一种用于中药的农药残留检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用于现代中药制剂的农药残留检测方法，本发明专利技术建立了包含有机氯类、有机磷类、二甲酰亚胺类、拟除虫菊酯类等103种农药残留的GC-MS/MS检测方法，试验中采用乙酸乙酯作为提取溶剂，氨基柱净化，以中药基质加标溶液进行测定，本方法为中药安全性提供了有效、准确的质量控制方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用于中药的农药残留检测方法
：本专利技术涉及一种药物产品中有关农药残留的检测方法，特别涉及一种现代中药制剂中的多种农药残留的检测方法。
技术介绍
：中药安全性问题事件在近年频频发生，这对一向自许为“安全、有效”的中药带来极大的挑战。加之一些媒体对有关中药安全性问题事件的过度宣传和误导，使得人们对中药安全性的关注达到了前所未有的程度，“世人并不怀疑中药的药效，但怀疑中药的安全性”的观点已经成为制约中医药发展的瓶颈。也是制约中药国际化的瓶颈。其中农药残留是影响中药安全性的重要因素。所谓农药残留：指受生长环境的影响或者在中药种植、加工、贮藏过程中使用农药后，残留在药用部位中的农药母体以及有毒理学意义的特殊衍生物，如降解或转化产物、代谢物以及工业杂质等。中药材在种植、生产、加工过程中易接触农药，且国家对药材中农药施用登记制度尚不完善，故无法确定药材可能存在的农残物质；由此使来源于中药材提取后制成的中药复方制剂中存在未知的痕量农药残留物。精制后的中药复方制剂基质中含有的大量小分子物质，基质复杂，对痕量的农药残留物的测定形成干扰。本专利技术在现有技术的基础上，寻找一种对中药中的痕量的农药残留物的检测方法。
技术实现思路
：本专利技术提供一种中药农残的测定方法，本专利技术采用GC-MS/MS，即三重四极杆气相-质谱联用检测技术对中药中的农药残留进行检测，其方法包括以下步骤：步骤1，对中药中的成分进行提取，步骤2，对提取液进行净化，步骤3，净化后的溶液注入GC-MS/MS色谱仪，得到色谱图，步骤4，以基质加标溶液作标准曲线消除基质效应，根据色谱图计算得到中药中农药残留的含量。其中步骤1所述提取，步骤如下：取中药，粉碎后过筛，取粉碎后的样品1.0-3.0g，精密称定，加入5-15mL乙酸乙酯，提取20-40min，离心2-4min，取上清液适量，挥发近干，用1-3mL淋洗液溶解，待净化。其中的淋洗液选自以下溶液：二氯甲烷∶甲醇＝100∶1(体积比)；乙腈：甲苯＝3：1(体积比)；甲苯等。其中所述提取选自振摇提取或超声提取。挥发近干选自水浴旋蒸至近干或氮气吹至近干。优选的提取方法为：取中药，粉碎后过3号筛，取粉碎后的样品2.0g，精密称定，于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入10mL乙酸乙酯，振摇提取30min(135r/min)，5000r/min离心3min，取上清液5mL于150ml鸡心瓶中，于40℃水浴旋蒸至近干，用2mL淋洗液(V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝100∶1)溶解，待净化。其中步骤2所述净化，步骤如下：氨基柱加样前，先用2-4mL淋洗液预洗柱，当预洗液液面达到柱填料顶部时，迅速将样品溶液移入柱中，并用平底烧瓶接收淋洗液；用共计10-20ml淋洗液分2～4次洗涤鸡心瓶，待上一次淋洗液液面接近柱填料顶部时，将洗涤液同样转入柱子中，收集所有流出液，于35-45℃水浴中旋转浓缩至近干，加入1-3ml丙酮或乙腈，混匀，待气相色谱-质谱测定。优选的净化方法为：氨基柱加样前，先用3mL淋洗液预洗柱，当预洗液液面达到柱填料顶部时，迅速将样品溶液移入柱中，并用150ml平底烧瓶接收淋洗液；分别用3ml，5ml，5ml淋洗液3次洗涤鸡心瓶，待上一次淋洗液液面接近柱填料顶部时，将洗涤液同样转入柱子中，收集所有流出液。于40℃水浴中旋转浓缩至近干，加入1ml丙酮混匀。其中所述淋洗液，与步骤1中淋洗液相同。其中步骤3的色谱条件如下：气相色谱：色谱柱选自：Rtx-5MS，HP-5MS或DB-5MS柱。初始温度在50-70℃，保持时间0-5min；第一阶段升温速率范围在15-35℃·min-1之间，升温至85-150℃；第二阶段升温速率范围在8-15℃·min-1之间，最高温度为300-350℃，保持时间在5-20min之间。优选柱升温程序：50℃，保持1min，以25℃·min-1速度升温至125℃，再以10℃·min-1升温至300℃，保持10min；质谱条件：电离方式：EI，电离能量：70eV；离子源温度：200℃，传输线温度：250℃；溶剂延迟：2.8min；载气：高纯氦(纯度：99.999％)；柱流速：1.69mL·min-1；进样口温度：250℃，不分流进样；进样量：1μL。全扫描模式，扫描质量范围40～500，获得样品中各化合物保留时间。选择离子检测：按照出峰顺序，获得各化合物参数。其中步骤4所述标准曲线，制法如下：取中药样品适量，按样品前处理方式操作，制备样品基质溶液；取混合对照品储备液，加样品基质溶液配置成不同浓度的基质混合标准工作溶液，用于做标准工作曲线。配制含各农药2～500ng·mL-1的系列混合标准溶液，分别精密吸取1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，计算。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。其中所述基质为：中药样品按照步骤1、2进行提取净化后得到的溶液。混合对照品储备液的配制方法，为分别取各对照品10.00mg，精密称定，置于1000mL量瓶中，加丙酮溶解并定容至刻度，配制成10.0mg·L－1的标准储备液，于-20℃下保存。基质加标溶液的配制方法：以中药样品制成的基质溶液，逐级稀释系列混合标准溶液。其中配制含各农药2～500ng·mL-1的系列混合标准溶液，配制方法如下：取混合对照品储备液0.5mL置于10mL量瓶中，加基质溶液溶解并定容至刻度得到浓度为500ng·mL-1的混合标准溶液，用基质溶液分别逐级稀释上一个浓度点的标准溶液，得到浓度为200、100、50、20、5、2ng·mL-1的系列混合标准溶液。色谱条件与步骤3相同。本专利技术所述的中药，是指经过加工提取后制备得到的中药制剂。回收率、精密度和定量限的测定：分别在样品中添加0.01，0.05，0.1mg·kg-13个水平的混合对照品溶液，提取净化后测定，每个水平平行测定5次，计算回收率和方法重复性。仪器精密度按照50ng·mL-1的混合对照品溶液连续进样6次计，各待测物质的精密度均＜3％。定量限：精密称取中药样品粉末2.0g，加入一定浓度的对照品混合溶液一定量，进行定量限实验，加标浓度为3个水平，分别为0.001，0.002，0.005mg·kg-1，每个水平平行测定3次，选择回收率符合60-120％之间，RSD小于20％，添加标准溶液质量浓度得到的信噪比不低于10：1的最低添加水平，作为该物质的定量限，结果见表1。色谱图见图1。定量方式：对于单个待测物质，可采用标准曲线法或外标一点法进行定量，对于含有同分异构体的同类农残待测物质(如氯菊酯包括氯菊酯-1、氯菊酯-2)，可采用氯菊酯的标准曲线计算该物质总量。本专利技术的方法灵敏度高、准确度好，能够有效进行中药制剂中多农残检测，其操作方法是经过筛选获得的，筛本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于中药的农药残留检测方法，其特征在于，采用气相‑质谱联用检测技术对中药中的农药残留进行检测，所述方法包括以下步骤：步骤1，对中药中的成分进行提取，步骤2，对提取液进行净化，步骤3，净化后的溶液注入GC‑MS/MS色谱仪，得到色谱图，步骤4，以基质加标溶液作标准曲线消除基质效应，根据色谱图计算得到中药中农药残留的含量。

【技术特征摘要】
1.一种用于中药制剂的农药残留检测方法，其特征在于，采用气相-质谱联用检测技术对中药制剂中的农药残留进行检测，所述方法包括以下步骤：
步骤1，对中药制剂中的成分进行提取，
步骤2，对提取液进行净化，
步骤3，净化后的溶液注入GC-MS/MS色谱仪，得到色谱图，
步骤4，以基质加标溶液作标准曲线消除基质效应，根据色谱图计算得到中药制剂中农药残留的含量，其中步骤1所述提取，步骤如下：取中药制剂，粉碎后过筛，取粉碎后的样品1.0-3.0g，精密称定，加入5-15mL乙酸乙酯，提取20-40min，离心2-4min，取上清液适量，挥发近干，用1-3mL淋洗液溶解，待净化；
其中步骤2所述净化，步骤如下：氨基柱加样前，先用2-4mL淋洗液预洗柱，当预洗液液面达到柱填料顶部时，将样品溶液移入柱中，接收淋洗液；用共计10-20ml淋洗液分2-4次洗涤鸡心瓶，待上一次淋洗液液面接近柱填料顶部时，将洗涤液同样转入柱子中，收集所有流出液，于35-45℃水浴中旋转浓缩至近干，加入1-3ml丙酮或乙腈，混匀，待气相色谱-质谱测定；
其中步骤3的色谱条件如下：
气相色谱：色谱柱选自：Rtx-5MS，HP-5MS或DB-5MS柱，初始温度在50-70℃，保持时间0-5min；第一阶段升温速率范围在15-35℃·min-1之间，升温至85-150...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟玲，李东翔，孟文婷，周水平，朱永宏，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12