用于对尿液样品进行染色和处理的方法和组合物技术

本发明专利技术涉及采用能够在单个步骤中对细胞进行快速染色的粒子造影剂组合物的染色方法。所述粒子造影剂组合物可由一种或多种粒子造影剂和一种或多种透化剂的组合组成，任选包括一种或多种固定剂和其他组分。所述粒子造影剂组合物可包括结晶紫、5PD-Lytic和Proclin 300。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关专利申请的交叉引用本专利申请要求2013年3月15日提交的标题为“AnalysisofParticlesinUrineSamples(对尿液样品中的粒子的分析)”的美国专利申请No.61/799,014的权益，特此以引用的方式将该专利申请全文并入。
本专利技术总体涉及粒子造影剂并且更具体而言涉及供在全自动或半自动设备中使用以对流体样品如尿液样品中的粒子进行区分和定量的粒子造影剂组合物。
技术介绍
尿沉渣分析是用于提供患者健康状况概况的最常进行的诊断测试中的一种。尿液样品可从患者身体获得并保存在试管中供后期处理和分析。尿液样品中某些特征性沉渣(也称为有形成分(formedelement))的出现可能是有临床意义的和/或可指示受试者的病理状况。一般而言，异常的尿液可能含有多种有形成分，例如血细胞、上皮细胞、晶体、管型或微生物。例如，尿液样品可含有血液源性的细胞。红细胞或红血细胞(RBC)可因为泌尿生殖系统中从肾小球到尿道的任何位点处的出血(血尿)而存在于尿液中。白细胞或WBC、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的存在可能具有临床意义。闪光细胞是比重为1.010或更低的低渗尿中见到的一类嗜中性粒细胞。淋巴细胞的存在已被用作移植后肾排异的早期指标。嗜酸性粒细胞与药物诱导的间质性肾炎相关，可能存在源自肾脏或下尿路的黏液丝。尿液样品还可含有上皮起源的细胞。因为正常的剥落，健康个人的尿液中可能会存在也称为肾小管细胞的一些肾上皮细胞。然而，过多肾小管细胞的存在是活动期肾脏疾病或肾小管损伤的表征。在尿液中存在的各种类型的上皮细胞(肾细胞、移行细胞或尿路上皮细胞和鳞状细胞)中，肾上皮细胞是最有临床意义的。它们与急性肾小管坏死、病毒感染(如巨细胞病毒)和肾移植排异相关。它们的存在也随发烧、化学毒素、药物(尤其是阿司匹林)、重金属、炎症、感染和肿瘤而增加。此外，包涵体的存在可见于病毒感染中，例如风疹和疱疹，尤其是巨细胞病毒的感染。尿液还可含有移行上皮细胞或尿路上皮细胞。移行上皮细胞是多层上皮细胞，其沿尿道从肾盂到男性尿道的远端以及到女性膀胱(膀胱三角区)的基部排列。可能难以将它们与肾上皮细胞相区分，但它们通常较大且更近球形。一些移行细胞存在于健康个人的尿液中。增加的数目与感染相关。这些细胞的大的团块或片可见于移行细胞癌症。尿液还可含有鳞状上皮细胞。鳞状上皮细胞沿女性的尿道和男性尿道的远端排列。女性中大量鳞状细胞的存在通常指示阴道污染。尿液还可含有线索细胞。线索细胞是另一类阴道起源的鳞状细胞，可看到污染尿沉渣。该鳞状上皮细胞覆盖或包覆有一种细菌即阴道加德菌(Gardnerellavaginalis)，其存在是细菌性阴道炎的表征。尿液可还含有卵形脂肪体、肾小管脂肪或肾小管脂肪体。这些团粒是充满脂肪或脂质小滴的肾上皮细胞(或巨噬细胞)。该脂肪可以是中性脂肪(甘油三酯)或胆固醇。它们具有相同的临床意义。尿液中卵形脂肪体的存在是疾病异常的表征并且不应该被忽视。它们通常可见于尿沉渣中的脂肪管型和脂肪小滴，并且与如肾病综合征中所见的大量蛋白尿相关。尿液还可含有诸如细菌和酵母之类的微生物。通常，尿液是无菌的，或者不含细菌。然而，某些细菌通常在碱性pH的尿液中见到。相关的沉渣调查结果可能包括WBC(嗜中性粒细胞)和管型(WBC管型、细胞管型、颗粒管型或细菌管型)的存在。尽管感染最经常是归咎于肠起源的革兰氏阴性杆菌，但传染性生物体也可能是革兰氏阳性球菌。此外，酵母可能见于尿液中，尤其是由于阴道污染如来自酵母感染的女性患者的污染。由于尿糖的存在其还与糖尿病相关。酵母是常见的污染物(来自皮肤和环境)，在虚弱和免疫受到抑制或免疫失能的患者中感染是一个问题。传统上，尿液中的沉渣分析已在普通实验室中通过使用显微镜目测来进行。使用这些方法，首先将尿液样品进行离心分离和富集。在某些情况下将因而获得的沉渣进行染色，然后加载在显微镜载片上，并使其在显微镜下经受手动测定和计数。样品制备步骤可包括通过离心浓缩尿液沉渣，并且有时候应用显微镜染色以增强对比，如各沉渣类型如RBC、WBC和上皮细胞之间的对比。在手动计数中，技术人员观察湿法安装的载玻片，从而在可见细胞的类型间作区分或者利用专业的判断通过它们的外观进行区分，并对预定区域内所观察到的不同类型的尿沉渣的数目进行手动计数。多种染料已用于对尿液样品中存在的细胞或细胞结构进行染色。例如，赖特氏染料(Wright'sstain)是已被用于对尿液样品进行染色以在光学显微镜下检查的染料。对尿液样品进行染色涉及多种溶液和步骤依正确顺序的使用以便确保染色剂得以正确施加并且细胞结构得以适当保存。在第一个步骤中可将固定剂施加至样品以保存样品免于降解以及保持细胞结构。然后，在第二个步骤中可将透化剂施加至样品以溶解细胞膜以便让染色剂进入细胞。在第三个步骤中可将染色剂施加至样品以对适当的结构进行染色。可进一步冲洗样品以供观察，或者可采取额外步骤以应用额外的染色、复染色，或者说进行其他操作。以适当的顺序进行所述步骤并持续适当的时间量是重要的。如果在样品固化之前对其进行透化处理，则样品中的细胞结构可能在固化之前被降解，并丧失任何识别最初细胞形态的能力。另外，染色不能在透化步骤之前进行，否则染色剂将不会恰当地透过细胞并对细胞内的结构进行染色。另外，如果任何步骤如固定、透化和染色进行得过快，则细胞的形态可能会丧失和/或细胞及其内部结构可能不会被恰当地染色。而且，可能有必要在其他步骤之前使用pH调节剂，从而确保在尿液天然pH下不能正常作用的组分的适当功能。当前的染色技术需要多个步骤和大量的时间。当前的染色技术需要在造影剂中稀释样品，通常约9份造影剂对应1份样品。至少出于处理一定体积的混合物所耗费的时间考虑，将大体积混合物用于基于图像的分析系统如流式细胞分析系统可能是不可取的。自动化分析仪正变得越来越普及。用于尿液分析的系统的使用在以下专利中进行了大致描述：颁给Villa-Real的标题为“CompactSanitaryUrinalysisUnit”的美国专利No.4,473,530；均颁给McDonald的标题为“UrineCollectionandAnalysisDevice”的美国专利No.3,894,845和标题为“MicroorganismAnalysisDevice”的美国专利No.3,988,209；颁给Schluter<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于对泌尿流体样品的粒子进行染色以供在自动化粒子分析系统中成像的粒子造影剂组合物，所述组合物包含：以足以在染色条件下导致50μM至500μM之间的浓度的量存在的结晶紫；和选自5PD Lytic和皂苷的透化剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/799,0141.一种用于对泌尿流体样品的粒子进行染色以供在自动化粒子分析系
统中成像的粒子造影剂组合物，所述组合物包含：
以足以在染色条件下导致50μM至500μM之间的浓度的量存在
的结晶紫；和
选自5PDLytic和皂苷的透化剂。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中：
所述透化剂是以足以在染色条件下导致约3.5重量％的浓度的量
存在的5PDLytic。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中：
所述结晶紫以足以在染色条件下导致约86μM的浓度的量存
在。
4.根据权利要求3所述的组合物，所述组合物还包含：
至少包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的磷酸盐缓冲盐水。
5.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含抗微生物剂。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中：
所述结晶紫以足以在染色条件下导致约86μM的浓度的量存
在。
所述结晶紫是大约80％的纯度或更高纯度；并且
所述抗微生物剂是Proclin300。
7.根据权利要求6所述的组合物，所述组合物还包含：
氯化钠；和
至少包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的磷酸盐缓冲盐水。
8.一种处理泌尿流体样品的粒子以供在自动化粒子分析系统中成像的
方法，所述方法包括：
将根据权利要求1所述的粒子造影剂组合物和所述泌尿流...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·科瑞明斯，
申请(专利权)人：艾瑞思国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US