一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用直链淀粉类手性色谱柱以正相混合溶剂为流动相通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法。该方法能够简单、准确、高效分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体，从而实现对苯甲酰科立内酯对映异构体的质量控制。本发明专利技术也可以用来制备高纯度单一旋光性的苯甲酰科立内酯。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种色谱分析分离方法，尤其是通过高效液相色谱法分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法。技术背景前列腺素(Prostaglandins，缩写PGs)是一类重要的具有内源性生理活性的物质，在体内各个组织中广泛存在，是多种生理过程的重要介质。由于在人体中含量极低，临床上前列腺素类药物主要是通过人工合成而来。苯甲酰科立内酯(Corey lactone benzoate)是合成前列腺素药物常用的起始原料，分子式为C15H16O5，化学名为：5-(苯甲酰氧基)六氢-4-(羟基甲基)-2H-环戊并[b]呋喃-2-酮，通用名为：苯甲酰科立内酯，结构式为：该分子含有四个手性中心，理论上存在多个光学异构体，但根据其反应机理及合成方法推断，只存在一对对映异构体，即(3aS,4R,5S,6aR)-5-(苯甲酰氧基)六氢-4-(羟基甲基)-2H-环戊并[b]呋喃-2-酮((+)-苯甲酰科立内酯)和(3aR,4S,5R,6aS)-5-(苯甲酰氧基)六氢-4-(羟基甲基)-2H-环戊并[b]呋喃-2-酮((-)-苯甲酰科立内酯)，二者互为对映异构体杂质在后续步骤中继续参与反应，形成多种对应杂质，影响前列腺素类药物的质量。因此，如何分析分离该对对映异构体，提高前列腺素类药物质量，确保前列腺素类药物的纯度及安全性，是目前需要解决的技术问题。中国专利技术专利CN 102532079 B公开了一种苯甲酰科立内酯的制备方法。该方法从科立内酯二醇出发，通过酰化反映，酯交换反应得到产品。手性药物对映异构体的拆分和绝对构型的确定是一个极其重要且长期存在的问题，在众多获取光学异构体的方法中，包含手性固定相的高效液相色谱分离法最为常见。中国专利技术专利ZL201310652110.1公开了一种(-)-苯甲酰科立内酯及其光学异构体分析分离方法，该方法选用Daicel AD-H手性柱，对苯甲酰科立内酯对映异构体进行分析和分离。目前现有技术中少有苯甲酰科立内酯对映异构体的分析分离方法研究，仅有的探索研究中也存在一些问题及不足，例如色谱柱中硅胶表面涂覆直链淀粉-三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸
酯)填料与苯甲酰科立内酯对映异构体的相互作用差异较小，立体选择性较低，使得苯甲酰科立内酯对映异构体无法得到有效分离。因此，有必要建立一种能够有效分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的新方法，控制杂质含量，进而提高合成的前列腺素类药物质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种采用新的手性色谱柱以正相混合溶剂为流动相的HPLC方法，该方法能够准确、高效分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体，从而实现对苯甲酰科立内酯对映异构体的质量控制，同时也可以用来制备高纯度单一旋光性的苯甲酰科立内酯。本专利技术提供了一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，采用色谱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯的手性色谱柱，并使用正相色谱法分离测定。本专利技术正相色谱法所使用的流动相可以是正己烷/异丙醇混合溶剂，正己烷/无水乙醇混合溶剂中的一种；进一步地，本专利技术所使用的正己烷/异丙醇的体积比例为90:10～80:20，优选为90:10～85:15；进一步地，本专利技术所使用的正己烷/无水乙醇的体积比例为95:5～84:16，优选为92:8～85:15。本专利技术所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：(1)(±)-苯甲酰科立内酯用流动相溶解，配制成1mL含(±)-苯甲酰科立内酯1～10μg的供试品溶液；进样量为1～20μL，较优选的是5～10μL；(2)设置正己烷/异丙醇流动相流速为0.8～1.5mL/min，优选为0.9～1.5mL/min，正己烷/无水乙醇流动相流速为0.3～1.5mL/min，优选为0.4～1.0mL/min；检测波长为210～235nm，较优选为230nm；柱温为室温；(3)取步骤(1)所制供试品溶液5～10μL注入手性色谱柱(250×4.6mm,5.0μm)，完成苯甲酰科立内酯对映异构体的分析与分离。本专利技术的创新点及有益效果为：1.采用直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯手性色谱柱；采用较优选的流动相；选择流动相溶解样品，选用较优的进样量；选用较优的波长；从而确保了样品的稳定性，提高了色谱峰的对称性，并且有较好的分离效果。按照本专利技术方法实施，(+)-苯甲酰科立内酯和(-)-苯甲酰科立内酯两个对映异构体先后出峰，分离度≥1.5，有效的分析分离苯甲酰科立内酯对
映异构体。2.与以往研究相比，本专利技术采用的硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯的AS-H手性色谱柱，与硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的AD-H直链淀粉类手性柱相比，其对苯甲酰科立内酯对映异构体立体选择性较高，分离度较高，能够有效分析分离对苯甲酰科立内酯对映异构体。3.所述分析分离方法快速、准确和高效，能够确保苯甲酰科立内酯对映异构体的质量可控性；本专利技术所述分析分离方法，也可以用来制备高纯度单一旋光性的苯甲酰科立内酯。4.该技术克服了现有技术的不足，解决了苯甲酰科立内酯对映异构体的分析分离问题，能够有效控制目标产物及其对映异构体杂质含量，免除对映异构体杂质对后续合成反应的干扰，提高前列腺素类药物质量，确保用药安全。由此可见，本专利技术开发的一种采用新的手性色谱柱分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的HPLC方法是十分必要的。附图说明图1：HPLC图，色谱条件：色谱柱：Daicel AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；流动相：正己烷-无水乙醇(90:10)；柱温：30℃。图2：HPLC图，色谱条件：色谱柱：BC chiral AS-H(,250mm×4.6mm,5μm)；流动相：正己烷-无水乙醇(92:8)；柱温：室温。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法做进一步说明，但本专利技术的保护范围并不限于实施例。实施例1仪器与条件色谱柱：Daicel AD-H(250×4.6mm,5.0μm)流动相：正己烷-无水乙醇(90:10)柱温：30℃流速：1.0mL/min样品浓度：10μg/mL进样体积：2μL检测波长：220nm实验步骤精密称取(±)-苯甲酰科立内酯10mg，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(90:10)溶解
并稀释到刻度，摇匀，作为供试品母液。精密吸取供试品母液100μL置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(90:10)溶液定容到刻度，配制成浓度为10μg/mL的(±)-苯甲酰科立内酯供试品溶液，吸取供试品溶液2μL进入液相色谱，记录色谱图。实验结果：见附图1，(+)-苯甲酰科立内酯和(-)-苯甲酰科立内酯两个对映异构体的分离度为0.9，苯甲酰科立内酯对映异构体不能有效分离。实施例2仪器与条件色谱柱：BC chiral AS-H(250×4.6mm,5.0μm)流动相：正己烷-异丙醇(90:10)柱温：室温流速：1.0mL/min样品浓度：10μg/mL进样体积：1μL检测波长：210nm实验步骤精密称取(±)-苯甲酰科立内酯10mg，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(90:10)溶解并本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，采用直链淀粉类手性色谱柱，使用正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分析分离，其特征在于，所述的直链淀粉类手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉‑三(s)‑α‑甲基苯基氨基甲酸酯。

【技术特征摘要】
1.一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，采用直链淀粉类手性色谱柱，使用正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分析分离，其特征在于，所述的直链淀粉类手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯。2.根据权利要求1所述的一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，其特征在于，所述的正相混合溶剂可以为正己烷/异丙醇混合溶剂、正己烷/无水乙醇混合溶剂中的一种。3.根据权利要求2所述的一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，其特征在于，所述的正己烷/异丙醇混合溶剂的体积比例为90:10～80:20。4.根据权利要求3所述的一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，其特征在于，所述的正己烷/异丙醇混合溶剂的体积比例为90:10～85:15。5.根据权利要求2所述的一种通过HPLC分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法，其特征在于，所述的正己烷/无水乙醇混合溶剂的体积比例为95:5～84:16。6.根据权利要求5所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淑红，李黎，彭悦，李宇珈，李志波，修志明，
申请(专利权)人：长春百纯和成医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22