一种麦角甾醇的制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种麦角甾醇的制备方法，包括以下步骤：取干燥的红曲霉发酵样品，加入提取溶剂，采用浸提法提取得到粗提品，然后采用柱层析洗脱粗提品得到一次纯化洗脱液，对所述一次纯化洗脱液进行硅胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并再次进行柱层析洗脱得到二次纯化洗脱液，将所述二次纯化洗脱液除去溶剂并通过石油醚进行重结晶得到麦角甾醇。首次提供了以红曲霉为原料制备麦角甾醇，本发明专利技术先将红曲霉洋品粗提品进行萃取，进一步根据性分布情况和在不同溶剂中的溶解度筛选最佳的柱层析洗脱剂，使其有效分离纯化出麦角甾醇。本发明专利技术的制备方法简单、易实现、耗时短，且原料易得成本低，实现麦角甾醇的批量生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及甾醇类化合物提取
，具体涉及一种麦角甾醇的制备方法和用途。
技术介绍
“麦角甾醇”又称“麦角固醇”，是甾类化合物之一。该化合物可用于生化研究，部分作用同维生素D2。麦角固醇是微生物细胞膜的重要组成部份，对确保细胞膜的完整性，膜结合酶的活性，膜的流动性，细胞活力以及细胞物质运输等起着重要作用。生产激素类药物的中间体，可用来生产可的松。有维生素D2的作用。麦角甾醇具有重要的生理作用，是食品、饲料及医药工业原料。麦角甾醇工业化生产，有两个途径微生物生物合成与化学合成。因甾体化合物分子含有不对称中心，合成步骤多，难度大，国内外广泛开展微生物发酵合成麦角甾醇的研究。目前麦角甾醇生物合成途径的研究取得了很大的进展，这将为通过基因工程手段获得高产麦角甾醇菌株和抗真菌药物设计提供理论指导。例如申请号为CN200410040905.8的专利技术专利公开了一种麦角甾醇的制备方法，将酵母与碱，氯化钠溶液混合后进行皂化再用甲苯抽提，经水洗、浓缩和精制真空干燥得麦角甾醇成品。该专利技术利用常用的上述化工原辅料和一般化工设备，实现了麦角甾醇的工业化生产，生产过程非常简便，生产成本低，为大批量生产维生素D2提供了原料保障。但该专利技术的制备方法中需要的反应条件仍不够温和，且需要的制备时间长，选择的菌株在制备麦角甾醇时产量仍不够高。由此可见，能否针对上述不足，提供一种麦角甾醇的制备方法和用途，使其方法简单，易实现，且原料易得成本低，实现麦角甾醇的批量生产，成为本领域技术人员亟待解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题，提供一种麦角甾醇的制备方法和用途，其包括以下技术方案：一种麦角甾醇的制备方法，包括采用红曲霉发酵样品作为原料提取的步骤。首次提供了以红曲霉为原料制备麦角甾醇的方法，使其区别于现有技术中的制备方法，并且具有制备步骤简单，有效实现麦角甾醇的批量生产。进一步的，包括以下步骤：取干燥的红曲霉发酵样品，加入提取溶剂，采用浸提法提取得到粗提品，然后采用柱层析洗脱粗提品得到一次纯化洗脱液，对所述一次纯化洗脱液进行硅胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并再次进行柱层析洗脱得到二次纯化洗脱液，对所述二次纯化洗脱液进行硅胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并后除去溶剂并通过重结晶溶剂进行重结晶得到麦角甾醇。浸渍法适用于粘性药材、无组织结构的药材、新鲜及易于膨胀的药材、价格低廉的芳香性药材的浸提。而浸渍法中的热浸渍法指将中草药溶解于溶剂中，有效作用成分通过水浴或蒸汽加热达40℃～60℃提取出来。进一步的，所述的提取溶剂为乙醇，所述的红曲霉发酵样品与所述提取溶剂的体积比为1～3：10～12；所述浸提法包括以下步骤：于12000r·min-1条件下60℃浸提12h。进一步的，所述的乙醇为体积分数为90％的乙醇。进一步的，所述的柱层析洗脱的方法包括以下步骤：步骤一：拌样：将所述粗提品或一次纯化洗脱液浓缩后得到的浸膏，采用溶剂充分溶解，加入硅胶搅拌至溶剂挥发且析出的固体吸附在硅胶上；步骤二：装柱：采用湿法装柱得到硅胶柱；步骤三：上样：将步骤一拌好的样品倒入硅胶柱中后，加入石英砂，并在柱顶端塞入脱脂棉；步骤四：洗脱：采用洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述洗脱剂分别包括石油醚、乙酸乙酯和甲醇的纯溶液以及石油醚、乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂。本专利技术通过柱层析洗脱及的筛选实验，得到在粗提品中，石油醚极性较小，乙酸乙酯居中，甲醇极性较大，故选用石油醚-乙酸乙酯-甲醇洗脱。进一步的，所述步骤一中的溶剂为石油醚，加入的所述硅胶与所述浸膏
等体积；湿法装柱包括以下步骤：称取硅胶悬于石油醚中，不断搅拌溶胀去除气泡后得到悬液，将悬液匀速倒入底部塞有棉花的层析柱中，打开底阀使液体流出。进一步的，所述混合溶剂分别包括石油醚、乙酸乙酯和甲醇按体积比依次为1:0:0、9:1:0、7:2:1、6:3:1、5:4:1、4:4:2、3:6:1、2:7:1、0:9:1、0:7:3、0:5:5、0:3:7、0:1:9、0:0:1的混合溶剂；所述每个比例的洗脱剂冲洗5个柱体积。其中，柱体积＝(拌样硅胶+空白硅胶)×7/3。进一步的，所述洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯和甲醇的体积比为9:1:0的混合溶液。采用上述体积比的洗脱剂进行柱层析洗脱时，能够有效分离纯化出麦角甾醇。进一步的，所述的硅胶薄层层析中的展开剂为体积比为12～0.5：1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂。当所述展开剂为体积比为12～0.5：1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂时，层析效果好，结果清晰，能够得到各组分带。一种麦角甾醇的用途，所述的麦角甾醇在制备抗脂质过氧化活性的药物中使用。氧自由基反应和脂质过氧化反应在机体的新陈代谢过程中起着重要的作用，正常情况下两者处于协调与动态平衡状态，维持着体内许多生理生化反应和免疫反应。一旦这种协调与动态平衡产生紊乱与失调，就会引起一系列的新陈代谢失常和免疫功能降低，形成氧自由基连锁反应，损害生物膜及其功能，以致形成细胞透明性病变、纤维化，大面积细胞损伤造成进神经、组织、器官等损伤。这种反应就叫脂质过氧化。脂质过氧化过程中发生的ROS氧化生物膜的过程，即ROS与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成脂质过氧化产物(Lipid PerOxide,LPO)如丙二醛(Malonaldehyde,MDA)和4-羟基壬烯酸(4-hydroxynonenal,HNE)，从而使细胞膜的流动性和通透性发生改变，终导致细胞结构和功能的改变。本专利技术所制备的麦角甾醇经过进一步抗脂质过氧化活性检测，证明麦角甾醇能够在制备抗脂质过氧化活性的药物中使用。采用上述技术方案，包括以下有益效果：本专利技术首次提出了以红曲霉为原料制备具有抗脂质过氧化作用的物质，首次提供了以红曲霉为原料制备麦角甾醇，本专利技术先将红曲霉洋品粗提品进行萃取，进一步根据性分布情况和在不同溶剂中的溶解度筛选最佳的柱层析洗脱剂，使其有效分离纯化出麦角甾醇。本专利技术的制备方法简单、易实现、耗时短，且原料易得成本低，实现麦角甾醇的批量生产。附图说明图1为本专利技术不同浓度乙醇提取物脂质过氧化抑制率数据图；图2为本专利技术萃取的各部分抗脂质过氧化活性数据图；图3为本专利技术组分一、组分二、组分三薄层层析结果图；图4为本专利技术组分三、组分四、组分五薄层层析结果图；图5为本专利技术柱层析得到的各组分的抗脂质过氧化活性数据图；图6为本专利技术分离得到的化合物薄层分析图；图7为本专利技术化合物H-1的MS图谱；图8为本专利技术化合物H-1的1H-NMR图谱；图9为本专利技术化合物H-1的13C-NMR图谱；图10为本专利技术化合物H-1的13C-NMR图谱的局部放大图。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术做进一步的详细描述。实施例一：一种麦角甾醇的制备方法，包括采用红曲霉发酵样品作为原料提取的步骤。实施例二：一种麦角甾醇的用途，所述的麦角甾醇在制备抗脂质过氧化活性的药物中使用。实施例三：一种麦角甾醇的制备方法，包括以下步骤：取干燥的红曲霉发酵样品，加入提取溶剂，采用浸提法提取得到粗提品，然后采用柱层析洗脱粗提品得到一次纯化洗脱液，对所述一次纯化洗脱液进行硅
胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并再次本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麦角甾醇的制备方法，其特征在于，包括采用红曲霉发酵样品作为原料提取的步骤。

【技术特征摘要】
1.一种麦角甾醇的制备方法，其特征在于，包括采用红曲霉发酵样品作为原料提取的步骤。2.根据权利要求1所述的一种麦角甾醇的制备方法，包括以下步骤：取干燥的红曲霉发酵样品，加入提取溶剂，采用浸提法提取得到粗提品，然后采用柱层析洗脱粗提品得到一次纯化洗脱液，对所述一次纯化洗脱液进行硅胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并再次进行柱层析洗脱得到二次纯化洗脱液，对所述二次纯化洗脱液进行硅胶薄层层析，将相同硅胶薄层层析结果的洗脱液合并后除去溶剂并通过重结晶溶剂进行重结晶得到麦角甾醇。3.根据权利要求2所述的一种麦角甾醇的制备方法，其特征在于，所述的提取溶剂为乙醇，所述重结晶溶剂为石油醚，所述的红曲霉发酵样品与所述提取溶剂的体积比为1～3：10～12。4.根据权利要求3所述的一种麦角甾醇的制备方法，其特征在于，所述的乙醇为体积分数为90％的乙醇；所述浸提法包括以下步骤：于12000r·min-1条件下60℃浸提12h。5.根据权利要求2所述的一种麦角甾醇的制备方法，其特征在于，所述的柱层析洗脱的方法包括以下步骤：步骤一：拌样：将所述粗提品或一次纯化洗脱液浓缩后得到的浸膏，采用溶剂充分溶解，加入硅胶搅拌至溶剂挥发且析出的固体吸附在硅胶上；步骤二：装柱：采用湿法装柱得到硅胶柱；步骤三：上样：将步骤一拌好...

【专利技术属性】
技术研发人员：周礼红，侯素媛，
申请(专利权)人：周礼红，
类型：发明
国别省市：贵州;52