一套快速检测苹果枝条内轮纹病菌侵染量的简易方法技术

本发明专利技术公开了一套快速检测苹果枝条内轮纹病菌侵染量的简易方法，涉及植物体内病原菌侵染量的快速检测技术。本发明专利技术适用于检测基部直径不超过3厘米活体苹果枝条的带菌量。具体方法为在待检测枝条的基部环剥皮层，宽度2~10毫米；用有效成份含量60g/L~100g/L的百草枯药液浸泡吸水纸、脱脂棉、棉线或布条，取出沥干后，缠绕在环剥口处，用胶带或塑料膜包严；从处理后的第3天开始，检查记录处理枝条上发生病变和未发生病变的皮孔数量，以及坏死皮层上是否产生分生孢子器。本发明专利技术的优点在于：在1~2周内检测明确苹果枝条是否潜带轮纹病菌，以及潜带病原菌的数量；操作方法简便，检测结果可靠；解决了常规调查无法检测枝干内轮纹病菌侵染量的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病害检测领域，涉及植物体内病原菌侵染量的快速检测技术。
技术介绍
苹果轮纹病是苹果上的重要病害，主要为害枝干和果实，是中国苹果上的重要病害，环渤海湾和黄河故道产区的受害尤为严重。2008年，对山东等7个苹果主产省，88个果园枝干轮纹病发生情况调查表明，苹果枝干轮纹病的总体发病率达77.6%。苹果轮纹病是由子囊菌亚门葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea侵染所致，病菌主要从皮孔、气孔、伤口等部位侵染枝条，形成病瘤、马鞍状病斑和干腐病斑。已有研究发现，轮纹病菌侵染枝条后，只有少数侵染病菌在侵染当年诱发病瘤，引起肉眼可见的症状，绝大多数病菌或者在以后的生长季节陆续发病，或者长期潜伏在皮孔组织内，当枝条受干旱胁迫，或者枝条极度衰弱时，潜伏病菌在短期内诱发马鞍状病斑或干腐病斑。人工接种试验结果表明，8月底之前接种的枝条，有少量病菌诱发可见症状；8月份之后接种的枝条，从下一个生长季节开始诱发可见显症。由于苹果轮纹病的侵染存在潜伏侵染现象，研究者难以通过接种试验了解病原菌的侵染量和药剂的防治效果，也难以了解树体上的确切带菌量，从而制约了轮纹病的流行学与防控技术研究与发展。
技术实现思路
针对苹果轮纹病研究和监测中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一套快速检测苹果枝条内轮纹病菌侵染量简易方法，为苹果轮纹病流行学和防治技术研究，以及病害监测提供一套简易、快速的检测技术与方法。本专利技术采用如下技术原理：已侵入皮层内部的轮纹病菌，在苹果枝条衰退和死亡的过程中或受到水份胁迫后，迅速生长扩展，并杀死寄主细胞，形成红褐色圆形干腐病斑，引起肉眼可见的病变。根据枝条上出现红褐色干腐病斑的数量，可以判断侵入皮层内部轮纹病菌的数量。潜伏在皮孔内，还没有侵入皮层内部的轮纹病菌，在枝条皮层坏死后能坏死皮层内迅速扩展，利用枝条坏死皮层提供的营养生长繁殖，并产生外观可见的分生孢子器，依据枝条上能否产生分生孢子器，可以判断枝条上是否有潜伏的轮纹病菌。本专利技术采用的技术方案如下：在检查枝条的基部环剥表皮形成环剥口，用一定浓度的百草枯（除草剂）药液涂布环剥口，使除草剂通过伤口渗入木质部，并使枝条缓慢枯死。在枝条衰退死亡过程中，检查枝条皮孔处形成的红褐色干腐病斑的数量，或检查枯死枝条上有无轮纹病菌分生孢子器的形成，依此推断检测枝条是否被轮纹病菌侵染，以及病原菌的侵染量。具体施实施方案如下：（1）选取枝条：选取茎基部直径不超过3厘米的活体枝条作为处理枝条；（2）剥取皮层：在检测枝段的下方，距分枝处至少5厘米，用小刀环剥皮层，露出木质部，宽度2~10毫米；（3）处理枝条：用除草剂百草枯配制成有效成份含量为50g/L~200g/L的百草枯水溶液；取吸水纸、脱脂棉、棉线或布条等在药液浸泡3~5分钟，取出沥干后，均匀的缠绕或包裹在环剥口上，用胶带或塑料膜包严，防止药液挥发；处理直径超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量100g/L药液，处理直径不超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量为60g/L药液；（4）病害调查：处理枝条在1~2周内缓慢萎蔫枯死；从处理后的第3天开始，检查记录萎蔫枝条上形成红褐色圆形干腐病斑的皮孔数量和未发生病变的皮孔数量，用记号笔标记发病皮孔，直到病斑连片不能计数为止；病变皮孔的数量或百分率，代表了轮纹病菌在该枝条上的侵染量或受侵染皮孔的百分率；（5）补充调查：如果枝条上没有出现病变的皮孔，在枝条处理后的2~3周内，检查枝条上是否有轮纹病菌形成的分生孢子器；处理枝条上若产生轮纹病菌的分生孢子器，表明枝条被轮纹病菌侵染，但病菌还没有深入到皮孔组织内。注意问题：百草枯的毒性大，对表皮组织有强烈的破坏作用，施药时必须戴防护手套，且注意用药安全；用百草枯药液处理枝条时，不能污染树体的其他部位，或其他作物，防止产生药害；苹果枝条用百草枯处理后枯死，不能再生长。本专利技术的优点在于：应用本项专利技术能在1~3周内调查明确苹果枝条是否潜带轮纹病菌，以及潜带病原菌的数量，操作方法简便，检测结果可靠；所使用除草剂为市场常规销售的各种剂型和各种含量用于除草的百草枯药剂。应用案例一，不同浓度的百草枯水溶液对枝条的影响：2014年7月上旬，用每毫升含105个轮纹病菌的分生孢子悬浮液接种基部直径0.3~1.0cm厘米的当年生富士苹果的枝条，接种后套塑料袋保湿24小时。接种7天后，用小刀环剥接种枝条的基部，宽度为2~10毫米；用200g/L百草枯水剂（市售除草剂）配制百草枯含量为20g/L、6%、10%和20%水溶液，取长度为约10cm的粗棉线，在百草枯药剂中浸泡3~5分钟后，取出沥干，缠绕枝条的环剥口处，用塑料膜包严，防止药液挥发。每个浓度的药液处理10个枝条，以清水为对照。药液处理后第5天，检查枝条上出现明显萎蔫症状的叶片、皮层出现枯死斑的枝条数、以及枯死斑面积占整个枝条面积的百分率。试验结果：浓度超过60g/L的百草枯水溶液处理的枝条，从施药后第3天开始叶片出现明显的萎蔫症状，从第4天开始皮层开始坏死，第5天调查数据如表1所示。调查数据表明，浓度超过60g/L百草枯药液处理的枝条，药剂处理后第5天绝大部分叶片萎蔫枯死，产生明显坏死斑；用20g/L的百草枯药液处理的枝条，5天后没明没有发现明显的变化；实验中还发现200g/L的百草枯溶液由于浓度高，对整株苹果树损害很大，甚至可导致整棵树的死亡，在实际调查中不建议使用；实际调查中建议使用浓度60g/L~ 100g/L。表1：苹果一年生枝条（10个枝条）用不同浓度百草枯药液处理后第5天叶片萎蔫和枝条皮层坏死情况。应用案例二：接种不同时间后病原菌的检出率：2014年7月底，用每毫升含105个轮纹病菌的分生孢子悬浮液接种直径在0.3~1.0cm的当年生富士苹果的枝条，接种后套塑料袋保湿24小时；将所接种枝条标记后平均分4组，分别在接种后7天、14天、21天和28天后进行环剥，并用百草枯处理，每个时间处理24个枝条。从百草枯处理后的第5天开始检查记录有坏死皮层的枝条数和有轮纹病菌分生孢子器的枝条数。试验结果：所有接种枝条在接种后的10天内，皮层上都产生了坏死斑；坏死皮层从第7天开始形成分生孢子器，到第21天全部接种枝条都产生了分生孢子器，对枝条带菌的检出率达到100%，调查数据见表2。表2：用轮纹病菌分生孢子接种的苹果枝条，培养不同时间后用百草枯处理后枝条上皮层坏死和产生分生孢子器的百分率。应用案例三，深入皮层内轮纹病菌的检测：2013年8月上旬，用每毫升含105个轮纹病菌的分生孢子悬浮液接种当年生富士苹果的枝条，接种后套塑料袋保湿24小时。2014年5月中旬，用小刀环剥接种枝条基部的表皮，用200g/L百草枯水剂（市售除草剂）配制成有效成份含量为100g/L药液；将脱脂棉在药液中浸泡5分钟，取出沥干，均匀地缠绕在环剥口处，并用保鲜膜包严。试验结果：接种枝条用百草枯处理后，从第3天开始，以皮孔为中心形成大量直径1~2毫米的红褐色圆形干腐病斑。干腐病斑以皮孔为中心，红褐色，圆形，与皮层的坏死有明显的区别。处理5天后部分病斑扩展超过5毫米，并开始连片；处理10天后大部分病菌连结为一片；处理15天后病斑表皮下产生黑色小点，即轮纹病菌的生孢子器。附图说明：图1为接种枝条经百草枯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一套快速检测苹果枝条内轮纹病菌侵染量的简易方法；其特征在于：适合检测基部直径不超过3厘米苹果活体枝条内轮纹病菌的侵染量，具体检测过程包括环剥、百草枯处理、检查记录三个步骤；所述环剥是在待检测枝条的基部，离分枝处至少5厘米，用小刀或环剥刀将皮层剥除，露出木质部，环剥口宽度为2~10毫米；所述百草枯处理是用除草剂百草枯配制成有效成份含量60g/L~100g/L的百草枯药液；取吸水纸、脱脂棉、棉线或布条在药液中浸泡3~5分钟，取出沥干后，均匀的缠绕在环剥口处，并用胶带或塑料膜包扎；处理直径超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量为60g/L药液，处理直径不超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量为100g/L的药液；所述调查记录病斑是从处理后的第3天开始，检查记录处理枝条上已形成的红褐色圆形干腐病斑的皮孔数量和未发生病变的皮孔数量，用记号笔标记病变皮孔，直到病斑连片不能计数为止；病变皮孔的数量或百分率，代表了轮纹病菌侵染量，或侵染皮孔的百分率；如果皮孔没有出现病变，而只是单纯的坏死，需在药剂处理后的2~3周内，检查枝条上是否有轮纹病菌形成的分生孢子器，处理枝条上若出现轮纹病菌的形成的分生孢子器，表明枝条被轮纹病菌侵染，但病菌还没有进入枝条皮层的活体组织。...

【技术特征摘要】
1.一套快速检测苹果枝条内轮纹病菌侵染量的简易方法；其特征在于：适合检测基部直径不超过3厘米苹果活体枝条内轮纹病菌的侵染量，具体检测过程包括环剥、百草枯处理、检查记录三个步骤；所述环剥是在待检测枝条的基部，离分枝处至少5厘米，用小刀或环剥刀将皮层剥除，露出木质部，环剥口宽度为2~10毫米；所述百草枯处理是用除草剂百草枯配制成有效成份含量60g/L~100g/L的百草枯药液；取吸水纸、脱脂棉、棉线或布条在药液中浸泡3~5分钟，取出沥干后，均匀的缠绕在环剥口处，并用胶带或塑料膜包扎；处理直径超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量为60g/L药液，处理直径不超过0.5厘米枝条的常用有效成份含量为100g/L的药液；所述调查记录病斑是从处理后的第3天开始，检查记录处理枝条上已形成的红褐色圆形干腐...

【专利技术属性】
技术研发人员：李保华，王玉然，董向丽，
申请(专利权)人：李保华，青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37