通过用芳基阴离子处理来降低蛋白质制剂的聚集物含量的方法技术

降低具有靶蛋白质的制剂中的聚集物含量的方法包括使所述制剂与芳基阴离子接触以形成混合物，和使所述混合物与至少一种正电性固体接触以去除过量的芳基阴离子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本文所公开的实施方案涉及用于增强包括抗体的蛋白质的纯化的方法。它们特别涉及用于降低聚集物的水平的方法，并且可以与细胞培养收获物澄清方法组合。它们进一步涉及这些能力与其它纯化方法的整合以实现期望的蛋白质纯度水平。聚集物去除是蛋白质纯化的一个重要方面。已证明低浓度的黄色荧光杂环染料依沙吖啶降低抗体制剂的聚集物含量，并且这一结果可能是染色质去除的结果(Gan等，J.Chromatography A 1291(2013)33-40)。依沙吖啶具有作为蛋白质沉淀剂的悠久历史。芳基阴离子染料甲基蓝被用于组织染色并且已被用于介导微生物燃料电池中的电子转移。甲基蓝还以名称棉蓝、甲蓝(Helvetia Blue)和酸性蓝93为人所知。该试剂尚未被用于蛋白质分级分离领域中。
技术实现思路
在一些方面，本文所公开的实施方案涉及降低包含靶蛋白质的制剂中的聚集物含量的方法，所述方法包括使所述制剂与芳基阴离子接触以形成混合物和使所述混合物与至少一种正电性固体接触以去除过量的芳基阴离子。具体实施方式本文所公开的实施方案提供通过用芳基阴离子处理制剂来降低含有期望蛋白质的样品如蛋白质制剂中的聚集物的量的方法。在某些实施方案中，利用低水平的芳基阴离子来实现复合物和/或聚集物的降低。在某些实施方案中，以升高的电导率值(盐浓度)处理所述样品。在某些实施方案中，随后使处理的样品暴露于带有化学部分的固体材料，所述化学部分从所述蛋白质制剂选择性地去除芳基阴离子和聚集物。提供用于纯化蛋白质的方法和试剂盒。在一些实施方案中，所公开的方法提供通过使此类期望的蛋白质与一种或多种芳基阴离子物种接触而从抗体或其它蛋白质制剂降低聚集物。在某些实施方案中，所公开的方法可以在所谓的生理条件到为此类条件最高达3倍或更高倍的电导率值的电导率水平范围下实施。此类升高的电导率水平可以允许将所述方法应用到酸性蛋白质，而不会有它们在处理期间发生沉淀的风险，且由此增加可以应用所公开的方法的期望蛋白质物种的多样性。在某些实施方案中，所公开的方法可以利用低浓度如0.1％到1.0％的芳基阴离子来实施。在某些实施方案中，所公开的方法提供使所述处理的蛋白质制剂与增强所述处理降低聚集物含量的总体能力的固体材料接触，所述降低聚集物含量通常与降低宿主蛋白质污染并行；并且提供去除过量芳基阴离子的额外优点。在某些实施方案中，芳基阴离子是甲基蓝。在某些实施方案中，所公开的方法提供降低相比于期望蛋白质具有高分子量的聚集物如均质聚集物的水平，并且还提供降低流体动力学大小仅适度大于期望蛋白质的聚集物如异质聚集物的水平。在某些实施方案中，聚集物包括期望蛋白质和污染物的均质聚集物并且在某些此类实施方案中，所述污染物是核酸、核苷酸、内毒素、金属离子、蛋白质、脂质或细胞培养基组分。在某些实施方案中，基本上消除了期望蛋白质的均质聚集物的存在。在某些实施方案中，基本上消除了期望蛋白质和污染物的均质聚集物的存在。在某些实施方案中，基本上消除了不包含期望蛋白质的均质聚集物和异质聚集物的存在。在某些实施方案中，所公开的方法另外提供污染物如DNA、内毒素和病毒水平的降低连同聚集物的降低。在某些实施方案中，所公开的方法通过另外包含除芳基阴离子自身以外的抗病毒剂来实施。在某些实施方案中，目标蛋白质物种(例如，待纯化的期望蛋白质)是重组来源的，并且所述蛋白质制剂可以包括含细胞的细胞培养收获物、细胞培养物上清液、澄清的细胞培养物上清液、来自色谱柱的洗脱物或从前一纯化阶段获得的含蛋白质的溶液。在某些实施方案中，所述蛋白质制剂含有抗体，并且在某些此类实施方案中，所述抗体是IgG、IgM或其片段形式，或抗体或抗体片段的融合蛋白质，如Fc-融合蛋白质。在某些实施方案中，所述期望蛋白质可以是凝血蛋白质，如因子VIII。在某些实施方案中，所述期望蛋白质可以是肽激素，如人生长激素。在某些实施方案中，实施所公开的方法以使得样品的电导率处于足够高的水平以基本上避免期望蛋白质从所述样品中沉淀出来。可以根据本领域内已知的方法通过添加盐或稀释剂来调节电导率。在某些实施方案中，所述电导率比被确定为避免期望蛋白质的显著沉淀所需的水平大5mS/cm、10mS/cm、15mS/cm或20mS/cm。在某些实施方案中，所述电导率在通常被认为对应于生理电导率的范围如12-17mS/cm内。在某些实施方案中，所述电导率大于20mS/cm、25mS/cm、30mS/cm、35mS/cm、40mS/cm、45ms/cm或大于45mS/cm。所述方法在升高的电导率下去除重要的污染物亚群的能力代表了所公开的方法的令人惊讶的特征之一，因为已知这些体系中的电荷相互作用在升高的电导率下会降低。在某些实施方案中，操作pH值可以是中性到微碱性的，并且仍然具有用于去除染色质的足够效力。在一些实施方案中，操作pH值可以是酸性的，如包括6或5或4的值，并且因此更低的pH值可以更有效地用于去除非组蛋白蛋白质。在此类实施方案中，它也可以用于降低电导率。在某些实施方案中，芳基阴离子是甲基蓝。在相关的实施方案中，芳阴离子可以是除甲基蓝以外的芳基阴离子。在某些实施方案中，所述芳基阴离子以足以促进聚集物的期望降低程度的基本上最低浓度被提供。在某些实施方案中，所述芳基阴离子的浓度可以小于(以重量/体积计)5％、1％、0.5％、0.1％、0.05％。在某些实施方案中，所述芳基阴离子以0.1-1.0％、或0.2-0.8％、或0.04-0.06％的浓度被提供。在某些实施方案中，所公开的方法可以在4-7、或4.5-6.0、或5.0到5.5、或5.1到5.3、或5.15到5.25、或中间值的操作pH值下实施。在某些实施方案中，使所述样品另外与抗病毒剂如磷酸三(正丁基)酯接触。此类抗病毒剂可以以小于大约1％(w/v)、小于大约0.1％(w/v)、或小于大约0.01％(w/v)或小于大约0.001％的量存在。在某些实施方案中，所述方法另外包括使所述样品与酰脲接触的步骤，所述酰脲的量足以使所述酰脲不溶于所述样品中。然后可以将含有期望蛋白质的上清液与包含沉淀污染物的剩余样品分离。在某些此类实施方案中，在使所述样品与所述芳基阴离子接触的步骤之前供应所述酰脲，在其它实施方案中，将所述酰脲基本上与使所述样品与所述芳基阴离子接触的步骤同时供应，并且在其它实施方案中，在使所述样品与所述芳基阴离子接触的步骤之后供应所述酰脲。在某些此类实施方案中，酰脲可以是以下中的任一种：尿酸、乙内酰脲(咪唑烷-2,4-二酮)、尿囊素(2,5-二氧代-4-咪唑烷基)脲、尿囊素氯羟铝、尿囊素铝、hemocane、脲基乙内酰脲、5-脲基乙内酰脲、乙醛酰基酰脲、乙醛酸二酰脲、2,5-二氧代-4-咪唑烷基脲(尿囊素)、咪唑烷基脲、二咪唑烷基脲和嘌呤。在某些实施方案中，酰脲是尿囊素，并且在一些这样的情况下，尿囊素以大于0.56％(w/v)、1％、1.5％、2％或更大的浓度存在。在某些实施方案中，酰脲是尿酸，并且在一些这样的情况下，尿酸以大于0.0025％(w/v)、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、1％或更大的浓度存在。在某些实施方案中，所述方法另外包括使所述样品与一定量的酰脲接触的步骤，在所述量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降低包含靶蛋白质的制剂中的聚集物含量的方法，所述方法包括：使所述制剂与芳基阴离子接触以形成混合物；和使所述混合物与至少一种正电性固体接触以去除过量的芳基阴离子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种降低包含靶蛋白质的制剂中的聚集物含量的方法，所述方法包括：使所述制剂与芳基阴离子接触以形成混合物；和使所述混合物与至少一种正电性固体接触以去除过量的芳基阴离子。2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述混合物同时或依序与至少一种额外的正电性固体接触。3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述混合物与过饱和的尿囊素接触。4.根据权利要求3所述的方法，其中尿囊素以选自由以下组成的组的浓度范围存在：(a)约0.6％到约50％；(b)约1％到约10％；和(c)约1％到约2％。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述芳基阴离子是甲基蓝。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述芳基阴离子以选自由以下组成的组的浓度范围存在：(a)约0.1％到约0.5％；(b)约0.02％到约0.4％；和(c)约0.25％到约0.3％。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中操作电导率处于选自由以下组成的组的范围：(a)约0.1mS/cm到约50mS/cm；(b)约1mS/cm到约30mS/cm；和...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·斯坦利·加尼翁，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG