【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药材加工
，特别是一种有效抑制黄芪愈伤组织褐化的方法。
技术介绍
中药黄芪是我国传统的常用药用植物，具有补气固表、利尿、排脓、敛疮生肌之功效，而蒙古黄芪又是黄芪中的极品。近年来，随着保健药日益畅销，黄芪的用药量越来越大，但由于长期大量、无节制采挖，未注意对自然资源的保护，野生黄芪资源几近枯竭，大面积成规模的野生黄芪资源已十分少见。蒙古黄芪中的有效成分可以通过提取获得，但原料、季节、地域等条件会限制黄酮的提取量，而用植物组织培养技术生产次生代谢物则可以不受地区、季节限制，节省土地和植物资源，降低成本，提高生产效率。因此，利用组织培养技术生产黄芪次生代谢产物在生物学和医药学领域具有重要的研究和应用价值，但采用常规组培技术进行黄芪愈伤组织培养过程中极易出现褐化现象（褐化是指在外植体诱导和分化过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色物质以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象），褐化使外植体、组织细胞、培养基发生褐变，而且对许多酶有抑制作用，影响培养材料的生长与分化，常常造成大量培养材料褐变死亡，导致科研和生产应用的失败。因此，褐化...
【技术保护点】
一种有效抑制黄芪愈伤组织褐化的方法，其特征在于包括如下步骤：A、黄芪种子筛选选取籽粒饱满、无病虫斑和损伤的黄芪种子，使用自来水冲洗30min；B、黄芪种子浸泡烧杯内加入蒸馏水放在60℃水浴中浸种，1h之后倒出水，加入质量浓度2.5%的NaHCO3溶液，在35℃条件下浸泡2h；C、黄芪种子消毒首先加入体积浓度75%的乙醇溶液消毒30‑50s后倒出乙醇溶液，其次采用质量浓度2%的NaClO溶液消毒10‑30min，后倒出NaClO溶液，最后加入质量浓度0.1%氯化汞溶液消毒2‑5min后倒出氯化汞溶液，期间不断轻轻摇晃容器使NaClO溶液和氯化汞溶液与种子充分接触；D、清洗接种...
【技术特征摘要】
1.一种有效抑制黄芪愈伤组织褐化的方法，其特征在于包括如下步骤：A、黄芪种子筛选选取籽粒饱满、无病虫斑和损伤的黄芪种子，使用自来水冲洗30min；B、黄芪种子浸泡烧杯内加入蒸馏水放在60℃水浴中浸种，1h之后倒出水，加入质量浓度2.5%的NaHCO3溶液，在35℃条件下浸泡2h；C、黄芪种子消毒首先加入体积浓度75%的乙醇溶液消毒30-50s后倒出乙醇溶液，其次采用质量浓度2%的NaClO溶液消毒10-30min，后倒出NaClO溶液，最后加入质量浓度0.1%氯化汞溶液消毒2-5min后倒出氯化汞溶液，期间不断轻轻摇晃容器使NaClO溶液和氯化汞溶液与种子充分接触；D、清洗接种培养使用无菌水冲洗种子表面去除消毒液，反复冲洗3～5次，冲洗完成后用滤纸吸干种子表面水分，接种到1/2MS培养基中并放入纸箱内，纸箱外套黑色塑料袋放置于培养室中，培养温度23±2℃，待种子萌发后转至光照条件下培养，光照强度1000～2000lux；E、黄芪愈伤组织诱导培养和增殖培养选取步骤D中培养苗龄7天的无菌苗，截取0.5～1.0 cm的下胚轴为外植体，接种在愈伤组织诱导培养基上培养10～20d，愈伤组织诱导培养基为MS培养基、6-苄胺基嘌呤6-BA质量浓度2.0～3.5 mg/L、萘乙酸NAA 质量浓度0.1～0.5 mg/L、蔗糖质量浓度15～45g/L、琼脂质量浓度4～10g/L，愈伤组织诱导培养基pH值调节为 5.8～6.2进行诱导培养；接着进行愈伤组织快速增殖培养10～15d，增殖培养基为MS培养基、6-苄胺基嘌呤6-BA质量浓度1.5～3.0mg/ L、萘乙酸 NAA质量浓度0.8～2.0mg/L、蔗糖质量浓度15～45g/L、琼脂质量浓度4～8g/L，黄芪愈伤组织快速增殖培养基pH值调节为 5.8～6.2。2.根据权利要求1所述的一种有效抑制黄芪愈伤组织褐化的方法，其特征在于所述步骤E中愈伤组织诱导培养基内加入抗氧化剂柠檬酸、抗坏血酸Vc和聚乙烯吡咯烷酮PVP的一种或几种，抗氧化剂柠檬酸质量浓度0.6～0.8 g/L、抗坏血酸Vc质量浓度0.1～0.3 g/L和聚乙烯吡咯烷酮PVP质量浓度4.0～6.0g/L。3.根据权利要求2所述的一种有效抑制黄芪愈伤组织褐化的方法，其特征在于所述步骤E中愈伤组织诱导培养基内加入抗氧化剂柠檬酸、抗坏血酸Vc或聚乙烯吡咯烷酮PVP，抗氧化...
【专利技术属性】
技术研发人员：王红梅，石有太，陈玉梁，刘新星，李淑洁，王立光，李静雯，
申请(专利权)人：甘肃省农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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