辅助烟草加工的酸性木聚糖酶复合酶制剂及制备和应用方法，属于可提高烟草品级的酶制剂。本发明专利技术制备是将酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL的酸性木聚糖酶酶制剂用水稀释使其酶活力为20～25U/mL，再与酶活力5500～6500U的糖化酶和/或酶活力500U的淀粉酶均匀混合。应用是：按烟草1000g用复合酶制剂酶量3g～4.5g，取复合酶制剂用250mL水稀释后喷匀于烟叶片上，放置在相对湿度70%和恒温40℃下15天，取出后自然存放1年，制备烟支。本发明专利技术仅用甚少复合酶制剂喷匀于烟叶片上即可具有良好的改善效果。
Acid xylanase complex enzyme preparation for assisting tobacco processing and preparation and application method thereof
The invention relates to an acid xylanase complex enzyme preparation for assisting tobacco processing, a preparation method and an application method thereof. The present invention is the preparation of enzyme activity at 50 DEG C and pH4.5 acid wood 3500U/mL poly water enzyme enzyme dilution the enzyme activity is 20 ~ 25U/mL, and the enzyme activity of glucoamylase from 5500 to 6500U and / or 500U activity were mixed evenly. The application is: according to the tobacco 1000g by compound enzyme enzyme 3G ~ 4.5g, the enzyme complex with 250mL diluted with water spray evenly on tobacco leaves, placed in 70% relative humidity and constant temperature of 40 DEG C for 15 days, 1 years after the removal of the natural storage, preparation of cigarettes. The invention can be sprayed on tobacco leaves only by a few complex enzyme preparations.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于烟草复烤前添加的可提高烟草品级的酶制剂及制备和应用。
技术介绍
酸性木聚糖酶定义并不明确。一般来说，酸性木聚糖酶能在pH较低的条件下仍保持较高酶活力和稳定性。Joshi等认为，酸性木聚糖酶为最适pH3.0～6.0一类木聚糖酶。目前研究的酸性木聚糖酶多属于低分子量的G11家族，它们在空间结构上具有相似性，一般含有天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、酪氨酸（Tyr）残基，Asp和Glu残基在木聚糖酶嗜酸性方面起重要作用，它位于酶催化活性中心的保守氨基酸残基四周。[王雅珍等，微生物酸性木聚糖酶及其应用的研究进展，食品与发酵工业，2012，38(8)：107～113]。
专利文献中，“一种用于提高烟草吸味质量的烟草生物糖酶”[李友权等，CN101194753A]以蛋白酶、纤维素酶和麦芽糖酶组成的稠状液体的烟草生物糖酶。戴丽君等进一步研究了“一种复合酶制剂及将该复合酶制剂用于烟梗生产的工艺”(ZL2005101044436)，用淀粉酶、果胶酶和木聚糖酶经复合酶处理烟梗，使梗膏和再造烟叶的水溶性糖含量变化，提高再造烟叶的内在品质。
本专利技术之前，本专利技术人“以市售的酸性木聚糖酶制备烟草加工的辅助酶制剂及应用”（申请号：2016101033035）提出中国专利技术专利申请，该专利技术提供了单一的酸性木聚糖酶制剂，该制剂酸性木聚糖酶的酶活力在50℃和pH4.5下最佳酶活力为3500U/mL，将酶制剂稀释250倍应用于片烟复烤前的第二次润叶用水其酶活力为14U/mL。但该申请未分析和讨论与其它水解酶复合的酶制剂。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种辅助烟草加工的酸性木聚糖酶复合酶制剂及制备和应用方法，特别是使酸性木聚糖酶与淀粉酶和/或糖化酶产生协同影响效果、以改善烟草品质的复合酶制剂及制备和应用。
本专利技术通过以下途径实现：
（一）辅助烟草加工的酸性木聚糖酶复合酶制剂
该复合酶制剂为以下组合方式之一种：
（1）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶5500U组合；
（2）酸性木聚糖酶20U/mL、糖化酶5500U和淀粉酶500U组合；
（3）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶6500U组合；
上述酸性木聚糖酶的酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL。
优选地，所述的复合酶制剂的酸性木聚糖酶为20U/mL、糖化酶为5500U和淀粉酶为500U的组合。
（二）本专利技术复合酶制剂之一种的制备方法
将酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL的酸性木聚糖酶之酶制剂用水稀释175～140倍，使其酶活力范围为20～25U/mL，再与酶活力5500～6500U的糖化酶和/或酶活力500U的淀粉酶均匀混合，得到复合酶制剂。
（三）本专利技术复合酶制剂之一种的应用方法
按烟草1000g用复合酶制剂酶量3g～4.5g，取复合酶制剂用250mL水稀释后喷匀于烟叶片上，放置在相对湿度70%和恒温40℃下15天，取出后自然存放1年，制备烟支。
进一步，所述的复合酶制剂以戊聚糖含量在11%～19%的烟草作为适宜的处理对象。
本专利技术进步及意义是：
本专利技术将酶活力在50℃和pH4.5下酶活力为3500U/mL的酸性木聚糖酶水120～150倍稀释溶解后作为酶量与其它水解酶酶量复合的FA1、FA2和FA3三种复合酶制剂按一定比例均匀喷洒烟叶片样后，在相对湿度70%和恒温40℃下放置15天，取出并自然存放1年之后制备成烟支，其评吸结果证明：本专利技术仅用甚少复合酶制剂用水稀释后喷匀于烟叶片上，例如，烟叶1000g：复合酶制剂3g～4.5g，即可具有良好的改善效果。
本专利技术FA1、FA2和FA3三种组合中，FA1对宣威B3F烟样口感中干净度有提升，FA1对三种烟样口感中回味改善效果也较好。FA2和FA3两组合酶的口感中干净度在三种烟样中均较明显的改善，尤其是，添加FA2的三种烟样中，4g用酶量的最高总分值增量，且FA2一般高于FA3和FA1。而FA3对3种烟样在口感中湿润和回味都有较为全面的改善。
以下结合实施例对本专利技术做进一步说明。实施例包括但不限制本专利技术的保护范围。
具体实施方式
在以下实例中，酸性木聚糖酶酶活力单位（U）定义：在50℃和pH4.5下1%木聚糖底物溶液中反应10min，每min产生1μmol/L木糖所需的酶量定义为1U。
对酸性木聚糖酶制剂的酶活力表征的测定可按照《沼气发酵实验教程》（刘士清，张无敌，尹芳，等，沼气发酵实验教程，北京：化学工业出版社，2013，p135）提供的方法检测。同时该方法在“以市售的酸性木聚糖酶制备烟草加工的辅助酶制剂及应用”（申请号：2016101033035）中国专利技术专利中也做过进一步地表述。
对糖化酶和淀粉酶的酶活力表征的测定可按照《生物化学实验》等教材进行。
酸性木聚糖酶与淀粉酶、糖化酶按如下方式组合：
（1）酸性木聚糖酶25U和糖化酶5500U组合，简记：FA1；
（2）酸性木聚糖酶20U、糖化酶5500U和淀粉酶500U组合，简记：FA2；
（3）酸性木聚糖酶25U和糖化酶6500U组合，简记：FA3。
上述酸性木聚糖酶的酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL。
方法为：FA1～FA3三个组合以戊聚糖含量在11%～19%的烟草作为适宜的处理对象，每个组合按烟草1000g用复合酶制剂3g、4g和4.5g酶量分为三个水平；取三个水平的复合酶制剂用250mL水稀释溶解后喷匀于1000g三种烟样的烟叶片上，三种烟样为云南石林B2F和B3F混合烟、云南宣威B2F烟叶片、云南宣威B3F烟叶片；再放置在相对湿度70%和恒温40℃下15天，取出，自然存放1年后，将每个组合用小型切丝机和卷烟器等制备成烟支，进行评吸。
注：A对照以酶液量同等量的水喷匀处理；B各处理样品均为2013年烟季的烤烟；C评吸分值总分值为100，各项分配最高分值为：香韵降10、香气量15、香气质（细腻度、圆润性、绵延感）15、浓度10，刺激性（口腔、鼻腔、喉部）15、劲头5、杂气（枯焦、粉杂掘、生青气、其他杂气）10、口感（干净度10、湿润5和回味5）20；D下面的结果中评吸分值与对照相同的以0计，即表示分值无升降。括号中评吸项升降或计0分值表示在FA1、FA2或FA3组合下，分别对应于3g、4g、4.5g用酶量处理所得结果。
实例1：
FA1对3种烟样处理结果如下表1～3：
对云南石林B2F和B3F混合烟处理与对照比较评吸如表1：
注：升用正值表示，降用负值表示，下同。
FA1组合除对总分值贡献外，改善了云南石林B2F和B3F混合烟的香气质、浓度、刺激性、劲头及口感中的回味，而对香韵和香气量两评吸项效果相反，杂气与对照等同。
对云南宣威B2F烟叶片处理与对照比较评吸如表2：
对云南宣威B3F烟叶片处理与对照比较评吸如表3：
上表2，在4.5g酶用量时，宣威B2F烟样的香气质下降，香气量等同对照。除该项外，与石林B2F和B3F的混合烟相比，在宣威B2F烟样中其它评吸项均有一定改善，特别是增加了香韵和杂气。上表3，宣威B3F烟样除了与石林B2F和B3F混合烟一样香气质改善外，其它项变化特征与宣威B2F烟样类似，但评吸总本文档来自技高网...
【技术保护点】
辅助烟草加工的酸性木聚糖酶复合酶制剂，其特征是该复合酶制剂为以下组合方式之一种：（1）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶5500U组合；（2）酸性木聚糖酶20U/mL、糖化酶5500U和淀粉酶500U组合；（3）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶6500U组合；上述酸性木聚糖酶的酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL。
【技术特征摘要】
1.辅助烟草加工的酸性木聚糖酶复合酶制剂，其特征是该复合酶制剂为以下组合方式之一种：
（1）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶5500U组合；
（2）酸性木聚糖酶20U/mL、糖化酶5500U和淀粉酶500U组合；
（3）酸性木聚糖酶25U/mL和糖化酶6500U组合；
上述酸性木聚糖酶的酶活力在50℃和pH4.5下为3500U/mL。
2.根据权利要求1所述的复合酶制剂，其特征是：该复合酶制剂的酸性木聚糖酶为20U、糖化酶为5500U和淀粉酶为500U的组合。
3.制备如权利要求1或2所述之一种复合酶制剂的方法，其特征是：将酶活力在5...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩伟，黄文荣，刘士清，张无敌，尹芳，陈应昆，何宝玉，赵春雷，雷宇，王金浩，王应中，韩梦璇，赵刚，
申请(专利权)人：云南万芳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53
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