一种油茶原生质体的制备和纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种油茶原生质体的制备和纯化方法，属于植物原生质体技术领域。本发明专利技术的油茶原生质体的制备和纯化方法与酶法制备原生质体相比，本发明专利技术制备的原生质体不会受酶等化学试剂的伤害，所需时间短，费用低。本发明专利技术的油茶原生质体的制备和纯化方法能够为油茶原生质体的培养、融合和基因转化等原生质体下游实验提供大量材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物原生质体
，尤其涉及一种油茶原生质体的制备和纯化方法。
技术介绍
油茶属常绿小乔木。因其种子可榨油(茶油)供食用，故名。茶油色清味香，营养丰富，耐贮藏，是优质食用油；也可作为润滑油、防锈油用于工业。茶饼既是农药，又是肥料，可提高农田蓄水能力和防治稻田害虫。果皮是提制栲胶的原料。油茶喜温暖，怕寒冷，要求年平均气温16～18℃，花期平均气温为12～13℃。突然的低温或晚霜会造成落花、落果。要求有较充足的阳光，否则只长枝叶，结果少，含油率低。要求水分充足，年降水量一般在1000毫米以上，但花期连续降雨，影响授粉。要求在坡度和缓、侵蚀作用弱的地方栽植，对土壤要求不甚严格，一般适宜土层深厚的酸性土，而不适于石块多和土质坚硬的地方。原生质体(protoplast):脱去细胞壁的细胞叫原生质体，是一生物工程学的概念。原生质体一词来源于原生质(protoplasm)。原生质指组成细胞的有生命物质的总称，是物质的概念。原生质体是组成细胞的一个形态结构单位。在细胞学历史上，\细胞\(cell)一词是由Hooke提出的，意为\小室\。后来发现了原生质，对细胞的认识与Hooke时期本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种油茶原生质体的制备和纯化方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：A制备方法：A1从室外切取油茶一年生枝条，带回水培1‑2天；A2取6片成熟叶，用刀片切去叶片的边缘和叶片主脉，并在叶片每隔0.5‑1cm的位置切上一些缝隙，但不要切断叶片；A3将带有缝隙的叶块浸入蔗糖溶液中进行质壁分离0.5‑1h，期间用镊子将上浮叶块压入蔗糖溶液中；A4取出叶块，用刀片与叶块成45°把叶块切成细长条，越细越好；A5将细叶条转移到盛有叶条洗涤液的容器中，放置30s‑1min；6片叶可以分3‑4批来切条加入到洗涤液中，以材料在洗涤液中不拥挤为限度；A6用镊子将每次洗涤过的叶条取出，放入13％甘露醇CPW溶液中，...

【技术特征摘要】
1.一种油茶原生质体的制备和纯化方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：A制备方法：A1从室外切取油茶一年生枝条，带回水培1-2天；A2取6片成熟叶，用刀片切去叶片的边缘和叶片主脉，并在叶片每隔0.5-1cm的位置切上一些缝隙，但不要切断叶片；A3将带有缝隙的叶块浸入蔗糖溶液中进行质壁分离0.5-1h，期间用镊子将上浮叶块压入蔗糖溶液中；A4取出叶块，用刀片与叶块成45°把叶块切成细长条，越细越好；A5将细叶条转移到盛有叶条洗涤液的容器中，放置30s-1min；6片叶可以分3-4批来切条加入到洗涤液中，以材料在洗涤液中不拥挤为限度；A6用镊子将每次洗涤过的叶条取出，放入13％甘露醇CPW溶液中，放置5-15min；3-4批细叶条的原生质体依次收集在同一管溶液中；A7用镊子去掉叶条，得到油茶原生质体溶液；B原生质体纯化：B1在油茶原生质体溶液的底层加入蔗糖溶液，原生质体溶液与蔗糖溶液的体积比是1∶1，漂洗原生质体1-5min；B2转移上层原生质体溶液到离心管中，进行离心，去掉上清液；B3沉淀用等量蔗糖溶液悬浮，再离心，去掉上清液；B4沉淀用等量蔗糖溶液悬浮，再离心，留下上清液，去掉沉淀；B5上清液经再次离心，去掉上清液，沉淀用200μL质量-体积百分比
\t浓度为18％蔗糖溶液悬浮原生质体并转移到离心管中；B6将原生质体悬浮液加在蔗糖溶液上漂洗1-5min,取出上层液即为纯化的原生质体溶液。2.如权利要求1所述的油茶原生质体的制备和纯化方法，其特征在于：步骤A3和B...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄国文，
申请(专利权)人：湖南科技学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43