本发明专利技术公开了一种厌氧微生物的富集培养方法。配置好培养基后加入刃天青作为氧化还原指示剂。将培养基放入高压灭菌锅内121℃灭菌20-30min，取出后放入超净工作台冷却至40-60℃备用。向经过处理后的培养基中加入除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐。将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，用无菌水清洗4~6次，放在超净工作台中紫外灭菌20-30min，向注射瓶中注入培养基和接种样品，然后用注射器抽尽瓶中空气，充满高纯氮气，将生理盐水瓶放入恒温培养箱中37℃培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养。本发明专利技术不需借助厌氧培养箱，方便快捷，成本低，能够保证全程无菌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程
，特别涉及。
技术介绍
在厌氧微生物培养过程中，往往需要借助厌氧培养装置进行厌氧微生物的富集培养。但厌氧培养箱具有以下不足:(I)运行成本高，需不断充入氮气和混合气体，以维持厌氧培养箱的正常运转；(2)为了防止臭氧的产生，不能用紫外灯照射灭菌；(3)接种时不能在箱内点燃酒精灯；(4)操作繁琐，需带上长臂手套进行操作，很不方便。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供，使其能够达到快速、无菌富集厌氧微生物的目的。具体步骤为: (I)配置液体培养基溶液，并加入刃天青作为指示剂，当溶液中有溶解氧时显示蓝色或粉红色，无氧状态时显示无色。(2)将步骤(I)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121°C下灭菌20~30min，然后取出放入超净工作台冷却至40~60°C，再加入经过除菌及灭菌的除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐备用。(3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗4~6次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌20~30min，再向空瓶中注入接种样品和步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37°C下培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养。所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1%。所述除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐在液体培养基溶液中的含量为0.3-0.5g/L。所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水。所述接种样品的接种量为1~10%。所述高纯度氮气的纯度为99.999%。本专利技术方法无需借助厌氧培养箱，操作方便快捷，成本低，能够保证全程无菌。【具体实施方式】实施例: 本实施例以富集培养厌氧活性污泥中的硫酸盐还原菌为例，对本专利技术进行进一步说明。 (I)在100ml大烧杯中配置100ml液体培养基溶液，配方如下(g/L):乳酸钠6、蛋白胨和氯化铵(1:1) 1.75、磷酸氢二钾0.05、氯化钠1.0、硫酸镁2.0、硫酸亚铁0.5、氯化钙0.1、氯化钴0.01、氯化锌0.01、维生素C 0.5、无水硫酸钠5，指示剂刃天青，pH值6.5。(2)将步骤(I)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121°C下灭菌25min，然后取出放入超净工作台冷却至50°C，再加入用0.22 μ m滤膜过滤除菌后放入超净工作台中灭菌的除氧剂L-半胱氨酸备用。(3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗5次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌30min，再向空瓶中注入1ml的厌氧污泥和90ml步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37°C下培养4天后发现培养基变黑，且具有硫化氢气味，即完成硫酸盐还原菌的富集培养。所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1%。所述除氧剂L-半胱氨酸在液体培养基溶液中的含量为0.3g/L。所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水。所述高纯度氮气的纯度为99.999%。【主权项】1.，其特征在于具体步骤为: (1)配置液体培养基溶液，并加入刃天青作为指示剂，当溶液中有溶解氧时显示蓝色或粉红色，无氧状态时显示无色； (2)将步骤(1)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121°C下灭菌20~30min，然后取出放入超净工作台冷却至40~60°C，再加入经过除菌及灭菌的除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐备用； (3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗4-6次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌20~30min，再向空瓶中注入接种样品和步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37°C下培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养； 所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1% ； 所述除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐在液体培养基溶液中的含量为0.3-0.5g/L ; 所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水； 所述接种样品的接种量为1~10% ; 所述高纯度氮气的纯度为99.999%。【专利摘要】本专利技术公开了。配置好培养基后加入刃天青作为氧化还原指示剂。将培养基放入高压灭菌锅内121℃灭菌20-30min，取出后放入超净工作台冷却至40-60℃备用。向经过处理后的培养基中加入除氧剂L-半胱氨酸及其钠盐。将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，用无菌水清洗4~6次，放在超净工作台中紫外灭菌20-30min，向注射瓶中注入培养基和接种样品，然后用注射器抽尽瓶中空气，充满高纯氮气，将生理盐水瓶放入恒温培养箱中37℃培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养。本专利技术不需借助厌氧培养箱，方便快捷，成本低，能够保证全程无菌。【IPC分类】C12N1/00【公开号】CN105274002【申请号】CN201510816966【专利技术人】刘宇辉, 蒋敏敏, 解庆林, 李艳红, 黄朋, 贾彬 【申请人】桂林理工大学【公开日】2016年1月27日【申请日】2015年11月23日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种厌氧微生物的富集培养方法，其特征在于具体步骤为：(1)配置液体培养基溶液，并加入刃天青作为指示剂，当溶液中有溶解氧时显示蓝色或粉红色，无氧状态时显示无色；(2)将步骤(1)配置的培养基溶液放入高压灭菌锅内于121℃下灭菌20~30min，然后取出放入超净工作台冷却至40~60℃，再加入经过除菌及灭菌的除氧剂L‑半胱氨酸及其钠盐备用；(3)将生理盐水注射瓶中的生理盐水液用注射器针头抽空，所得空瓶用无菌水清洗4~6次，然后将清洗后的空瓶放在超净工作台中紫外灭菌20~30min，再向空瓶中注入接种样品和步骤(2)处理过的培养基溶液，接着用注射器抽尽瓶中空气后再充满高纯度氮气，密封状态下放入恒温培养箱中于37℃下培养2~5天，即完成厌氧微生物的富集培养；所述刃天青在液体培养基溶液中的质量百分比含量为0.1%；所述除氧剂L‑半胱氨酸及其钠盐在液体培养基溶液中的含量为0.3~0.5g/L；所述无菌水指的是超纯水或经高压蒸汽灭菌之后的水；所述接种样品的接种量为1~10%；所述高纯度氮气的纯度为99.999%。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘宇辉，蒋敏敏，解庆林，李艳红，黄朋，贾彬，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
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