基于目标物诱导的邻近结合构建荧光信号扩增生物传感平台检测腺苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种双功能探针，包含：用于特异性识别腺苷的两段腺苷适体；用于为切刻酶提供酶切位点；用于为切刻/聚合反应提供模板的聚合/切刻模板和用于连接所述的两段腺苷适体的辅助碱基；本发明专利技术还公开了一种检测腺苷的试剂以及检测方法。可以实现免标记高灵敏检测腺苷，方法的检测限为8.4×10‑8mol·L‑1，达到人尿样中腺苷含量检测要求，具有检测人尿样中腺苷含量的潜力和潜在的实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种以目标物诱导的邻近结合为基础的荧光信号扩增生物传感平台用于免标记灵敏检测腺苷的方法。
技术介绍
腺苷(AD)是一种内源性核苷，能够调节中枢神经系统、周围神经系统和免疫系统的正常运行，是美国食品药品管理局(FDA)批准的治疗阵发性室上性心动过速(PSVT)药物。此外，腺苷的表达水平与肿瘤的发生、发展阶段具有密切关系，是肿瘤的潜在生物标志物。因此，定量检测腺苷在疾病的早期诊断和临床治疗方面具有重要意义。传统的腺苷检测方法，如放射性免疫法、毛细管电泳法和高效液相色谱法，已经用于腺苷的检测。然而，这些检测方法存在不同程度的局限性，例如，放射性免疫法须进行放射性标记，危害健康、污染环境；毛细管电泳法需要复杂的样品预处理，且检测结果重现性差、灵敏度低；高效液相色谱法需要大量样品。因此，需要构建新的简便、安全、高灵敏度和重现性好的腺苷定量检测策略。其中，基于适体的荧光法成为一种有效的腺苷检测方法。目前基于适体与腺苷的选择性结合来检测腺苷的相关研究主要有：Liu课题组和Wang课题组分别设计了阻滞型探针，通过腺苷取代下与适体结合的阻滞链，引发扩增反应得到可检测的荧光信号，进行腺苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双功能探针，其特征在于，包含：两段腺苷适体，所述腺苷适体用于特异性识别腺苷；切刻识别位点，所述切刻识别位点用于为切刻酶提供酶切位点；聚合/切刻模板，所述聚合/切刻模板用于为切刻/聚合反应提供模板；辅助碱基，所述辅助碱基用于连接所述的两段腺苷适体。

【技术特征摘要】
1.一种双功能探针，其特征在于，包含：两段腺苷适体，所述腺苷适体用于特异性识别腺苷；切刻识别位点，所述切刻识别位点用于为切刻酶提供酶切位点；聚合/切刻模板，所述聚合/切刻模板用于为切刻/聚合反应提供模板；辅助碱基，所述辅助碱基用于连接所述的两段腺苷适体。2.如权利要求1所述的双功能探针，其特征在于，所述双功能探针的核苷酸序列为以下之一：(1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；或(2)与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列具有90％以上同源性且功能相同的核苷酸序列。3.权利要求1或2所述的双功能探针在检测腺苷中的应用。4.一种检测腺苷的试剂，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的双功能探针、聚合酶、连接酶、切刻酶、锁式探针(pad-probe)和ThT染料；所述锁式探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.如权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述切刻酶为Nt.BbvCI切刻酶。6.如权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述聚合酶为KF聚合酶和Phi29聚合酶；所述连接酶为T4DNA连接酶。7.一种检测腺苷的方法，其特征在于，步骤如下：(1)制备不同浓度的腺苷，加入权利要求1或2所述的双功能探针，恒温孵育；(2)向步骤(1)反应后的溶液中加入聚合酶和切刻酶，构建聚合/切刻反应体系，进行聚合/切刻反应，产生引物序列；(3)向步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜玮，王磊，魏海平，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37