7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷及其荧光标记物的合成方法技术

本发明专利技术涉及一种7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷及其荧光标记物的合成方法。本发明专利技术以胆固醇和壬二酸为原料，以1,3‑二环已基碳化二亚胺和4‑二甲氨基吡啶作为合成反应的催化剂，二氯甲烷作为溶剂，建立氧化体系并通过建立脂缩反应等最终得到7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷。本发明专利技术提供了一种操作简便、原料易得，杂质含量少、生产成本低的7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，以及提供一种引入NBD‑荧光基团的7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，在保证其基本骨架结构的基础上引入NBD‑荧光基团，最终合成NBD‑oxLig‑1，使7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷(oxLig‑1)可自发荧光，为其在细胞生物学中的示踪应用。

【技术实现步骤摘要】
201610284746

【技术保护点】
7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，其特征在于，其合成步骤如下；方案(1)：首先以胆固醇和壬二酸为原料，以1,3‑二环已基碳化二亚胺DCC和4‑二甲氨基吡啶DMAP作为合成反应的催化剂，二氯甲烷作为溶剂，各物质摩尔比为壬二酸：DCC：DMAP：胆固醇＝2：1.5：1：1，应始终保证壬二酸过量，在50‑80℃充分反应，缩合成胆固醇壬二酸脂，重结晶纯化；重结晶溶剂为下列一种或两种以下任意比例的组合：甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、水；重结晶溶剂用量为所得胆固醇壬二酸脂质量的0.1～100倍；反应式如下：以上一步的胆固醇壬二酸酯为原料，建立丙烯位氧化，以TBHP/CrO3为氧化体系，铬酐CrO3溶于二氯甲烷，待搅拌溶解完全后再加入一次胆固醇壬二酸脂以及4A分子筛，然后用恒压分液漏斗滴加体积分数为70％的TBHP到反应液中室温反应20‑36h，滤去反应固体，除杂，分别用1N盐酸溶液，5％碳酸氢钠溶液，饱和氯化钠水溶液，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得到出粗产物7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷；氧化反应的物料比满足中间产物胆固醇壬二酸酯反应完全，以摩尔数记，胆固醇壬二酸酯：铬酐＝6～7:1，TBHP：CrO3＝50～60:1；反应如下：方案(1)中所述的酯化反应和酰胺化反应催化体系为DCC/DMAP、EDCl/DMAP或EDC/DMAP，所述的丙烯位氧化反应为TBHP/CrO3、PCC/SiO2、吡啶/CrO3，TBHP/CuCl2/Bu4NBr或O2/NHPI；方案(2)：首先以胆固醇和乙酸酐为原料由吡啶催化反应生成胆固醇乙酸酯，其他反应条件与方案(1)相同，以摩尔数记，吡啶：胆固醇＝5～15:1，酸酐：胆固醇＝2～10:1；充分反应，缩合成胆固醇乙酸酯，重结晶纯化；重结晶溶剂为下列一种或两种以上任意比例的组合：甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、水；所述重结晶溶剂用量为所得胆固醇乙酸酯质量的0.1～100倍；建立丙烯位氧化，以TBHP/CrO3为氧化体系，反应得到7‑酮基胆固醇乙酸酯，其他反应条件与方案(1)相同，以摩尔数记，丙烯位氧化中，胆固醇乙酸酯：铬酐＝6～7:1，TBHP：CrO3＝50～60:1；皂化反应，利用KOH碱性水解7‑酮基胆固醇乙酸酯，按照7‑酮基胆固醇乙酸酯：KOH＝1:1～2的摩尔比，7‑酮基胆固醇乙酸酯完全溶解在四氢呋喃溶液中，KOH完全溶解在甲醇中，混合后回流30min，冷却到室温，旋干溶剂，得到7‑酮基胆固醇，再由7‑酮基胆固醇与壬二酸经酯化反应，7‑酮基胆固醇与壬二酸的摩尔比＝2:1，得到7‑酮基胆甾醇‑9羧基壬烷；具体如下：...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆平，路遥，林家彬，乔辉，王仁军，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21