欧洲越橘组织快繁培养基及其培育方法技术

欧洲越橘组织快繁培养基及其培育方法，它涉及植物组织培养领域，具体涉及欧洲越橘组织快繁培养基及其培育方法。本发明专利技术是要解决现有培养基对欧洲越橘组织离体快繁效果差的问题。欧洲越橘组织快繁培养基包括腋芽诱导培养基和分化增殖培养基两种培养基，所述的腋芽诱导培养基为含有玉米素的Dy培养基；所述的分化增殖培养基为含有6‑苄基胺基嘌呤和玉米素的Dy培养基。方法：一、取材，消毒；二、腋芽培养，分化增殖。本发明专利技术用于欧洲越橘组织的快速繁殖培育。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养领域，具体涉及欧洲越橘组织快繁培养基及其培育方法。
技术介绍
欧洲越橘(VacciniummyrtillusL.)是生长于中欧地区多年生浆果，主要分布于瑞典、芬兰、乌克兰、俄罗斯北部、拉脱维亚等中北欧高寒地区，我国新疆阿拉泰山区也有分布。其抗寒能力极强，能耐-50℃的极端低温。由于独特的地理环境及气候因素，欧洲越橘果实中的花青素成分种类及含量均高出其他越橘品种。欧洲越橘提取物、欧洲越橘鲜果、果酱和果汁在市场上极受欢迎，鲜果在欧洲市场达5欧元/kg，果酱、果汁在波兰市场售价比其他高出50％。欧洲越橘的果实与叶片中含有儿茶酚蹂质、黄酮、花青素等物质，具有抗氧化、抗炎及诱导癌细胞凋亡等作用，主要用于糖尿病、消化系统、循环系统、眼部疾病和抗肿瘤的治疗。欧洲越橘提取物(bilberryextract)具有较强的抗氧化活性，可以抑制自由基损伤组织机能，提高还原型谷胱甘肽的水平，作为保健食品已被消费者广泛接受，并被美国FDA列为无需认证的食品添加剂，多年来国际市场销售价格一直稳定在500～600美元/kg的水平。欧洲越橘主要分布在中北欧高寒地区，我国分布极少。黑龙江省林业科学研究所从新疆阿拉泰保护区引种部分欧洲越橘品种开展研究。然而材料稀缺宝贵，只有通过植物组织培养技术才能在短期内繁殖大量苗木，又可保护现有品种的优良遗传特性。然而并未见欧洲越橘组织培养方面的报道，其他越橘品种的培养基并不能满足欧洲越橘试管苗的生长，因此必须开展欧洲越橘的组织快繁培养基的研究。
技术实现思路
本专利技术是要解决现有培养基对欧洲越橘组织离体快繁效果差的问题，而提供欧洲越橘组织快繁培养基及其培育方法。本专利技术欧洲越橘组织快繁培养基包括腋芽诱导培养基和分化增殖培养基两种培养基；其中，所述的腋芽诱导培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；所述的分化增殖培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L6-苄基胺基嘌呤和0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；其中，所述的Dy培养基是由大量元素、钙盐、微量元素、铁的络合盐、有机物质、强度为1400g/cm2的琼脂和蒸馏水组成；每1L的Dy培养基中含有所述的大量元素由180mg/L～200mg/L的KNO3、400mg/L～410mg/L的NH4NO3、365mg/L～380mg/L的MgSO4·7H2O和160mg/L～180mg/L的KH2PO4组成；每1L的Dy培养基中含有所述的钙盐为680mg/L～690mg/L的Ca(NO3)2·4H2O；每1L的Dy培养基中含有所述的微量元素由6.3mg/L的H3BO3、22.4mg/L的MnSO4·4H2O、8.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.24mg/L的Na2MoO4·2H2O和0.24mg/L的CuSO4·5H2O组成；每1L的Dy培养基中含有所述的铁的络合盐由73mg/L～74mg/L的C10H13FeN2NaO8和37.0mg/L～38.0mg/L的Na2EDTA组成；每1L的Dy培养基中含有所述的有机物质由25g/L的蔗糖、0.05mg/L～0.15mg/L的盐酸硫胺素、0.45mg/L～0.55mg/L的烟酸、0.5mg/L～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、90mg/L～110mg/L的肌醇和1.5mg/L～2.5mg/L的甘氨酸组成；每1L的Dy培养基中强度为1400g/cm2的琼脂的含量为6.0g/L～7.0g/L，pH为5.6。欧洲越橘组织培育方法具体是按以下步骤进行：一、取材时应在晴好天气的中午或下午，从健壮无病的植株上选取欧洲越橘植物组织单节茎段，经流水冲洗15min后，在超净工作台消毒，方法为：采用0.1％HgCl2浸泡消毒2.0min，然后用无菌水冲洗3次，并浸泡在无菌水60min，得到灭菌后的欧洲越橘植物组织单节茎段；二、将灭菌后的欧洲越橘植物组织单节茎段接种到腋芽诱导培养基中，培养条件为白天培养温度23℃～27℃，夜间培养温度18℃～22℃，光照时间12h/d，光照强度2000Lux，培养时间25d～30d；然后将培养25d～30d的腋芽转到分化增殖培养基中，培养条件为白天培养温度23℃～27℃，夜间培养温度18℃～22℃，光照时间12h/d，光照强度3000Lux，相对湿度60％～70％，培养时间60d；经步骤一和步骤二处理后的欧洲越橘植物组织单节茎段的腋芽诱导萌发率为85％～93％；试管苗平均分化增殖倍数为12.8～19.6倍；所述的腋芽诱导培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；所述的分化增殖培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L6-苄基胺基嘌呤和0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；其中，所述的Dy培养基是由大量元素、钙盐、微量元素、铁的络合盐、有机物质、强度为1400g/cm2的琼脂和蒸馏水组成；每1L的Dy培养基中含有所述的大量元素由180mg/L～200mg/L的KNO3、400mg/L～410mg/L的NH4NO3、365mg/L～380mg/L的MgSO4·7H2O和160mg/L～180mg/L的KH2PO4组成；每1L的Dy培养基中含有所述的钙盐为680mg/L～690mg/L的Ca(NO3)2·4H2O；每1L的Dy培养基中含有所述的微量元素由6.3mg/L的H3BO3、22.4mg/L的MnSO4·4H2O、8.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.24mg/L的Na2MoO4·2H2O和0.24mg/L的CuSO4·5H2O组成；每1L的Dy培养基中含有所述的铁的络合盐由73mg/L～74mg/L的C10H13FeN2NaO8和37.0mg/L～38.0mg/L的Na2EDTA组成；每1L的Dy培养基中含有所述的有机物质由25g/L的蔗糖、0.05mg/L～0.15mg/L的盐酸硫胺素、0.45mg/L～0.55mg/L的烟酸、0.5mg/L～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、90mg/L～110mg/L的肌醇和1.5mg/L～2.5mg/L的甘氨酸组成；每1L的Dy培养基中强度为1400g/cm2的琼脂的含量为6.0g/L～7.0g/L，pH为5.6。氮是构成植物体蛋白质、核酸、ATP、NADPH或NADPH+、叶绿素等物质的主要元素，能促进植物的细胞分裂，是植物生长必需的营养元素之一。铵态氮和硝态本文档来自技高网...

【技术保护点】
欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于欧洲越橘组织快繁培养基包括腋芽诱导培养基和分化增殖培养基两种培养基；其中，所述的腋芽诱导培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；所述的分化增殖培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L 6‑苄基胺基嘌呤和0.1mg/L～1.0mg/L玉米素的Dy培养基；其中，所述的Dy培养基是由大量元素、钙盐、微量元素、铁的络合盐、有机物质、强度为1400g/cm2的琼脂和蒸馏水组成；每1L的Dy培养基中含有所述的大量元素由180mg/L～200mg/L的KNO3、400mg/L～410mg/L的NH4NO3、365mg/L～380mg/L的MgSO4·7H2O和160mg/L～180mg/L的KH2PO4组成；每1L的Dy培养基中含有所述的钙盐为680mg/L～690mg/L的Ca(NO3)2·4H2O；每1L的Dy培养基中含有所述的微量元素由6.3mg/L的H3BO3、22.4mg/L的MnSO4·4H2O、8.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.24mg/L的Na2MoO4·2H2O和0.24mg/L的CuSO4·5H2O组成；每1L的Dy培养基中含有所述的铁的络合盐由73mg/L～74mg/L的C10H13FeN2NaO8和37.0mg/L～38.0mg/L的Na2EDTA组成；每1L的Dy培养基中含有所述的有机物质由25g/L的蔗糖、0.05mg/L～0.15mg/L的盐酸硫胺素、0.45mg/L～0.55mg/L的烟酸、0.5mg/L～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、90mg/L～110mg/L的肌醇和1.5mg/L～2.5mg/L的甘氨酸组成；每1L的Dy培养基中强度为1400g/cm2的琼脂的含量为6.0g/L～7.0g/L，pH为5.6。...

【技术特征摘要】
1.欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于欧洲越橘组织快繁培养基包括腋芽诱导培养
基和分化增殖培养基两种培养基；其中，所述的腋芽诱导培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L玉
米素的Dy培养基；
所述的分化增殖培养基为含有0.1mg/L～1.0mg/L6-苄基胺基嘌呤和0.1mg/L～1.0mg/L玉
米素的Dy培养基；
其中，所述的Dy培养基是由大量元素、钙盐、微量元素、铁的络合盐、有机物质、强
度为1400g/cm2的琼脂和蒸馏水组成；
每1L的Dy培养基中含有所述的大量元素由180mg/L～200mg/L的KNO3、
400mg/L～410mg/L的NH4NO3、365mg/L～380mg/L的MgSO4·7H2O和160mg/L～180mg/L的
KH2PO4组成；
每1L的Dy培养基中含有所述的钙盐为680mg/L～690mg/L的Ca(NO3)2·4H2O；
每1L的Dy培养基中含有所述的微量元素由6.3mg/L的H3BO3、22.4mg/L的
MnSO4·4H2O、8.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.24mg/L的Na2MoO4·2H2O和0.24mg/L的
CuSO4·5H2O组成；
每1L的Dy培养基中含有所述的铁的络合盐由73mg/L～74mg/L的C10H13FeN2NaO8和
37.0mg/L～38.0mg/L的Na2EDTA组成；
每1L的Dy培养基中含有所述的有机物质由25g/L的蔗糖、0.05mg/L～0.15mg/L的盐
酸硫胺素、0.45mg/L～0.55mg/L的烟酸、0.5mg/L～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、90mg/L～110mg/L
的肌醇和1.5mg/L～2.5mg/L的甘氨酸组成；
每1L的Dy培养基中强度为1400g/cm2的琼脂的含量为6.0g/L～7.0g/L，pH为5.6。
2.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于所述的腋芽诱导培养
基为含有0.6mg/L玉米素的Dy培养基。
3.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于所述的分化增殖培养
基为含有0.5mg/L6-苄基胺基嘌呤和1.0mg/L玉米素的Dy培养基。
4.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于每1L的Dy培养基
中含有所述的大量元素由190mg/L的KNO3、405mg/L的NH4NO3、375mg/L的MgSO4·7H2O
和175mg/L的KH2PO4组成。
5.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于每1L的Dy培养基
中含有所述的钙盐为684mg/L的Ca(NO3)2·4H2O。
6.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于每1L的Dy培养基

\t中含有所述的铁的络合盐由73.5mg/L的C10H13FeN2NaO8和37.5mg/L的Na2EDTA组成。
7.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于每1L的Dy培养基
中含有所述的有机物质由25g/L的蔗糖、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.55mg/L的烟酸、0.55mg/L
的盐酸吡哆醇、110mg/L的肌醇和2.2mg/L的甘氨酸组成。
8.根据权利要求1所述的欧洲越橘组织快繁培养基，其特征在于每1L的Dy培养基
中强度为1400g/cm2的琼脂的含量为6.5g/L，pH为5.6。
9.欧洲越橘组织培育方法，其特征在于欧洲越橘组织培育方法具体是按以下步骤进行：
一、取材时应在晴好天气的中午或下午，从健壮无病的植株上选取欧洲越橘植物组织
单节茎段，经流水冲洗15min后，在超净工作台消毒，方法为：采用0.1％HgCl2浸泡消毒
2.0min，然后用无菌水冲洗3次，并浸泡在无菌水60min，得到灭菌后的欧洲越橘植物组织<...

【专利技术属性】
技术研发人员：田新华，姜天瑞，翁海龙，吕跃东，王福德，张建瑛，李正华，
申请(专利权)人：黑龙江省林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23