本发明专利技术涉及一种高浓度芽孢杆菌的制备方法及其在水产养殖方面的应用。其特征在于，按特定比例将经采集山东日照、青岛近海的海水养殖区原始芽孢杆菌菌种经培养、发酵制得。在此过程中选取合适的培养基及培养条件，使得芽孢杆菌的快速、高效扩培，最终得到高浓度、高纯度的芽孢杆菌。经山东省测试中心检验，按本发明专利技术专利方法制备的芽孢杆菌菌液中菌种总数可达7.5×1010CFU/mL。将本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌应用于池塘养鱼的微生态调控研究上，可极大提高养殖水体氨氮降解率、磷酸盐降解率及亚硝酸盐降解率，净化养殖水质，为今后益生菌制剂的大规模应用提供了使用技术指导，且具有较高的科研及市场应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种高浓度枯草芽孢杆菌菌液的制备方法及其在水产养殖中的应用，属于生物制药领域。专利技术背景为了控制和预防水产病害的流行爆发，长期以来水产病害控制主要依靠各种农药、抗生素、喹诺酮类、磺胺类、呋喃类等化学药物及各种消毒剂。这些化学药物和抗生素盲目使用，虽然在一定程度上可快速抑制或杀死病原菌，有效地控制疾病的发生和蔓延，提高水产养殖动物的生存率。但药物防治存在的弊端也越来越明显，产生了很多负面效应:抗药性病原株的产生，抗生素及化学药物使用量逐渐加大，水产品中药物残留危及食品安全，抗药性病菌菌株质粒转移到人类病原菌中，增加人类疾病治疗的困难程度，给人类健康带来了巨大威胁。因此，多年的粗放式养殖、滥用药物导致水产养殖业的食品安全问题。基于这些负面效应，人们开始寻找绿色安全抗生素和化学药物的替代品用于水产动物疾病的防治。用微生物制剂改善养殖水体微生态环境受到人们越来越多的关注。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisCohn)是一种好氧的革兰氏阳性菌。它能够大量消耗水体中的有机质，将其分解为小分子有机酸、氨基酸及氨，改善水质，为单胞藻提供营养；还可使肠道pH值及氨浓度降低，产生较强活性的蛋白酶和淀粉酶，促进水产动物的消化；也能抑制病原菌的滋生和提高动物的免疫力。鉴于此，枯草芽孢杆菌已被广泛应用于水产养殖中。在水体或饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂，可以有效抑制或杀灭水体中或养殖生物体内的某些有害致病菌，并且能增强有益菌群落，而达到防治水产疾病的目的。现阶段的实验室研究和工业化生产中，存在着发酵周期长、芽孢形成率低、数量少、成本高等一系列问题。
技术实现思路
:本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的问题，提供一种制备高浓度枯草芽孢杆菌菌液的制备方法，该芽孢杆菌菌液在提高水产养殖产品品质方面效果更佳。本专利技术在山东日照、青岛近海的海水养殖区分离得到一株净化水质的枯草芽孢杆菌，其特征如下:表面厚而粗糙，不透明的灰白色菌落，在营养肉汤中形成菌膜及少量沉淀，革兰氏染色阳性，呈杆状，中生椭圆形芽孢，该菌发酵葡萄糖，产酸不产气，不发酵甘露醇、乳糖，V-P测定阳性，硝酸盐还原阳性，明胶阳性，过氧化氢阳性。—种高浓度枯草芽孢杆菌菌液的生产方法，包括以下步骤:本专利技术所涉及的高浓度枯草芽孢杆菌菌液(Bacillus subf ilisCohn)的制备工艺为:按5%的比例将经山东日照、青岛近海的海水养殖区采集的原始芽孢杆菌接种至种子培养基中，在35-55°C下培养12-48h，再以10%的接种量扩大至发酵培养基中，在35-55°C，通气量为5-10L/min，搅拌速度为150_300rpm，pH在7.2?7.4之间，培养72-100h，制得高浓度生产用菌剂。优选地，所述的种子培养基成分如下??每100mL水中含酵母提取物Sg，胰蛋白胨10g，蔗糖20g，磷酸氢二钾2.5g，磷酸二氢钾lg，pH 7.3。优选地，所述的发酵培养基成分如下:玉米粉Sg，尿素5g，酵母膏lg，豆汁10g，KH2PO40.5g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H20 0.15g，MnSO4.H2O 0.02g，聚丙二醇 20002.4g，水lOOOmL，121°C实消灭菌20min，冷却至室温。优选地，所述的培养温度均为37°C，优选地，所述的种子培养基中培养时间为36h。优选地，所述的发酵培养基中通气量为5-10L/min，搅拌速度为150_300rpm，pH在7.2?7.4之间，培养时间为72-100h。发酵完成后的高浓度枯草芽孢杆菌发酵液即为制备好的微生物制剂。本专利技术具有以下优点:本专利技术提供的枯草芽孢杆菌菌液在5%的接种条件下在10h内菌种总数可达7.5X1010CFU/mL(山东省分析测试中心检验)，数量远高于目前现有技术，具有高效和高产的特点。将本专利技术提供的枯草芽孢杆菌菌液应用于池塘养鱼的微生态调控研究上，可极大提高养殖水体氨氮降解率、磷酸盐降解率及亚硝酸盐降解率，净化养殖水质，为今后益生菌制剂的大规模应用提供了使用技术指导，且具有较高的科研及市场应用价值。【附图说明】图1为本专利技术的生产及使用流程图。图2为本专利技术专利生产的枯草芽胞杆菌菌液对池塘养殖水体磷酸盐浓度的影响。图3为本专利技术专利生产的枯草芽胞杆菌菌液对池塘养殖水体亚硝酸盐浓度的影响。图4为枯草芽胞杆菌菌液对养殖水体氨氮浓度的影响。图5为枯草芽胞杆菌菌液使用方式对养殖水体营养盐浓度影响。【具体实施方式】下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。以下实施例用于说明本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂。以下实施例中所涉及的培养基为:(I)促芽培养基??每100mL水中含蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，玉米粉0.5g，酵母膏 0.lg, pH 7.2-7.4。(2)营养琼脂培养基:每100mL水中含蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂15g，pH 7.2-7.4o(3)种子培养基:每100mL水中含酵母提取物8g，胰蛋白胨10g，蔗糖20g，磷酸氢二钾2.5g，磷酸二氢钾lg，pH 7.3(4)发酵培养基:玉米粉8g，尿素5g，酵母膏lg，豆汁10g，KH2P040.5g，K2HPO40.8g，MgSO4.7H20 0.15g，MnSO4.H2O 0.02g，聚丙二醇 20002.4g，水 100mL0实施例11.菌种来源:山东日照、青岛近海的海水养殖区，具体分离方法如下:(I)富集:取5g养殖区底泥放入含有50mL无菌水的三角瓶中(带玻珠)，震荡15min，取5mL菌悬液加入45mL促芽培当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种净化水质微生物制剂，其特征在于，该制剂为高浓度枯草芽孢杆菌(Bacillus subfilisCohn)菌液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑伟，石艳玲，刘晓燕，刘振华，张雄飞，张雨，
申请(专利权)人：山东寰达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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