡献。本专利技术涉及的化合物TernatusineA是一个2013年发表(ZhilaiZhan,etal.,TernatusineA,aNewPyrroleDerivativewithanEpoxyoxepinoRingfromRanunculusternatus.ORGANICLETTERS,2013,15(8):1970–1973.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途具有细胞毒性性(ZhilaiZhan,etal.,TernatusineA,aNewPyrroleDerivativewithanEpoxyoxepinoRingfromRanunculusternatus.ORGANICLETTERS,2013,15(8):1970–1973.)，对于本专利技术涉及的TernatusineA在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于治疗或预防登革病毒感染的活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗或预防登革病毒感染显然具有显著的进步。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种TernatusineA在作为制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用,TernatusineA能够有效地抑制登革病毒的增殖，但是对细胞毒性很小，可进一步开发为治疗登革病毒感染疾病的药物，具有广泛的应用前景。所述化合物TernatusineA,结构如式(Ⅰ)所示：本专利技术涉及的TernatusineA在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于登革病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于登革病毒感染的防治显然具有显著的进步。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：1、TernatusineA对Vero细胞的毒性实验：Vero细胞是DENV的易感细胞。因此，本实验首先检测TernatusineA对Vero细胞的细胞毒性，以不同浓度的TernatusineA作用于Vero细胞，来了解在细胞存活率为90％以上的TernatusineA的最大使用浓度，为后续的TernatusineA对DENV的抑制作用实验提供参考数据。2、TernatusineA对DENV的抑制实验：以不同浓度的TernatusineA作用于已经感染了DENV的Vero细胞，来获得TernatusineA对病毒的抑制效率。本实验中的TernatusineA的使用浓度均在使Vero细胞在90％以上存活率的浓度的范围内，因此，可以排除TernatusineA的浓度过高而对实验数据的分析产生影响。TernatusineA在治疗或预防登革病毒感染药物中的(抑制)应用，其基本过程是：A.TernatusineA对Vero细胞的毒性实验：Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)是DENV的易感细胞。实验中的Vero细胞购买于中国科学院上海生科院细胞资料中心；MTT试剂盒购于碧云天生物技术研究所；胎牛血清(FetalBovineSerum，FBS)购买于美国GIBCO公司；细胞培养板购买于德国Greinerbioone公司；DMEM培养基和MEM培养基购买于美国GIBCO公司。实验步骤如下：1：接种Vero细胞：用含10％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔细胞培养板，每孔接种体积100ul；2：培养Vero细胞：在37℃，5％(v/v)CO2培养条件下，培养2天；3：加入TernatusineA：吸弃每个孔中的DMEM培养基，向各个孔中加入100ul用含10％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基稀释成相应浓度(0uM，0.4uM，1.2uM，3.7uM，11uM，33uM，100uM，300uM)的TernatusineA，对照孔加不加含10％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基100ul；4：呈色：培养48小时后，每孔加MTT溶液10ul，在37℃，5％(v/v)CO2培养条件下继续孵育4小时，然后加入Formazan溶解液，在37℃，5％(v/v)CO2培养条件下继续孵育4小时，直至在普通光学显微镜下观察发现Formazan全部溶解；(1)：测量：在570nm测定吸收值。表1不同浓度的TernatusineA对Vero细胞的毒性实验B.TernatusineA对DENV的抑制实验：以Vero细胞为培养病毒DENV的细胞，MOI为0.1，实验步骤如下：在24孔细胞培养板中接入Vero细胞，24小时后细胞长至单层(细胞覆盖孔底的面积约为80％～90％)，吸出培养基，接入病毒样品200ul，37℃吸附2小时。吸附完成后，吸弃各孔中的病毒液，用DMEM培养基洗去未吸附的病毒。加入用含10％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基稀释的指定浓度(0uM，0.04uM，0.12uM，0.37uM，1.1uM，3.3uM，10.0uM)的TernatusineA，于37℃、5％(v/v)CO2的培养箱中培养42小时，收集各个孔中的上清，做病毒噬斑实验。病毒噬斑实验：在24孔板中接入Vero细胞，24小时后细胞长至单层(细胞覆盖孔底的面积约为80％～90％)，吸弃各孔中的培养基，接入用含3％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基10倍系列稀释的病毒样品200ul，37℃吸附2小时。吸附完成后将各个孔的上清板吸弃，用10％(v/v)FBS的DMEM培养基洗去未吸附的病毒。加入新鲜的45℃预热的半固定培养基[A成分：3％(v/v)FBS，2×MEM培养基，青霉素(美国AMRESCO)和链霉素(美国AMRESCO)终浓度分别为100U/ml，0.1mg/ml；B成分：1％(w/v)的琼脂糖(法国Biowest)。A成分：B成分＝1:1(v/v)]，于37℃、5％(v/v)CO2的培养箱中培养48～72小时。待噬斑形成后用结晶紫(美国AMRESCO)染色(2％(w/v)结晶紫溶于10％(v/v)甲醛)，2小时后用流水冲去结晶紫和琼脂糖，在显微镜下对每孔产生的细胞噬斑，根据噬斑数和稀释倍数计算病毒的滴度(PFU/ml，PFU：plaqueformationunit噬斑形成单位)。PFU＝病毒本文档来自技高网...
【技术保护点】
Ternatusine A在治疗或预防登革病毒感染药物中的应用，所述化合物Ternatusine A结构如式(Ⅰ)所示：
【技术特征摘要】
1.TernatusineA在治疗或预防登革病毒感染药物中的...
【专利技术属性】
技术研发人员：田丽华，
申请(专利权)人：淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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