一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法技术

一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗获得健壮植株；(5)将所述健壮植株置于MS生根培养基中进行生根培养获得完整带根苗。(6)将所述完整带根苗在室温下炼苗，待表面角质形成后将苗取出，移栽到基质中，生长一个月后移栽到大田。采用本发明专利技术能够得到生根率达80～95％的羊齿天冬优质种苗，有效解决羊齿天冬的规模化育苗问题。

【技术实现步骤摘要】
一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及一种植物繁殖方法，特别是一种天冬组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
羊齿天冬(AsparagusfilicinusBuch.-Ham.exD.Don)别名月芽一支蒿、千锤打、广麦冬、土百部、九重根等，为百合科多年生草本植物，以块根入药，具有润肺止咳、杀虫止痒、咯血止带之功效，并具有较强的抑瘤作用。羊齿天冬目前大多处于野生状态，但由于过度采挖利用，其资源濒临枯竭。人工栽培的羊齿天冬主要靠种子和分株繁殖，但种子发芽率较低，分株繁殖中，每株只能分得3-5株带有根系的枝条，繁殖系数低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良羊齿天冬种苗、满足生产需要。本专利技术的技术方案是：一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成长0.5-1.0cm的茎段，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.1-1.0mg/L2，4二氯苯氧乙酸2,4-D0.5-0.1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA0.1-1.0mg/L的赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到完整带根苗，其中MS生根培养基中添加0.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、的0.5-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(6)炼苗移栽：将步骤(5)得到的完整带根苗在室温下炼苗4-7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。本专利技术的突出优点在于：(1)采用本专利技术所述组织培养方法对羊齿天冬进行繁殖，在短时间内可培育出大量优质羊齿天冬幼苗，其扩繁系数可达20-30倍，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)采用本专利技术所述的培养方法得到的羊齿天冬丛生芽增殖系数达到20-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达95％以上。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案进一步说明。实施例1本专利技术所述的羊齿天冬组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，去外除叶后，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成1.0-1.5cm长的带有一个腋芽的茎段接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。丛生芽增殖率为15.5。(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.2mg/L2.4二氯苯氧乙酸2.4-D、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到完整带根苗，其中MS生根培养基中添加3.0mg/L的萘乙酸NAA、的2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。生根率为80％实施例2本专利技术所述的羊齿天冬的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，去外去叶后，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成1.0-1.5cm长的带有一个腋芽的茎段接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NNA、0g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成长0.5‑1.0cm的茎段，接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1‑0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30d得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.1‑1.0mg/L2，4二氯苯氧乙酸2,4‑D 0.5‑0.1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA0.1‑1.0mg/L的赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到完整带根苗，其中MS生根培养基中添加0.5‑4.0mg/L的萘乙酸NAA、的0.5‑3.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(6)炼苗移栽：将步骤(5)得到的完整带根苗在室温下炼苗4‑7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。...

【技术特征摘要】
1.一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成长0.5-1.0cm的茎段，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓峰，李刚，李林轩，梁莹，缪剑华，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45