本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体为烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽及其扩展短肽。本发明专利技术的烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽为Asp f 312‑17，最小基序肽的扩展短肽为Asp f 39‑17、Asp f 310‑18、Asp f 311‑19和Asp f 312‑20，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1~SEQ ID No. 5所示。它们可作为抗原单独或组合用于特异检测烟曲霉感染患者血清。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测
，具体涉及导致侵袭性曲霉病、变应性支气管炎和曲霉肿发生的烟曲霉主要抗原蛋白Asp f 3的线性B细胞表位（B cell epitope, BCE,或称抗原表位或决定簇）及其最小基序肽，以及这些表位基序肽的应用。
技术介绍
烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种广泛存在于自然界中的条件致病菌，易感人群吸入其孢子，定植于肺部，从而产生三种曲霉病：导致咯血的曲霉肿、导致肺纤维化的变应性支气管炎和具有较高死亡率的侵袭性曲霉病（Warris A,et al. The biology of pulmonary aspergillus infections. J Infect, 69 Suppl 1:S36-41,2014）。血清免疫学指标对于曲霉病的诊断非常重要（Chabi ML,et al. Pulmonary aspergillosis. Diagn Interv Imaging, 96(5):435-42,2015）。GM（Galactomannan，半乳甘露聚糖）和BG（（1,3）-β-D-glucans，（1,3）-β-D -葡聚糖）是烟曲霉细胞壁的多糖成分，随着孢子的萌发和菌丝体的生长而进入宿主的血循环，因此可分别用GM和BG单抗检测血清中相应的循环抗原，为目前临床上诊断烟曲霉感染的常用方法，但在特异性和灵敏度方面存在一定的局限性（廖万清.侵袭性真菌感染的实验室诊断. 检验医学，25(7)：503-506，2010）。已有的研究表明利用烟曲霉免疫原性强的体外重组蛋白，可以检测感染者血清中相应的循环抗体，但单个重组蛋白同样在特异性和灵敏度方面存在一定的局限性（Sarfati J,et al. Recombinant antigens as diagnostic markers for aspergillosis. Diagn Microbil infect Dis, 55(4):279-91,2006）。一个蛋白抗原的长表位肽可能与其它抗原蛋白的抗体起交叉反应，因此鉴定蛋白抗原表位的最小基序可以提高检测的特异性；将多个蛋白抗原表位的最小基序组成嵌合肽可以提高检测的灵敏度。Asp f 3作为变应原之一，功能为过氧化物酶体蛋白，其命名由世界卫生组织和国际免疫学会联合会变应原命名分委员会（ World Health Organization and International Union of Immunological Societies (WHO/IUIS) Allergen Nomenclature Sub-committee）批准同意（http://www.allergen.org/search.php?TaxSource=Fungi Ascomycota）。人体感染烟曲霉后，免疫系统产生相应的抗Asp f 3的IgG、IgE和IgA抗体（Kurup VP, et al. Specific antibodies to recombinant allergens of Aspergillus fumigatus in cystic fibrosis patients with ABPA.Clin Mol Allergy,4:11,2006）。鉴定Asp f 3的抗原表位最小基序，将其和烟曲霉其它抗原表位肽的最小表位基序构建检测血清嵌合肽，有助于提高诊断烟曲霉感染的特异性和灵敏度。因此，我们用大肠杆菌表达Asp f 3，经镍柱纯化后免疫新西兰白兔，得到Asp f 3抗血清。用改良的生物合成肽策略表达相互重叠9个氨基酸残基、覆盖Asp f 3全长的18肽融合蛋白，继而用Asp f 3抗血清进行免疫印迹，鉴定阳性18肽；对阳性18肽进一步构建相互重叠8个氨基酸残基的9肽融合蛋白，鉴定最小表位基序（Xu, et al. Minimal motif mapping of a known epitope on human zona pellucida protein-4 using peptide biosynthesis strategy. J Reprod Immunol, 81: 9-16, 2009）。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供烟曲霉Asp f 3蛋白的抗原表位最小基序肽，并提供含有所述最小基序肽的扩展短肽，同时提供含所述基序肽的短肽的应用。本专利技术提供的烟曲霉Asp f 3蛋白的线性抗原表位最小基序肽，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示，记为Asp f 312-17，一字简写的氨基酸序列为：SDVVFS。本专利技术还提供烟曲霉Asp f 3蛋白的线性抗原表位最小基序肽Asp f 312-17的扩展短肽（9肽），其序列如SEQ. ID No.2-- SEQ. ID No.5所示，其中：SEQ. ID No.2：X1X2X3SDVVFS，记为Asp f 39-17。其中X1是S，X2是F，X3是P，为最小基序Asp f 312-17扩展残基，在化学合成或融合表达9肽融合蛋白的场合，扩展的残基部分可增删或用其它残基替代。SEQ. ID No.3：X1X2SDVVFSX3，记为Asp f 310-18。其中X1是F，X2是P，X3是Y，为最小基序Asp f 312-17扩展残基，在化学合成或融合表达9肽融合蛋白的场合，扩展的残基部分可增删或用其它残基替代。SEQ. ID No.4：X1SDVVFSX2X3，记为Asp f 311-19。其中X1是P，X2是Y，X3是I，为最小基序Asp f 312-17扩展残基，在化学合成或融合表达9肽融合蛋白的场合，扩展的残基部分可增删或用其它残基替代。SEQ. ID No.5：SDVVFSX1X2X3，记为Asp f 312-20。其中X1是Y，X2是I，X3是P，为最小基序Asp f 312-17扩展残基，在化学合成或融合表达9肽融合蛋白的场合，扩展的残基部分可增删或用其它残基替代。本专利技术的内容进一步具体描述如下：1. 根据烟曲霉Af293菌株的Asp f 3（NCBI accession No：XP_747849）的蛋白序列，依据大肠杆菌密码子偏好性，全合成Asp f 3编码基因，从EcoR I和Hind Ⅲ酶切位点克隆于pET-21(b+)质粒，构建pET-21(b)-Asp f 3重组质粒；将C端带有6×His标签的重组质粒pET-21(b)-Asp f 3转入大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达得到重组Asp f 3蛋白；通过镍柱亲和层析后获得纯化Asp f 3蛋白；纯化Asp f 3蛋白免疫新西兰白兔，得到高特异性兔抗Asp f 3抗血清（图1）；2. 用pXXGST-1融合表达质粒，构建相互重叠9个氨基酸残基、覆盖Asp f 3全长的GST188-18肽融合蛋白（Xu, et al. Minimal motif mapping of a known epitope on human zona pellucida protein-4 using peptide biosynthesis strategy. J Reprod Immunol, 81: 9-16, 2009）。继而用兔Asp 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种烟曲霉Asp f 3蛋白的最小表位基序肽，其特征在于具有SEQ.ID No.l 所示氨基酸序列，记为Asp f 312‑17，其一字简写氨基酸序列为SDVVFS。
【技术特征摘要】
1.一种烟曲霉Asp f 3蛋白的最小表位基序肽，其特征在于具有SEQ.ID No.l 所示氨基酸序列，记为Asp f 312-17，其一字简写氨基酸序列为SDVVFS。2.一种含如权利要求1所述烟曲霉Asp f 3蛋白的最小表位基序肽的扩展短肽，其特征在于：具有SEQ. ID No.2所示氨基酸序列，记为Asp f 39-17，扩展9肽一字简写氨基酸序列为SFPSDVVFS；或者，具有SEQ. ID No.3所示氨基酸序列，记为Asp f 310-18，扩展9肽一字简写氨基酸序列为FPSDVVFSY；或者，具有SEQ. ID No.4所示氨基酸序列，记为A...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾少华，霍克克，徐万祥，石晶，高岩，季朝能，谢毅，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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