一种检测榄香素纯度的方法技术

本发明专利技术提供一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：色谱柱为：正相硅胶柱；流动相：正己烷或正己烷和异丙醇的混合；色谱柱柱温:20℃～50℃；流速:0.5～2.0ml/min；检测器：紫外检测器，检测波长200～270nm；榄香素样品溶液进样量为：2ul～20ul。该方法首次采取最常用的HPLC法检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用该方法检测榄香素稳定性良好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检测手段，也为用HPLC法在药材中检测榄香素提供了可能性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种榄香素的检测
，更具体来说涉及一种检测榄香素纯度的 方法。
技术介绍
榄香素，英文名：Elemicin,化学名为：1，2, 3-trimethoxy-5-(2-propenyl)_Ben zene，结构式如下：榄香素为挥发油类，为尤色油状液体，存在十紫苏，石冨蒲，细辛，桔草等植物中，建立 榄香素的检测方法，对单体物质研究和紫苏等药材的质量控制有重要价值。目前，有关榄香 素的检测方法均为气相色谱法，如：李晶，GC-MS法对石菖蒲挥发油的质量分析及β-细辛 醚、α-细辛醚的药动学研究.黑龙江中医药大学，2014;孙凌峰，桔草挥发成分的提 取与分析研究.江西师范大学学报，1994;赵晖，紫苏精油的化学成分.国外医学， 2000。由此可见，已报道研究中，榄香素的检测均为GC检测或者GC-MS检测，检测方法单 一，因此需要建立多元化的榄香素检测方法，为榄香素单体的质量控制、药材中榄香素的检 测提供可靠依据。
技术实现思路
本专利技术旨在解决现有技术榄香素检测方法单一的问题，建立了一种除GC或GC-MS 检测以外的检测方法，该方法基于榄香素具有较强紫外吸收，首次采取最常用的HPLC法 检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用该方法检测榄香素稳定性良 好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检测手段，也为用HPLC法在药 材中检测榄香素提供了可能性。 ，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为： 色谱柱为：正相硅胶柱； 流动相：正己烷或正己烷和异丙醇的混合； 色谱柱柱温：20°C~50°C; 流速：〇· 5 ~2.Oml/min; 检测器：紫外检测器，检测波长200~270nm; 榄香素样品溶液进样量为：2ul~20ul。 所述色谱为正相硅胶柱，柱长为150~250mm,内径为4. 6mm，硅胶粒径为5~ 10um〇 所述正己烷与异丙醇的混合中，所述正己烷体积量为90~99%，所述异丙醇体积 量为1~10%。 紫外检测器的检测波长为208nm。 所述正己烷、异丙醇为色谱纯或分析纯。 所述榄香素样品为分析级或试剂级，所述榄香素样品溶液按下述方法配制：精密 称定榄香素样品1. 〇~20.Omg,置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勾，过0. 45um 微孔滤膜或离心取上清液即得。 有益效果 本专利技术首次采取HPLC法检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用 该方法检测榄香素稳定性良好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检 测手段，也为用HPLC法在药材中检测榄香素提供了可能性。 本专利技术通过大量的实践研究，进一步得到了采用HPLC法检测榄香素纯度的检测 条件，将正相硅胶柱与流动相等检测条件有效、严格的控制，使得HPLC法检测榄香素纯度 得以实施；同时采用本专利技术方法检测，定量限和检测限低，检测时间短，仪器设置和操作简 单。【附图说明】 图1为仪器精密度考查色谱图； 图2为稳定性考查色谱图； 图3为实施例1色谱图； 图4为实施例3色谱图。 图1、2、3、4中，横坐标表不时间（min)，纵坐标表不吸光度（AU)。【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】说明本专利技术。 本专利技术中，所用分析级榄香素GC纯度98%，所用试剂级榄香素GC纯度为95%。 采用本专利技术方法检测榄香素纯度的仪器精密度、稳定性考查、检测限和定量限考 查。 检测条件： 高效液相色谱仪：可采用WatersHPLC(2695); 色谱柱：正相硅胶柱； 流动相是：正己烧：异丙醇=99:1; 色谱柱柱温：35°C; 流速 1.Oml/min; 检测器：紫外检测器（UV=218nm); 进样量为：5ul。 (1)仪器精密度考查 榄香素样品溶液配制：精密称定榄香素样品17. 5mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，摇勾，过0. 45um微孔滤膜。 将上述配制的榄香素样品溶液连续进样6次，按照上述检测条件检测分析，得色 谱图如图2所示，将6次检测的保留时间及峰面积统计在下表1中，并计算平均值及RSD值。表1由表1结果可知，所得到的6个色谱图中，各共有峰保留时间、峰面积的RSD值均小于 2. 0%，说明仪器精密度良好，符合检测要求的要求。 (2)稳定性考查 榄香素样品溶液配制：精密称定榄香素样品17. 5mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，摇勾，过0. 45um微孔滤膜。 将配制的榄香素样品溶液分别放置lh，2h，4h，8h，24h后，按照上述检测条件进行 检测分析，得色谱图如图2所示，并将各个检测的留时间及峰面积统计在下表2中，并计算 平均值及RSD值。 表 2由上表2可知，所得到的6个色谱图中，各共有峰保留时间、峰面积的RSD值均小于 2. 0%，说明样品在常温下24h内对样品进行检测都是合理有效的，样品稳定性良好，符合检 测的要求。 (3)检测限和定量限考察 将0. 65ug/ml的标准液进样一次，得到样品的信噪比S/N=48. 7,再将标准液稀5倍进 样，得到其信噪比为S/N=9.7 (~10:1)，即确定榄香素为定量限为0. 13ug/ml，最低检测限 约为 0· 04ug/ml。 实施例1 ，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为： 色谱条件： 仪器：WatersHPLC(2695); 色谱柱：UniSi1-5-100ULTRA，5um，4. 6*250mm; 流动相是采用正己烷与异丙醇混合，均采用色谱纯；其中〇~20min为洗脱，洗脱后 对色谱柱进行柱冲洗和柱平衡以便于后续使用，本实施例在第25~35分钟进行柱冲洗、 36-48分钟进行柱平衡洗脱、柱冲洗，具体洗脱、冲洗、平衡时采用的洗脱溶剂、冲洗溶剂、平 衡溶剂按下表3操作； 色谱柱柱温：35°C; 流速 1. 〇ml/min; 检测器：紫外检测器，检测波长230nm; 进样量为：4ul。表3本实施例采用的榄香素样品为分析级的，具体配置：精密称取样品15. 4mg，放入10ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后，离心取上清液。 按该实施例操作，得色谱图如图3所示，检测结果：96. 96% (归一化法计算） 实施例2 ，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为： 色谱柱为：正相硅胶柱；UniSi1-5-100ULTRA，5um，4. 6*150mm; 流动相：正己烷，正己烷采用分析纯； 色谱柱柱温：40°C; 流速：1. 5ml/min; 检测器：紫外检测器，检测波长200nm; 榄香素样品溶液进样量为：l〇ul。 本实施例采用的榄香素样品为试剂级的，具体配置：精密称取样品1.0mg，放入 l〇ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后，过0. 45um微孔滤膜。 检测结果96.24%。（归一化法计算)。 实施例3 ，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为： 色谱柱为：正相硅胶柱；UniSi1-5-100ULTRA，10um，4. 6*250mm; 流动相：正己烷与异丙醇的混合，其中正己烷为95%，异丙醇为5%，均采用分析纯；洗脱 采用等度洗脱，本实施例在第25~35分钟进行柱冲洗、36-48分钟进行柱平衡洗脱、柱冲 洗，具体洗脱、冲洗、平衡本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测榄香素纯度的方法， 其特征在于：包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：色谱柱为：正相硅胶柱；流动相：正己烷和异丙醇的混合或正己烷；色谱柱柱温:20℃～50℃；流速:0.5～2.0ml/min；检测器：紫外检测器，检测波长200～270nm；榄香素样品溶液进样量为：2ul～20ul。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑皓元，徐仕银，江洪兵，严熏，吴涛，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51