【技术实现步骤摘要】
携带人乳头瘤病毒16型多点突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用
本专利技术涉及生物领域中的载体及其应用,特别是涉及一种携带人乳头瘤病毒16型(HumanPapillomavirusType16,HPV-16)多点突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体(rAAV)及其构建方法与其在制备抗HPV-16感染及其相关疾病(如由HPV-16感染导致的肿瘤)治疗药物中的应用。、其构建方法与其在制备抗HPV-16感染以及相关性疾病的药物中的应用。
技术介绍
腺相关病毒(AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年,Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段,下游3’端片段)(SamulskiRJ,SrivastavaA,BernsKI,MuzyczkaN.Rescueofadeno-associatedvirusfromrecombinantplasmids:genecorrectionwithintheterminalrepeatsofAAV.Cell.33:135-143.)。1984年,Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(Lip)基因和包膜(Cap)基因(HermonatPL,LabowMA,WrightR,BernsKI,MuzyczkaN.Geneticsofadeno-associatedvirus:isolationandpreliminarycharacterizationofadeno-associatedvirustype2mutants.JVirol.51:329-339.Hermonat,P. ...
【技术保护点】
一种携带人乳头瘤病毒16型(HPV‑16)突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,是将腺相关病毒(AAV)载体中的腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除并带有AVV的p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、SV40病毒启动子和beta肌动蛋白启动子(β‑actin)中的任意一个启动子的AVV载体作为出发载体,将多点突变型HPV‑16 E7mm抗原基因插入出发载体中,获得全新的rAVV载体,即携带HPV‑16 E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体(称“E7mm重组腺相关病毒载体”或命名为AAV/HPV‑16 E7mm)。
【技术特征摘要】
2014.08.12 CN 201410395934X1.一种携带人乳头瘤病毒16型(HPV-16)突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,是将腺相关病毒(AAV)载体中的腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除并带有AVV的p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、SV40病毒启动子和beta肌动蛋白启动子(β-actin)中的任意一个启动子的AVV载体作为出发载体,将多点突变型HPV-16E7mm抗原基因插入出发载体中,获得全新的rAVV载体,即携带HPV-16E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体;所述多点突变型HPV-16E7mm抗原基因为以下之一:具有nt175(58aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因,命名为HPV-16E7mm22,其核苷酸序列如序列表中序列3所示;具有nt271(91aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因,命名为HPV-16E7mm23,其核苷酸序列如序列表中序列4所示;具有nt175(58aa)、nt271(91aa)、nt280(94aa)三个突变位点的多点突变型基因,命名为HPV-16E7mm3,其核苷酸序列如序列表中序列5所示;所述腺相关病毒载体为剔除腺相关病毒(AAV)结构基因Rep和Cap的腺相关病毒载体,其携带的启动子为p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子(β-actin)或SV40病毒早期启动子中的任意一个。2.一种构建权利要求1所述重组腺相关病毒载体的方法,包括以下步骤:1)将HPV-16E7抗原的第58、91和94位的半胱氨酸(G)中两个或三个改变为甘氨酸(C),即将HPV-16E7基因开放读码框nt175、nt271、nt280中的两个或三个胸腺嘧啶(T)替换为鸟嘌呤(G),得到具有两个或三个突变位点的多点突变型HPV-16E7抗原基因,统一命名为HPV-16E7mm;2)分别将多点突变型HPV-16E7mm抗原基因插入已将腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除的腺相关病毒载体中,分别得到携带多点突变型HPV-16E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体(AAV/HPV-16E7mm)或携带HPV-16E7抗原基因的重组腺相关病毒载体(AAV/HPV-16E7);所述腺相关病毒载体携带的启动子为p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子(β-actin)或SV40病毒早期启动子中的任意一个。3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤1)具体过程如以下任一所述:一、将E7抗原蛋白的第58和94位半胱氨酸(G)改变为甘氨酸(C),详细过程为将HPV-16E7基因开放读码框nt175和nt280两个胸腺嘧啶(T)替换为鸟嘌呤(G),即将编码半胱氨酸的tgc(nt175-177)和tgt(nt280-282)分别改变为编码甘氨酸的ggc和ggt,得到具有两个突变位点的HPV-16E7抗原基因,命名为HPV-16E7mm22;得到的携带两点突变型HPV-16E7mm22抗原基因的重组腺相关病毒载体命名为AAV/HPV-16E7mm22;二、将E7抗原蛋白的第91和...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘勇,陈巧林,曾昭鹏,高洪吉,龚研浩,董文娟,张慧,
申请(专利权)人:广东拓谱康生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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