一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的方法，其通过复合酶法酶解原料粉末，再用有机溶剂微波法提取其中的总黄酮，最后利用色谱柱进行分离、纯化的三段组合式提取工艺，实现了较高的总黄酮类化合物的有效提取，是一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的全新方法，具有广泛的工业化应用前景和市场价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于从天然植物中提取有效成分的
更具体地，本专利技术涉及一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的方法。
技术介绍
天仙果(FicuserectaThunb.var.beecheyana)为桑科(Moraceae)榕属(Ficus)植物，又名大号牛奶仔、牛奶柴，细叶牛乳绳、小攀坡等，主要分布于安徽、浙江、江西、福建等地区。天仙果是常用的苗药之一，其根入药，性温，味甘、淡，无毒，具有补中益气、健脾化湿、行气活血等功效，民间常将其用于煲汤、炒菜的配料。研究发现，桑科榕属植物中富含黄酮类化合物，根据结构的不同，这些化合物又可分为：黄酮、黄酮醇、黄烷醇、异黄酮、二氢黄酮和二氢黄酮醇等。黄酮类物质具有广泛的生物活性作用，如抗氧化、抗胆碱酯酶、抗菌、消炎、降血糖等。为了提取天仙果中的黄酮类化合物有效成分，人们进行了大量的研究，取得了一定的研究成果。CN102274288B公开了天仙果萃取物作为防止皮肤老化的药剂的用途，但并未公开其有效成分的具体萃取工艺。王喜周等(“天仙果根总黄酮提取工艺研究”，《安徽农业科学》，第41卷，第2期，第601-603页)利用有机溶剂法提取得到了天仙果中的黄酮，但提取率较低。总之，在所有的现有技术中，如何更高效地从天仙果中提取黄酮类物质的文献还未见有报道。因此，针对现有技术中存在的天仙果利用率低、黄酮提取率低等缺陷，本专利技术旨在提供一种可以适用于工业化地、高产量地从天仙果适当部位中提取总黄酮物质的方法，以提高天仙果的利用价值，满足医药、化工领域的普遍需求。
技术实现思路
针对现有技术存在的诸多缺陷，本专利技术人经过大量的深入研究，在付出了充分的创造性劳动后，提供一种从天仙果中高效提取黄酮类物质的方法。具体而言，本专利技术提供一种从天仙果中高效提取黄酮类物质的方法，所述方法包括如下步骤：A、原料粉末的制备取天仙果根，干燥至水含量以重量计降低至10%以下，粉碎，混匀，过筛，得到原料粉末；根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤A中的原料粉末的粒度为20-100目，例如为20目、30目、40目、50目、60目、70目、80目、90目或100目，优选为20-40目。、酶处理向原料粉末中加入水和生物酶，其中原料粉末与水的质量比为1:10-60，生物酶与原料粉末的质量比为0.1-15:100，从而配制得到酶解溶液，搅拌，并调节酶解溶液的pH为3-7，然后放入恒温摇床中，摇床转速为100-120rpm，在30-70℃下进行保温酶解60-150min，得到酶解液。根据本专利技术所述提取方法的一种优选方式，所述步骤B中的原料粉末与水的质量比优选为1:10-50，例如1:10、1:20、1:30、1:40或1:50。本专利技术人发现，最终总黄酮得率先随酶解溶液中加水量的增大而增大，但是当水的用量增大到一定程度时，总黄酮的提取率反而降低。因此，原料粉末与水的质量比更优选为1:20-40，非限定性的可为1:20、1:25、1:30、1:40。根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤B中的生物酶为纤维素酶或果胶酶或两者的混合物，最优选为两者的混合物；当为混合物时，其中混合酶中的纤维素酶与果胶酶的质量比优选为0.1-10:1，非限定性地可为0.1:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1或10:1，更优选2-10:1，最优选5-8:1。为了保证纤维素酶与果胶酶的活力，所述步骤B中调节酶解溶液的pH为3-7，非限定性地pH值可为3、4、5、6或7；反应液的pH过高或过低，都会影响酶的稳定性，从而使酶催化遭受不可逆破坏。更优选步骤B中的pH为4-6，最优选为4-5。根据本专利技术的所述提取方法的一种优选方式，所述步骤B中酶与原料粉末的质量比优选为1-10:100，例如为1:100、2:100、3:100、4:100、5:100、6:100、7:100、8:100、9:100或10:100。本专利技术人发现，随着反应体系中酶用量的增加，天仙果中总黄酮提取率呈上升趋势，但当酶用量达到一定比例后，再增加酶的用量，总黄酮提取率增加不明显，从节约成本、提高提取率的角度考虑，酶与原料粉末的质量比更优选为2-8:100，例如为2:100、3:100、4:100、5:100、6:100、7:100或8:100。根据本专利技术的所述提取方法的一种优选方式，所述步骤B中的酶解保温温度优选40-70℃，非限定性地，例如可为40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。、溶剂提取和色谱柱纯化抽滤步骤B中得到的酶解液而得到酶处理后的残渣和抽滤液；然后向该残渣中加入有机溶剂，其中残渣与有机溶剂的质量比为1:10-50，混合后，再加入三聚磷酸钠，微波提取1-10min，然后分离得到提取液，合并所述抽滤液和所述提取液，得到混合液，然后将该混合液浓缩至原体积的1/4-1/2，，得到浓缩提取液，调节该浓缩提取液的pH为3-6，然后过色谱柱，用醇水溶液洗脱，收集醇水溶液洗脱部分，旋蒸除去洗脱液，即得总黄酮类化合物。根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤C中的残渣与有机溶剂重量比优选为1:15-30，例如为1:15、1:20、1:25或1:30，更优选为1:15-25，最优选为1:20-25。根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤C中的有机溶剂选自醇类、DMSO(二甲基亚砜)、乙酸乙酯、丙酮、氯仿中的一种或任意多种的混合物，优选为质量百分比浓度为10-100%的甲醇或乙醇水溶液，更优选质量百分比浓度为50-100%的甲醇或乙醇水溶液，最优选质量百分比浓度为50-80%的乙醇水溶液，例如为50%、60%、70%或80%。根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤C中的三聚磷酸钠的用量为料液质量的0.01-1%，例如为0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%，优选为料液质量的0.05-1%，，其中料液质量是指残渣与有机溶剂的总质量。本专利技术人发现，在提取过程中加入一定量的三聚磷酸钠，可以促进黄酮类物质在提取液中的溶解。根据本专利技术的所述提取方法，所述步骤C中的微波条件为：微波频率为915MHz，微波功率为450-1500W，例如为450W、500W、600W、700W、800W、900W、1000W、1100W、1200W、1300W、1400W或1500W；微波提取时间为1-10min，更优选为5-10min，例如为5min、6min、7min、8min、9min或10min。根据本专利技术的所述提取方法，步骤C中色谱柱的装填组分的总质量与步骤A中原料粉末的质量比为2:1，且在该色谱柱中，以质量计自上而下依次填充30%中性Al2O3、20%酸性硅胶、20%中性硅胶和30%碱性硅胶。作为一种示例性例举，例如以填充总质量为200g的色谱柱为例：在柱子洗脱出口处塞紧脱脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的方法，所述方法包括如下步骤：A、原料粉末的制备取天仙果根，干燥至水含量以重量计降低至10%以下，粉碎，混匀，过筛，得到原料粉末；B、酶处理向原料粉末中加入水和生物酶，其中原料粉末与水的质量比为1:10‑60，生物酶与原料粉末的质量比为0.1‑15:100，从而配制得到酶解溶液，搅拌，并调节酶解溶液的pH为3‑7，然后放入恒温摇床中，摇床转速为100‑120 rpm，在30‑70℃下进行保温酶解60‑150 min，得到酶解液；C、溶剂提取和色谱柱纯化抽滤步骤B中得到的酶解液而得到酶处理后的残渣和抽滤液；然后向该残渣中加入有机溶剂，其中残渣与有机溶剂的质量比为1:10‑50，混合后，再加入三聚磷酸钠，微波提取1‑10 min，然后分离得到提取液，合并所述抽滤液和所述提取液，得到混合液，然后将该混合液浓缩至原体积的1/4‑1/2，，得到浓缩提取液，调节该浓缩提取液的pH为3‑6，然后过色谱柱，用醇水溶液洗脱，收集醇水溶液洗脱部分，真空回收洗脱液，即得总黄酮类化合物。

【技术特征摘要】
1.一种从天仙果中提取总黄酮类化合物的方法，所述方法包括如下步骤：
A、原料粉末的制备
取天仙果根，干燥至水含量以重量计降低至10%以下，粉碎，混匀，过筛，得到原料粉末；
B、酶处理
向原料粉末中加入水和生物酶，其中原料粉末与水的质量比为1:10-60，生物酶与原料粉末的质量比为0.1-15:100，从而配制得到酶解溶液，搅拌，并调节酶解溶液的pH为3-7，然后放入恒温摇床中，摇床转速为100-120rpm，在30-70℃下进行保温酶解60-150min，得到酶解液；
C、溶剂提取和色谱柱纯化
抽滤步骤B中得到的酶解液而得到酶处理后的残渣和抽滤液；然后向该残渣中加入有机溶剂，其中残渣与有机溶剂的质量比为1:10-50，混合后，再加入三聚磷酸钠，微波提取1-10min，然后分离得到提取液，合并所述抽滤液和所述提取液，得到混合液，然后将该混合液浓缩至原体积的1/4-1/2，，得到浓缩提取液，调节该浓缩提取液的pH为3-6，然后过色谱柱，用醇水溶液洗脱，收集醇水溶液洗脱部分，真空回收洗脱液，即得总黄酮类化合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤A中的原料粉末的粒度为20-100目。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤B中原料粉末与水...

【专利技术属性】
技术研发人员：司红康，
申请(专利权)人：司红康，
类型：发明
国别省市：安徽;34