一种红锥外植体的消毒方法技术

本发明专利技术公开了一种红锥外植体的消毒方法以及组织培养繁殖方法。当所述外植体为种子时，消毒方法为：沸水浸泡去掉种皮后，利用氯化汞溶液浸泡消毒；当所述外植体为茎段时，消毒方法为：依次用酒精浸泡、氯化汞溶液浸泡进行消毒处理。所述组织培养繁殖方法为：选择生长健壮、无病虫害、结实率高的红锥植株，采集种子或茎段，利用上述消毒方法对种子或茎段进行消毒后接种于改良MS培养基进行组织培养。本发明专利技术建立了红锥组培外植体消毒体系，为进一步进行红锥外植体诱导、增殖、生根等系列研究提供前提保障，为实现良种规模化育苗，进而实现产业化开发，有着重要研究和生产实际意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
更具体地，涉及一种红锥外植体消毒的有效方法。
技术介绍
红锥(Castanopsis hystrix A.DC)又名红黎、赤黎、黎木、刺栲、红栲、红掾栲、红柯，属壳斗科栲属常绿乔木，树体通直，树高可达30米，胸径达1米以上，它是我国南亚热带和亚热带植被常绿阔叶林的优势组成树种，属华南地区重要的乡土阔叶珍贵用材和高效多用途生态公益林树种。红锥天然分布于东经95o20′～118o0′，北纬18o30′～25o0′，主产地集中于广东、广西、福建南部，其周边分布在云南南部、贵州东南部以及湖南、江西、福建、海南等省的南部，边缘分布达西藏的墨脱县。红锥具有生长快、材质优、适应广、效益高等优良特性。其主干通直、材质坚硬、呈红色、耐腐蚀性强、不开裂、不变形、容易加工，是优质珍贵用材，可供建筑、造船、高档家俱、木制地板、军工用品、体育器材等用。种子富含淀粉，可炒食、饲料和酿酒，种实、壳斗均富含单宁，可提制栲胶。红锥作为华南地区地带性植被顶极群落的重要组成部分，既具有良好的生态稳定性和优异的生态效益，又是十分优良的大径级用材树种。它具有旺盛的生长期和良好的生长速度，一次造林可采伐10次以上，经营百年经久不衰，且枝叶浓密，混生性能好，可作为用材和水源涵养林进行纯林种植，亦可为残次林改造、生态公益林改造的混交造林进行推广应用。因此，该树种已成为华南地区十分重要的乡土阔叶树种，每年用红锥营建的水源涵养林、低效生态公益林改造以及纯林面积超过3500公顷。目前，在广东、广西、福建等省区已营造各种人工林3万多公顷。红锥的主要繁殖方法为种子和扦插繁殖，人工造林是以种子育苗造林为主，但因红锥母树林结实的大小年现象十分明显，结实小年经常采不到种子，资源有限的条件下不能满足造林所需求。组织培养繁殖方法，不仅可以加速良种繁育，而且在离体培养的条件下个体小、群体大，实验条件易于控制，不受时间和季节因素的限制，这能大大提高繁殖系数以及工作效率，并能在一定程度上保持母本的优良性状。因此，组织培养繁殖方法在红锥的繁殖方面具有很好的优势。但是，在红锥组织培养的过程中，常出现不同程度的外植体消毒不彻底、内源菌污染问题，污染问题通常会造成很大的损失。因此，采取有效的防控措施，选择合适的外植体消毒方法来降低污染发生的几率，是组织培养成功的重要保障。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服上述现有红椎组织培养技术中的缺陷和不足，提供一种红锥外植体消毒的有效方法，具体是红锥不同外植体消毒的有效方法，红锥外植体分为种子和茎段两种外植体，不同的外植体采集、消毒方法不同。本专利技术的目的是提供一种红锥外植体的消毒方法。本专利技术的另一目的是提供一种红锥组织培养繁殖方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种红锥外植体的消毒方法，当所述外植体为种子时，消毒方法为：沸水浸泡去掉种皮后，利用氯化汞溶液浸泡消毒；当所述外植体为茎段时，消毒方法为：依次用酒精浸泡、氯化汞溶液浸泡进行消毒处理。优选地，当所述外植体为种子时，消毒方法为：100℃水浸泡8～12min，无菌条件下去除种皮后，先用质量体积百分比浓度0.05～0.2％氯化汞溶液浸泡3～8min，再用无菌水反复冲洗3～5次；优选地，当所述外植体为茎段时，消毒方法为：无菌条件下用体积百分比浓度70～75％的酒精浸泡10～30s，倒掉酒精后用无菌水冲洗3～5次，然后加入质量体积百分比浓度0.1～0.3％氯化汞溶液浸泡5～10min，浸泡期间不断摇动，倒掉氯化汞溶液后再用无菌水冲洗5～6次。更优选地，当所述外植体为种子时，所述水浸泡为100℃水浸泡10min。优选地，当所述外植体为种子时，0.1％氯化汞浸泡5min。更优选地，当所述外植体为种子时，所述无菌水反复冲洗3次。优选地，当所述外植体为茎段时，所述酒精体积百分比浓度为75％，酒精浸泡30s。优选地，当所述外植体为茎段时，0.1％氯化汞浸泡5min或0.3％氯化汞浸泡10min(最优选为0.1％氯化汞浸泡5min)。另外，优选地，当所述外植体为茎段时，需要在无菌条件下，茎段剪成1～2cm，每个茎段含有1个芽点，75％乙醇处理30s后用无菌水冲洗2～3次，再利用质量体积百分比浓度0.1％氯化汞浸泡5min或0.3％氯化汞浸泡10min。更优选地，在消毒处理之前，种子还需要用自来水冲洗数次，洗洁精浸泡15～25min(优选20min)后，流水冲洗15～25min(优选20min)；茎段还需要用自来水冲洗数次后，用洗衣粉或消毒粉浸泡15～25min(优选20min)，流水冲洗15～25min(优选20min)。优选地，所述消毒粉为有机氯含量为18～21％的消毒粉。如市购的君鸿消毒粉。一种红锥组织培养繁殖方法，包括如下步骤：S1.选择生长健壮、无病虫害、结实率高的红锥植株；S2.采集种子或茎段；S3.采用上述消毒方法对种子或茎段进行消毒；S4.无菌条件下，消毒后的种子或茎段接种于改良MS培养基进行组织培养，所述改良MS培养基配方为：1.0mg/L 6-BA、0.5mg/L IAA、1.0mg/L VH、1.0mg/L VC、1.0g/L PVP、28g/L蔗糖、5.8g/L卡拉胶，PH 5.8。其中，优选地，步骤S4所述培养的温度为23～27℃(优选为25℃)，环境湿度保持在65～75％(优选为70％)，光照强度1500～2000lx，光照12h/d。优选地，步骤S2是在12月初至12月底期间采集种子或采集环割口萌发出的幼态萌芽条茎段。优选地，是在果实总苞和刺由青色变褐色时采集种子，茎段是在距离地面30～50cm基部进行环割。即最优选地，种子完全成熟时12月初至12月底期间采集，当果实总苞和刺由青色变褐色时采种。茎段采集分为两个步骤：(1)外植体幼化：红锥生长旺季，距离地面30～50cm基部进行环割，环割时，使环割割口形成一个闭合环，环割宽度为2～3cm，环割深度为木质部(割口内刮干净韧皮部及形成层)。环割后，铲除母株周围杂灌，对母株旁边的植株进行修枝或砍伐，使得环割母株保持充足光照。(2)外植体采集：45d后采集环割口萌发出的幼态萌芽条，用枝剪将萌芽条剪下。剪下的萌芽条放入密封袋中，贴上标签，立即放入冰盒，带回实验室备用。另外，优选地，种子外植体采集自2.0代种子园优树，母本质量性状优良，后代变异小。另外，上述红锥外植体的消毒方法以及红锥组织培养繁殖方法在红锥组织培养繁殖方面的应用，也在本专利技术的保护范围之内。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的红锥外植体消毒方法可建立红锥组培外植体消毒体系，为进一步进行红锥外植体诱导、增殖、生根等系列研究提供前提保障，为实现良种规模化育苗，进而实现产业化开发，有着重要研究和生产实际意义。本专利技术的红锥组织培养繁殖方法，以上述消毒方法对外植体进行消毒，且种子外植体来源于2.0代种子园优树上的种子，母本质量性状优良，后代变异小；茎段外植体来源于优株环割、基部促萌、幼化的外植体，芽幼化效果更好，更有利于诱导成功，大幅度提高了诱导率，诱导率达55％以上。而且，从主干取芽，充分利用了位置效应，能更好地保持优树的优良特性，如优树的生长特性、树干通直性、木材质量等。附图说明图1为种子消毒后直接接种图。图2为种胚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红锥外植体的消毒方法，其特征在于，当所述外植体为种子时，消毒方法为：沸水浸泡去掉种皮后，利用氯化汞溶液浸泡消毒；当所述外植体为茎段时，消毒方法为：依次用酒精浸泡、氯化汞溶液浸泡进行消毒处理。

【技术特征摘要】
1.一种红锥外植体的消毒方法，其特征在于，当所述外植体为种子时，消毒方法为：沸水浸泡去掉种皮后，利用氯化汞溶液浸泡消毒；当所述外植体为茎段时，消毒方法为：依次用酒精浸泡、氯化汞溶液浸泡进行消毒处理。2.根据权利要求1所述红锥外植体的消毒方法，其特征在于，当所述外植体为种子时，消毒方法为：100℃水浸泡8～12min，无菌条件下去除种皮后，先用质量体积百分比浓度0.05～0.2%氯化汞溶液浸泡3～8min，再用无菌水反复冲洗3～5次；当所述外植体为茎段时，消毒方法为：无菌条件下用体积百分比浓度70～75%的酒精浸泡10～30s，倒掉酒精后用无菌水冲洗2～5次，然后加入质量体积百分比浓度0.1～0.3%氯化汞溶液浸泡5～10min，浸泡期间不断摇动，倒掉氯化汞溶液后再用无菌水冲洗5～6次。3.根据权利要求2所述红锥外植体的消毒方法，其特征在于，当所述外植体为种子时，是质量体积百分比浓度0.1%氯化汞浸泡5min；当所述外植体为茎段时，所述酒精体积百分比浓度为75%，酒精浸泡30s。4.根据权利要求2所述红锥外植体的消毒方法，其特征在于，当所述外植体为茎段时，在无菌条件下，茎段剪成1～2cm，每个茎段含有1个芽点，75%乙醇处理30s后用无菌水冲洗2～3次，质量体积百分比浓度0.1%氯化汞浸泡5min或0.3%氯化汞浸泡10min。5.根据权利要求2所述红锥外植体的消毒方法，其特征在于，在消毒处理之前，种子还需...

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫华，潘文，张方秋，廖焕琴，
申请(专利权)人：广东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44