浓碱法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素制造技术

一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法，它采用浓碱法，经过碱解、酶解、脱色、沉淀、纯化、脱水六个步骤从猪鼻骨中提取硫酸软骨素。结果浓碱法与传统提取方法相比较，乙醇用量减少89%左右，纯度提高18％左右，产率提高30%左右。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，属于从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法。
技术介绍
硫酸软骨素（Chondroitinsulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的 软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚 合物，它含有50~70个双糖基本结构，分子量为10000~50000。按其化学组成和结构， 可分为05六、(：、03^等多种同分异构体，药用硫酸软骨素是从动物软骨中提取的，主 要是A、C及各种硫酸软骨素的混合物。CSA和CSC均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2 氨基半乳糖组成，只是硫酸基团位置不同。 硫酸软骨素通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应， 连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸 软骨素为白色或微黄色粉末，具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙 醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落，在酸 性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿 瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由 链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或 氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作 用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛 除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤的细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤 的水分和改善发质。 随着硫酸软骨素生物活性不断被揭示和其应用领域的不断扩展，有关硫酸软骨 素的提取、纯化和分离技术已取得了一定的研究成果，但应用于生产实际还有许多需要改 进和完善之处。目前，硫酸软骨素生产厂家主要采用的方法成本高，产率和纯度低。所以， 本公司开发了浓碱法从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，以降低成本，提高效益。
技术实现思路
本专利技术提供了一种全新的方法(浓碱法）从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，能够有效地 降低成本，并提高产品的产率和纯度。 为此，本专利技术通过以下技术方案予以实现： 1.碱解 将猪鼻骨粉碎，放入80°C水中煮4~6小时，然后按原料(干质量）与15%的氢氧化钠 溶液的比例为1 : 1.75的量加入氢氧化钠溶液，于39°C下提取3小时，然后用盐酸调pH到 2. 6~3.0,双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1 : 1.75的质量比加入15%的氢氧化钠溶 液，于39°C下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液，并测量体积 待用。 2.酶解 将滤液调节pH到8. 5~9. 0,按滤液与胰蛋白酶25 : 1的质量比加入胰蛋白酶，于 50~60°C酶解6小时。 3.脱色 用盐酸调节液体pH到5~7,升高温度到80~90°C，加入0. 5 %活性炭进行脱色反 应，然后过滤。4.沉淀 调节滤液pH至6. 8~7. 2,再加入2. 5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小 时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。 5.纯化 将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后 离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。 6.脱水 最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。 本专利技术的有益效果是：用浓碱法分离猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且增加了纯化过 程，有效地降低了生产成本，并且提高了产品的产率和纯度。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。 1.碱解 称取100千克猪鼻骨粉碎，放入80°C水中煮4~6小时，然后加入15%的氢氧化钠溶液 175升，于39°C下提取3小时，然后用盐酸调pH到2. 6~3. 0,双层纱布过滤；留下滤液，滤 渣再以1 : 1. 75的质量比加入15%的氢氧化钠溶液，于39°C下提取2小时，再用双层滤布 过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液，并测量体积待用。2·酶解 将滤液调节pH到8. 5~9. 0,按滤液与胰蛋白酶25 : 1的质量比加入胰蛋白酶，于 50~60°C酶解6小时。 3.脱色 用盐酸调节液体pH到5~7,升高温度到80~90°C，加入0. 5 %活性炭进行脱色反 应，然后过滤。 4.沉淀 调节水层pH至6. 8~7. 2,再加入2. 5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小 时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。 5.纯化 将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后 离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。6.脱水 最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。 7.对照 称取100千克同一批次的猪鼻骨，采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素。通过对照发 现：传统工艺明显地成本高，效益低。 表1两种工艺产出效果对照表【主权项】1. 一种新的提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法，其特征在于：采用浓碱法将猪鼻骨中 的硫酸软骨素提取出来。2. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：提取猪鼻骨中的硫酸软骨素采用如下 步骤： (1) 碱解：将猪鼻骨粉碎，放入80°C水中煮4~6小时，然后按原料(干质量）与15%的 氢氧化钠溶液的比例为1 : 1. 75的量加入氢氧化钠溶液，于39°C下提取3小时，然后用盐 酸调pH到2. 6~3. 0,双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1 : 1. 75的质量比加入15%的 氢氧化钠溶液，于39°C下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液；合并2次滤液， 并测量体积待用； (2) 酶解：将滤液调节pH到8. 5~9. 0,按滤液与胰蛋白酶25 : 1的质量比加入胰蛋 白酶，于50~60°C酶解6小时； (3) 脱色：用盐酸调节液体pH到5~7,升高温度到80~90°C，加入0. 5 %活性炭进 行脱色反应，然后过滤； (4) 沉淀：调节滤液pH至6. 8~7. 2,再加入2. 5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后， 静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索； (5) 纯化：将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温 下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸 软骨素； (6) 脱水：用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。3. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在乙醇沉淀之前，先用胰蛋白酶酶解， 再用活性碳脱色。4. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在碱解过程中，按原料(干质量）与15% 的氢氧化钠溶液的比例为1 : 1. 75的量加入氢氧化钠溶液以提取猪鼻骨中的硫酸软骨素， 并且提取温度为39 °C。5. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在酶解过程中，按滤液与胰蛋白酶 25 : 1的质量比加入胰蛋白酶。6. 根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在纯化过程中，用于溶解硫酸软骨素的 氯化钠溶液浓度为2%(m/v)。【专利摘要】一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法，它本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法,其特征在于：采用浓碱法将猪鼻骨中的硫酸软骨素提取出来。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冠男，姜德志，迟培升，
申请(专利权)人：青岛九龙生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37